Штамм claviceps purpurea вкмf-2642 д-продуцент эргокриптиновых алкалоидов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК О 155173 А 1 1/14 51)5 С ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ СВИДЕТЕЛЬСТВУ К АВТОРСН ель следо ых ра твен Вол нин,ова,Кл иева.Па ин,нуфр идетельство СССР 2 И 1/14, 1968, ЕР 8 Р 11 КР 11 КЕЛ ВКМЗРГОКРИПТИНОВЪХ АЛ ИДОВ7) Изобретологии, в к микро ние относитс астности,к п елью изобрет м С 1 ачсерз ии штамма на зерна ржи на лучениюния являетцгрцгеа.среде из алкало идов .ся новый штамПри выращиваразваренного-й ден Изо обиоло ие откос микрию ал гии, в чаидов,Целью иэобштамм С 1 ач 1 севающий повышевьм алкалоидо стност по ка тения является новый рцгрцгеа, обеспечие вьмода эргокриптиносреро ыращивании из развар ень появля постепенн юверхносттамманогося раэзеГОСУДАРСТ 8 ЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Всесоюзный наский институт лекарс(54) ШТАММ СЬАЧ 1 С2642 Д-ПРОДУПЕНТ Культурально-морфологически признаки. При сапрофитном в ВКМ РД на среде зерна ржи на 6-7-й д белый мицелий гриба,растающийся по всей тпоявляется воздушный мицелий, постепенно разрастающийся по всей поверхности зерен, При культивировании насреде агаризованное пивное суслоштамм образует ватообразньп, белогоили сероватого цвета мицелий с большим количеством конидиоспор. При выращивании штамма на искусственной средеТ на 5-6-е сутки роста появляетсямицелий, выделяющий фиолетовый илитемно-Фиолетовый пигмент, окрашивающий питательную среду. Размеры конидиоспор при выращивании штамма наукаэанных средах одинаковые и составляют (4,4-8,8) (2,54-5,28) мкм. ШтаммС 1 ач 1 серз рцгрцгеа ВКМ ГД является строгим аэробом, оптимальнаятемпература роста (24+1) С, ШтаммС 1 ачгсерз рцгрцгеа ВКМ РД обеспечивает повышение урожайности рожковспорыньи в среднем более, чем в 2,5 раза, и увеличение эргокриптиновых алкалоидов соответственно на 10,37 рен. Через 15-20 дней начинает происходить образование конидиоспор, и мицелий приобретает сероватое окрашиваПри культивировании штамма на де агаризованное пивное сусло рост мицелиястановится заметным через 7-10 дней. после посева. На поверхности среды образуется белый или се ватый ватообразный мицелий, трудно отделяющийся от среды. Через 18-23 дня наблюдается образование конидий, и мицелий приобретает сероватый оттеПри выращивании гриба на среде Т, следующего состава г/л: сахароза 100; аспарагин 10; дрожжевой экстракт 0,1; КС 1 0,121 118804 7 Н 20 0,25 РеБ 047 нао 5 0,02; ЕтйО+7 Н О 0,015 Са(ИО) 1,0; КН Р 04 0,25, агар-агар 15; дистиллированная вода 1000 мл, мицелий появляется на 5-6 сут роста и сопровождается образованием фиолетового 1 О и темно-фиолетового пигмента, окрашивающего питательную среду. В дальнейшем мицелий также приобретает гряэ. но-фиолетовый цвет. Размеры конидиоспор штамма (3,4-8,8)х (2,54-5,28) мкм.15 Прегдагаемьй штамм на изученных средах дает обильное конидиальное спороношение .Физиологические признаки.Штамм С 1 ач 1 серв рпгригеа ВКМ 20 ГГ, является строгим аэробом, оптимальная температура роста споро- образования - 24+1 С. Как известно, в природе рожь . заражается аскоспорами спорыньи во время цветения. По этому необходимо искусственное инфицирование растений ржи в Фазу выколашивания путем одновременного накалывания колосьев и опрыскивания заранее приготовленной водной суспензией конидиоспор С 1 ач 1 серв рцгригеа ВКМ ГД, полученных при выращивании штамма на среде из разваренного зерна ржи или агаризованной среде из пивного сусла.Через 8-14 сут на сформировавшихся гифах образуются конидиоспоры,которые выделяются на поверхность колосьев с так называемой "медвяной росой. В том случае, если цветни ржи сов падает во времени с появлением "медвяной росы", то при наличии насекомых и благоприятной погоды происходит вторичное заражение растений ржи конидиальными спорами. Через 40-45 дней с 45 момента заражения цветков на растениях ржи созревают склероции, содержащие алкалоиды, Склероции нового эргокриптинового штамма буровато- фиолетовые, гладкие, менее изогнутые, средней длины 35,5 мм, средним диаметром 3,0 мм.Новым штаммом ВКМ ГД инокулируют в асептических условиях стерильную среду Из разваренного зерна ржи55 в колбах-матрацах емкостью 1,5-2,0 л. Посевы гриба термостатируют при 24+1 С в течение 30 дней. После термостатирования колбы переносят в сукое темное помсщение с температурой72 С, где и хранят до заражения ржи,но не более 2 мес. Рожь заражают впериод начала выколашивания. Инфекционный материал (суспенэию конидиоспор) готовят путем смыва конидиоспорводопроводной водой с мицелия грибана среде из разваренных зерен ржи.Водную суспензию конидиоспор фильтруют через марлю. Концентрация конидиоспор в суспензии составляет не менее5 тыс,в 1 мм. Из одной колбы-матраца получают около 6 л инфекционнойжидкости для заражения,Инфекционную жидкость используютне позднее, чем через 2-3 ч после ееприготовления, Заражение озимой ржисорта НТосуществляют на опытныхизолированных делянках (каящая площадью 1 О и) в четырехкратной повторности вручную с помощью игольчатыхпланшетов, смоченных суспензией кони-диоспор гриба. На заражение одной пелянки используют в среднем по две колбы.В течение вегетационного периодапроводят наблюдение за развитиемспорыньи на ржи (сроки появления "медвяной росы" и цветения ржи) и учитывают интенсивность заражения. Послесозревания рожков спорыньи (через 7недель со дня заражения ржи) их убирают вручную. Полученные рожки подсушивают на воздухе в затененном помещении, Содержание эргоалкалоидов врожках и их компонентный состав определяют известными методами,Биологическая урожайность рожковспорыньи предлагаемого штамма в1985 составила 245,2 кг/га при содержании суммы эргоалкалоидов 0,50 и эргокриптиноных 0,37Предлагаемый штамм С 1 ач 1 серв рагрцгеа ВКМ РД по сравнению с известнымэргокриптиновым штаммом обеспечиваетповышение урожайности рожков спорыньив среднем более, чем в 2,5 раза, имеет более высокое содержание суммыэргоалкалоидов в рожках (0,47 ф содержит более высокое количество наиболееценных эргокриптиновых алкалоидов(0,32 ),Формула изобретенияШтамм С 1 ач 1 серв рпгригеа ВКИ ГД (Всесоюзная коллекция микроорганизмов при Институте биохимии и физиологии микроорганизмов) - продуцент эргокриптиновых алкалоидов.