Способ индикации вирусов

учно-исследовапидемиологнн и Л.В. Ккет кова,) Люминисцирующие а с. 104-129,КА 1 ЦВ ВИРУСОВ тносится к вирус а ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ ССС ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТШИЙ И ОТНЯТ ИСАНИЕ ИЗОБРЕ 6 ТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(57) Иэобретение ЩЗОЩ А логии. Цепь иэобретения - ускорениеиндикации вирусов. Стафилококк обрабатывают иммунной сывороткой. Готовят иаэок, на который наносят исследуемый вирус, содераащий материал,обрабатывают его иммунной противови"русной сывороткой и вйдоспецифическим иммуноглобупином, меченным флюоресцеиниэотиоционатом. По специфическому свечению на поверхности стафилококка осуществляют индикацию вируса, Проведение способа сокращается до 3-4 ч,ОбГС "Еггц ОТИОСгтсц к ггггРс ологигг в гггстцости к дггГггос тик. вирусных ццфекццй, гаггрггмор ротавируснсй,5еггг гс изобретения является ускорс кге Индикации вирусов методом фгго -Оресцирующих антител.Способ осуществляется спедуюгцимобразом. Стдфцлококк предварительно 10Обрабатывают гггунггой сывороткой. Напредметном стекле готовят мазок, накотрьй наносят иссл дуемый вируссодерждщий материал, брдбатьВают иммунной протцвовцрусной сывороткой и 15вцдоспецифцческим гомуггоглобулицом,мечецньгм фцюорегцеиццзотцопиондтом(1 ГЕЦ) . Пцдцкдцию вируса осуществляготпо Гпег;цфи зскому сгегеггию цд поверхности стдфцлококкд. 20П р и м е р 1. Стдфцлококк сухой,согер.дгдиг белок Л, производства Ленц;г рддского ИИЭ 1 цм. Пастера, реГггдрдтируют в 2 мл дистиллированнойводы. 0,17-ную Взвесг. стафилококка 25смешивают с рдвггггг объемом кроли;ьей иммунной сывороткц к ротдвирусу,.Г . ц сгериодгггескг встряхивают.а тем сец ггбщгггсггроггдггную дцтителдмгг гзвеь стдфгглококкд тргггсдг)г От"ггггвают в 2 мл физиологи еского раствора гсС 1, Отделяя кдждьг" раз взвеськлеток с г раствора цецтрифугцровднем при 3000 Обгмгггг ц течение 10 мии.35После этого доводят взвесь стафилококкд до гервоначальцой концентрации(О, 1 Х) тем же раствором дС 1, тщательно Встряхивдюг, петлей переносят наОбезжиренное разгрдфленцое предметноестекло, делают по 8 мазков на каждомиэ них подсушивают на воздухе, фикУосируют в ацетоне 15 миц при 4 С.На фиксированные препараты наносят каплю г 2 ного раство) д бычьего 45.ыиороточкого альбуминд нд дистиллированной воде помещают во влажную камеру г;ри 37 С ца 30 миц, затем 10 миндромывают в дистиллцрог:анной воде,подсушивают на Воздухе, Этд маниг 1 уляцив направлена на предотвращение не 50специфической сорбциц вируса и антител поверхностью стдфилококка.Ва пргготовленцые такгвг блазомпрепараты наносят каплю цсследуемомого материала, инкубируют во влдж 55цой камере при 37 С 30 мин, 1 О минпр.мывают ь листиллирспднггой воде,ПОХ 1 СУПИВаю К а ВОЗ ЧУХЕ .,О ТОМ КДНОСЯТ Кагпцл ГММУКЦОй СЫВОРОТКгг М РСКОйсги кгг к ротавцрусу ц мдггггггуляцгггг спре 4 рдтм (ццкубацця, промывкд,сушка) повторяют. 1 а высушенные стекла цдкосят каплю меченного ФИТЦ иммукоглобулггцд против ггтобулинов морскоц свццкц в смеси с родамццом, стекла помещают на 30 мин во влажную камеру цри 37 С с последующей отмывкойв течение 20 мцц ц высушивают 1-2 минна воздухе.гНдикацию вируса осуществляют влюмццесцецтном микроскопе типа ЛОМАМили МЛ ггод цммерси нцым объективом(х 90) прц светофильтрах, определяемых характером флюорсхромов в сс, таг люминесцирующей сыворо гки. Времяиндикации вирусов це более 4 ч.р и м е р 2. Па препарат, содержащий комплекс - стафилококк-крали п,я иммунная сыворотка к ротавирусу, наносят цзвестныц ротдвцрус, нммучую сыворотку морской свинки кротдвцрусу ц соответствующий антивидоной иммуноглобулиц, меченный флюор:сцеигзотиоциондт (ИТЦ) в смесис годдмином (положительный контроль).Сцердциц Осуществляются как в пример: г., Бремя индикдциг ротдвцрусовне более 3 ч.р ц м е р 3. 1 а препарат, содерж;.щий комплекс - стдфг 1 лококккр.лич я игг:гунггдя сьгворотка к ротавирусу, на ко сят среду 199, и щуиггуюсыворотку морской свинки и соответстггугсгщиг дцтивидовой иммуцоглобулинмеченный ИТЦ, в смеси с родамином(отрицательный контроль), Операцииосуществляют как в примере 1. Времяиндикации не более 3 ч.Положительными, т.е. содержащимивирус, считают препараты с зеленымсвечением на поверхности отдельныхили группы стафилококков. В пробах,не содержащих ротавцрусный антиген,стафилококк окрашивается красноватоОранжевым цветом,В предлагаемом пособе поставленная цель - ускорение исследований поиндикации вируса с помощью И 1 А - достигдетсл эа счет исключения стадиирепродукции вируса в инфицированнойкультуре клеток, цд что обычно затрачивается Около 2 сут, Проводящиесявзамен этого операции со стафилококком занимают не более 3-4 ч.упрощение исследованиг достигается з г счет исключцця работы с куль1393085 Составитель В. ЛитовченкоРедактор Л, Народная Техред М.Ходанич Корректор Л. Пилипенко Заказ 2569 Тираж 428 ПодписноеВНИИПИ Государственного. комитета СССРпо делам изобретений и открытий13035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 турой клеток, требующей специальных условий, в частности обеспечения стерильности, наличия оборудования, питательных сред, реактивов. Операции со стафилококком не требуют специаль 5 ных условий, их можно проводить в любой латоратории и в полевых условиях.К достоинствам способа относится возможность заготовки впрок и длительного хранения консервированного препарата стафилококка, чего нет при использовании культуры клеток, Использование коммерческого препарате повьппае т, кром того, и стандартность исследований.Формула и з о б р е т е н и яСпособ индикации вирусов, включающий нанесение на чувствительный субстрат вируссодержащего материала и меченного флюоресцеинизотиоционатом иммуноглобулина, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью ускорения индикации, в качестве чувствительного субстрата используют фиксированные клетки стафилококка штамм Сатрап , обработанные иммунной сывороткой.