Способ получения копропорфирина ш

20 3 148294до 4,6. Выпавший осадок копропорфи. рина 111 отделяют Фильтрованием, промывают дистиллированной водой и высушивают в эксикаторе над концентри 5рованной серной кислотой, этерифицируют смесью метанол-концентрированная серная кислота (95:5 об/об),извлекают хлороформом и очищают наколонке с окисью алюминия третьейстепени активности (проявитель хлороформ). Растворитель удаляют упариванием в вакууме, а осадок перекристаллизовывают из смеси .хлороформметанол (1:5 об/об). и получают целевой продукт в форме тетраметилового эфира.Способ обеспечивает получение60-240 мг/л тетраметилового эфиракопропорфирина 111 в расчете накультуральную жидкость,Использование способа иллюстрируется следующими примерами.П р и м е р 1. Готовят питательную среду состава, %: глюкоза 1,0, 25кукурузный экстракт 5,0, аммонийсерно-кислый О, 1, дистиллированнаявода остальное. Среду разливают в ка. чалочные колбы на 750 мл до 100 млсреды в каждую колбу и стерилизуют 30при 0,5 атм в течение 30 мин. Поокончании стерилизации колбы охлаждают до комнатной температуры 18"20 ф С и инокулируют культурой А,81 оЬЕоппз ВКИ В, поддерживаемой впробирках на косяках ИПА. Общийобъем среды рля выращивания 1,1 лКолбы помещают втермостат при28-30 С и проворят инкубацию в аэробных условиях на качалке при числе 40оборотов 180 об/мин,Через 48 ч Ферментации в колбыежедневно вносят глюкозу в виде/50,0%-ного стерильного водного раствора из расчета 1,0 Х глюкозы на объем 45культуральной жидкости, а также доводят рН среды до 7,0-7,2 10,0%-нымстерильным раствором.йаНСО.Через 12 сут выращивания Ферментационную жидкость объединяют и клетки 50бактерий отделяют на центрифуге при6 тыс. об/мин, Получают 1 л густоокрашенного супернатанта. ДоводятрН супернатанта до 3,0 добавлением500%-но уксусной кислоты и вносят 55в него при перемешивании 200 мл активированной суспензии талька в3%-ной уксусной кислоте. Суспенэиюготовят иэ расчета 2 г талька на б4100 мл кислоты, Полноту арсорбции порфиринов на тальк контролируют спектрофотометрически. Через 1 ч тальк отфильтровывают на воронке Бюхнера и промывают на фильтре 3,0%-ным раствором уксусной кислоты. Порфирины элюируют 200 мл смеси ацетон,НС 1 (9: 1 об/об) по прекращения окрашивания элюирующего раствора. Ацетон отгоняют в вакууме и порфирины осаждают из концентрированного ворного раствора доведением его рН ро 4,6 с помощью 20,0%-ного раствора едкого натра. Через 24 ч осадок порфиринов отфильтровывают на воронке Бюхнера и промывают охлажденной дистиллированной водой с рН 4,6. Осадок сушат в вакуум-эксикаторе нар пятиокисью Фосфора в течение 24 ч, а затем помещают в охлажденную смесь метанол-серная кислота (95:5 об/об). Объем этерифицирующей смеси 50 мл, Через 24 ч этерификации, проводимой при комнатной температуре, разбавляют реакционную массу водой до 100 С мл и метиловые эфиры порфиринов извлекают хлороформом (3 раза по 50 мл хлороформа), Хлороформ отгоняют в вакууме до конечного объема 3 мл и хроматографируют порфирины на колонеке с окисью,. алюминия третьей степени активности (размер колонки 2,520 см)элюент хлороформ. Хлороформ отгоняют в вакууме досуха и кристаллизуют пор- фирины из смеси хлороФорм-метанол (1: 5 об/об) .Вес полученного продукта 202 мг, т.пл. 152 С. Коэффициенты.малярной экстинкции в хлороформе имеют следующие значения: 400 нм (179 х 10), 499 нм ( 14 г 10) 532 нм (" 10) 567 нм (7 х 10), 622 нм (5 м 10).П р и м е р 2. ферментацию верут на среде состава, %: глюкоза 1,5, кукурузный экстракт 6,0, аммоний серно-кисльп 0,15, Продолжительность 12 сут. Остальное, как в примере 1. Выход копропорфирина 111 225 мг/л к.ж,П р и м е р 3. ферментацию ведут ,на среде состава, %: глюкоза 1, кукурузный экстракт 1,0, молочная сыво- . ротка 1,0, аммоний серно-кисльп 0,1. Продолжительность Ферментации 4 сут. Остальное, как в примере 1. Выход копропорфирина 111 103 мг/л к.ж.П р и м е р 4. Ферментацию ведут на среде состава, %; глюкоза 1,0, кукурузный экстракт 1,0, молочная46 бП р и м е р 12, Ферментацию ведут, как в примере 3, но питательная среда содержит дополнительно 3% гирролизата оболочек БВК. Продолжитель-.ность ферментации 12 сут. Выход копропорфирина 111 230 мг/л к.ж.П р и м е р 13. Ферментацию ведут, как в примере 1, но концентрация глюкозы составляет 0,57., серно-кисло" го аммония 0,057. Выход копропорфирина 111 195 мг/л к.ж.Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет ускорить процесс биосинтеза (до 12 сут. вместо 17 сут по известному способу).1Формула изобре тения 14829 сыворотка 3,0, аммоний серно-кислый О, 1. Продолжительность ферментации б сут, Остальное как в примере 1, Выход копропорфирина 111120 мг/л к.ж.П р и м е р 5. Ферментацию ведутна среде состава, 7.: глюкоза 1,0,кукурузный экстракт 1,С, гидролизатоболочек белково-витаминного концентрата (БВК) 1,0, аммоний сернокислый - О,1%. Проролжительностьферментации б сут. Остальное, какв примере 1. Выход копропорфирина 111.90 мг/л к.ж. 15П р и м е р 6, Ферментацию ведут на среде состава, 7: глюкоза1,0, кукурузный экстракт 1,0, гидролизат оболочек БВК 3,0, аммонийсерно-кислый 0,1. Продолжительность 20ферментации б сут. Остальное, как впримере 1. Выход копропорфирнна 111106 мг/л к.ж.П р и и е р 7. Ферментацию ведут,как в примере 1, но в качестве продуцента используют штамм АгЬгоЬасег я 1 оЬдйогшз ВКМ В, Выходкопропорфирина 195 мг/л к.ж.П р и м е р 8. Ферментацию ведут,как в примере 1, но в качестве продуцента используют штамм АгггоЪасега 1 оЬЙогспз ВКМ В. Выход копропорфирина 111 180 мг/л к.ж.П 1 и м е р 9. Ферментацию ведутна среде состава, 7.: глюкоза 0,5,аммоний серно-кислый 0,05, кукурузньйэкстракт 1, молочная сыворотка 1.Продолжительность ферментации 4 сут,Выход копропорфирина 111 60 мг/л к,ж,П р и м е р 10. Ферментацию ведут, как в примере 3, но питательнаясреда дополнительно содержит 3% молочной сыворотки. Продолжительностьферментации 12 сут, Выход копропорфирина 111 240 мг/л к,ж, 45П р и м е р 11. Ферментацию ведут, как в примере 2, но питательнаясреда содержит дополнительно 1%гирролизата оболочек БВК. Продолжительность ферментации 6 сут. Выхор 50копропорфирина 111 105 мг/л к,ж,СоставительРедактор М.Недолуженко Техред М.Ди Способ получения копропорфирина 111 путем культивирования продуцента АггпгоЬасеег 81 оЪдйогппз в питательной срере, содержащей глюкозу, питательную основу, соль аммония и вору, с последующим отделением биомассы и выделением целевого прорукта из фильтрата культуральной жиркости, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения биосинтеза, выращивание осуществляют на среде, содержащей в качестве соли аммония серно-кислый аммони а в качестве питательной основы - кукурузный экстракт или смесь его с сухой молочной сывороткой или гидролизатом оболочек белково-витаминного концентрата при следующем соотношении компонентов, мас.%:Глюкоза О, 5-1,5Аммоний сернокислый О, 05-0, 15Питательнаяоснова 2-9Вода Остальное при этом кукурузный экстракт используют в концентрации 5,0-6,0 мас.%, а при использовании смеси кукурузный экстракт берут в концентрации 1- 6 мас.%, молочную сыворотку или гирролизат оболочек белково-витаминного концентрата - 1-3 мас.% от объема среды.С,Листвиновадык,Корректор С.Немар Заказ 2785/21 Тираж 500 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб , д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул, Гагарина,01