Способ получения гидрокортизона

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНРЕСПУБЛИК 119 151) 4 С 12 Р 33/О ВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ГОСУД ПОД ВСЕСОЮ 4 Р М 1Л;А.БЕРЛЯОТ:4 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ С 8 ИДЕТЕЛЬСТВУ б(21) 4060091/23-13(71) Институт биохимии и физиологиимикроорганизмов АН СССР(56) Авторское свидетельство СССРУ 555115, кл, С 07 С 167/08, 1977.(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДРОКО 1 ТИЗОНА(57) Изобретение относится к микробиологической промышленности и можетбыть использовано для получения стероидных гормонов. Цель изобретения -повышение выхода целевого продуктаСущность способа сводится к тому,что осуществляют трансформацию вещества "Я" Рейхштейна с использованиемкультуры Сцгчи 1 аг 1 а 1 опаа. Для этогмицелий и трансформируемый субстратв кристаллической форме инкубируютв буферной среде при 28 С в течение48-168 ч, при этом соотношение сухого мицелия и вещества "Я" Рейхштейнав среде составляет 1:0,2-1, т.е. на10 г/л сухого мицелия - 2-10 г/л сустрата. Выход целевого продукта 5572,47.Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения стероидных гормонов, а именно гидрокортизона. 5Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта.П р и м е р 1. Культуру Сцсчц 1 аг 1 а 1 цпаса ВКМ Р"644 хранят в пробирках на скошенной агаризованной среде сле ующего состава, г/л:Дрожжевой экстракт 4,0Солодовый экстракт 10,0Глюкоза 4,0Агар 15Вода дистиллированнаяСреду с рН 6,2-6,9 стерилизуют при 1 атм 30 мин. При пересеве гриб вырацивают в течение 4 сут при 28 С. Срок ,хранения культуры - не более месяца. 20Споры гриба смывают с поверхности агара стерильной водой, либо средой й вносят в колбы Зрленмейера объемом .750 мп с 50 мл среды следующего состава, г/л: 25СахарозаДрожжевой автолизатМаИО(ИН) НРОК,НРОКС 1МаЗО 7 Н ОВода дистиллированная,рН среды 6,0-6,1 30,02,5 2,0 3,0 1,0 0,5 0,5 30 35Среду стерилизуют. при 1 атм 30 вин, .Культуру выращивают в течение 48"60 чопри 28 С и 220 об./мин. Полученным инокулятом в объеме 10 мп засевают такие же колбы с 50 мл среды и выращи вают культуру в укаэанных условиях. Затем мицелий отфильтровывают, отмывают от питательной среды буфером (0,05 М КНРО - ИаОН, рН 6,0) и используют для проведения процесса 45 трансформации.Реакцию трансформации проводят в 50 мп 0,05 М КН РО - ИаОН-буфера, рН 6,0, куда вносят 5 г отмытого мицелия (0,5 г по сухому весу) и О, 1 г вещества "8" Рейхштейна в кристаллической форме (2 г/л), соотношение мицелия (в расчете на сухой вес) и вещества "Б" равно 1:0,2.Реакционную смесь инкубируют приф28 С в условиях перемешивания и аэрации в течение 48-168 ч, Затем из целой реакционной смеси вьщеляют гидро- кортизон экстракцией хлороформом. Выход целевого продукта в лабораторных условиях равен 72,47, содержание остальных стероидов: 1 И-оксипроизводные вещества "8" Рейхштейна 57.; 6/, 11-оксипроизводные вещества "8" 57П р и м е р 2, Выращивание мицелия гриба Сцгчц 1 аг 1 а 1 цпаа ВКМ Г(инокулята), условия иммобилизации инокулята в Са-альгинатный гель, выращивание мицелия в гранулах Са-альгинатного геля описаны в примере 1.Кристаллический субстрат - вещество "8" Рейхштейна, вносят в среду для трансформации в концентрации 10 г/л, т,е. 500 мг кристаллического субстрата вносят в 50 мл 0,05 М КНРО - НаОН-буфера, рН 6,5, содержащего 0,5 г мицелия (сухой вес) (соотношение 1:1).Выход гидрокортизона при трансформации вещества "Б" Рейхштейна в концентрации 10 г/л после 7 сут инкубации составляет 55-60 , т.е. 5,5 - 6,0 г/л. Содержание остальных стероидов; 14 о( -оксипроизводные вещества "Я" Рейхштейна 15-20%, суммарное содержание других побочных продуктов 8-10 .Для осуществления способа можно испольэовать иммобилизованный мицелий.П р и м е р 3. Культуру С. 1 цпаСаВКМ Р(инокулят) выращивают, какописано в примере 1.Полученный инокулят в объеме 10 мп иммобилизуют в Са-альгинатный гель. С этой целью к 7 мп 6%-ного гомогенного раствора Иа-альгината добавляют 3 мл 0,97-ного раствора хлористого натрия и 10 мп культуральной жидкости, Тщательно перемешивают и при помощи шприца или перистальтического насоса по каплям при перемешивании вносят в 17-ный раствор хлористого кальция, Образующиеся гранулы Са-альгинатного геля (6=2-3 мм), содержащие мицелий, выдерживают в 17-ном растворе хлористого кальция в течение 2 ч, отмы" вают 0,05 М КН РО " НаОН-буфером, рН 6,0, и вносят в колбы с 50 мл ростовой среды. Для сохранения гранул в среду добавляют 1 мл 1%-ного раствора СаС 1 . Выращивание иммобилизойванного инокулята проводят в условиях аналогичных условиям выращивания свободного мицелия. После 48-60 ч роста гранулы геля отделяют от среды, промывают буфером и используют для трансформациии .1411336 на 10-15 Х, суммарное содержание других побочных соединений 57Использование предлагаемого способа позволяет повысить выход целевого продукта, упростить его и повысить концентрацию трансформируемого субстрата. Формула и зобр етения Составитель С.ЛиствиноваРедактор Н.Яцола Техред М.Ходанич Корректор Л.Патай Заказ 3621/24 Тираж 520 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 1 ЬПроизводственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Трансформацию вещества "8" Рейх- штейна в концентрации 2 г/л проводят при 28 С и 220 об./мин.В колбы Эрленмейера объемом5 750 мл с 50 мл 0,05 М КН РО - ИаОН- буфера, рН 6,0, вносят 16,5 г гранул (сырой вес), содержащих 5 г иммобилизованного мицелия и 100 мг кристаллического субстрата. 1 ОВ процессе трансформации из реакционной среды отбирают аликвоты и проводят анализ образуюпрхся стероиднык соединений методом ТСХ. Промьггые гранулы используют для проведения по следующей трансформации,Максимальное количество гидрокортизона накапливается в среде за 48 ч инкубации субстрата с иммобилизованным мицелием. Выход гидрокортизона 20 составляет 60-65 или 1,2-1,3 г/л. Содержание других стероидов: 144-оксипроизводное вещество "8" РейхштейСпособ получения гидрокортизона, включающий трансформацию вещества ,"Я" Рейхштейна с помощью мицелия гриба Сцгчи 1 агда 1 цпаСа с последующей экстракцией и выделением целевого продукта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, вещество "Я" Рейхштей" на используют в кристаллическом виде при соотношении сухого мицелия и вещества "Б" Рейхштейна в реакционной среде 1:0,2-1, а экстракции подвергают реакционную среду с мицелием.