Способ дифференциальной диагностики хронического гепатита у детей

(54) СПОСОБ ДЕФФЕРЕНЦНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГОТЕЙ(57) Изобретне, точнее кретения - по НО ТИ ИАГУ ДЕстную скаерхности того п рификацию копредплечья вопределениямакрофагов.слой эпидермкапилляров. с целью в ядрах снимают и петель ые участеклами. По епатит и с, 272 ки покрывасодержаниюоценивают его и279. клет ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ССС ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫ(71) Научно-исследовательский институт педиатрии, 2-й Московский государственный медицинский институт им. Н.И.Пирогова и, Научно-исследова тельский институт эпидемиологии и микробиологии им, почет, акад. Н,Ф.Гамалеи(56) Блюгер А.Ф. Вирусный гсходы, Рига- М 1970,ение относится к медиципедиатрии. Цель иэобвышение точности способаоводят поверхн жи передней по верхней трети содержания РНК Скарификатором иса до видимос Скарифицирован стерильными с НК в препаратаИзобретение относится к области медицины,а именно к педиатрии,Целью изобретения является повышение точности способа.П р и м е р 1. Ребенок П.,8 лет В два года перенесла вирусный гепатит В, После выписки из стационара длительно сохранялись жалобы диспептического, астено-вегетативного характера, гиперферментемия. С 5 лет диагносцирован хронический гепатит. При поступлении состояние средней тяжести, отмечались бледность, вялость, снижение аппетита, на коже проявления геморрагического синдро" ма в виде экхимозов,телеангиоэктазии и пальмарная эритема, гепатомегалия (1,5-2 см ниже реберного края), печень плотной консистенции. По другим органам патология не выявлена, В биохимическом анализе крови отмечалось незначительное увеличение тимоловой пробы - до 11,4 ед (при норме 4 ед.), на фоне нормальных показателей билирубина и Ферментов, В общих анализах крови и мочи без патологии, В крови обнаруживался, НВЯ А 8. В иммунологическом статусе выявлено снижение показателей Т-лимфоцитов; Т-акт. до 13(норма 20,87) Т-общ, до 347. (норма 69,8 ), повышение уровня иммуноглобулинов 18 С до 3000 мг(при норме 1230 мг 7), в пробе "кожного окна" снижение хемотаксиса макрофагов до 327 (при норме 75 ).С целью определения содержания РНК в ядрах.макрофагов проводят поверхностную скарификацию кожи передней поверхности предплечья в верхней трети, предварительно обработанной .этиловым спиртом. Скарификатором снимают слой эпидермиса в двух участках (размером 0,5 х 0,5 см) до видимости петель капилляров (повреждение капилляров и кровотечение не допускаются). Скарифицированные участки покрывают двумя стерильными стеклами, которые закрепляют лейкопластырем, Через 24 ч от начала реакции стекла снимают. Один из отпечатков после Фиксации этанолом обрабатывают РНК-азой, затем оба отпечатка Фиксируют в смеси абсолютного этилового спирта и ледяной уксусной кислоты в соотношении 311 в .течение 11-12 мин, Затем с целью удаления следов уксусной кислоты и предотвращения кислотного гидролиза нуклеиновых кислот препараты переносят в этанол на 5-6 мин. Фиксированные препараты доводят до 5 воды через серию спиртов понижающейся концентрации 96, 75, 50,257), после чего помещают в0,2 М ацетатный буфер рН 4,2 на 23 мин, В дальнейшем препараты окраши вают в рабочем растворе акридинаоранжевого 1:10000 в 0,2 М раствореацетатного буфера рН 4,2. Время окрашивания 2 мин с последующей отмывкойв ацетатном буфере рН 4,.2 и диффе ренцировкой в растворе акридина оранжевого с абсолютным спиртом 1:100000в течение 20 с. После обработки препаратов РНК-азой РНК из ядер удаляется. Предварительно фиксированный 20 препарат (отпечаток эксудата с макрофагальными клетками с второго скарифицированного участка кожи) инкубируют в растворе РНК-азы в течениеа1,5 ч при 37 С, после этого проводятокрашивание акридином оранжевым. Окрашенные препараты микроскопируют влюминесцентном микроскопе и флюорометрируют. Содержание РНК в данном примере 0,20 ед. Диагностируют хрони ческий пассивный гепатит.П р и м е р 2Ребенок Т. 4 лет11 мес., перенесла тяжелую форму ви-русного гепатита, после которогосохранялись патологические симптомы.35 При поступлении состояние ребенкасредней тяжести, выражены: астения,снижение аппетита, печень .плотнаяи выступает из-под реберного края на4-5-с 3, селезенка пальпируется у 40 реберного края, выслушивается систолический шум. В крови обнаружен НВЗА 8,В биохимичсском анализе крови увеличение АлАт до 29 ед, (норма до 5 ед.)и фруктозо-фосфат альдолазы до 4 В 8 ед, (норма до 3 ед,). Снижениепротромбинового индекса до 647, В иммунологическом статусе снижение Т-обш,лимфоцитов до 437 (норма 69,87),хемотаксиса макрофагов до 357. (норма В 0 757). Содержание РНК макрофагов асептической воспалительной реакции0,15 ед. Диагноз: хронический агрессивный гепатит высокой степени активности.55Клиническая оценка текущего патологического процесса известным способом малосимптоматична в ряде случаев (как при персистирующем хрониЗаказ 281/42 Тираж 847 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5. Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 3 13 ческом гепатите, так и при активном хроническом гепатите), а также субьективна с точки зрения врача в оценке симптомов. Биохимические методы оценки текущего патологического процесса не дают в сравнении с предлагаемым способом, достаточной продолжительности прОгнбза, так как регистрируют лишь слабо выраженный синдром цитолиза в период высокой активности патологического процесса/ непосредственно в печени, кроме того, показатели биохимических тестов могут быть нормальными даже при активно текущем процессе в печени у больных с хроническим гепатитом.Предлагаемый способ позволяет по содержанию РНК в препаратах клеток оценить тяжесть поражения печени. Формула и з о б р е т е н и яСпособ дифференциальной диагностики хронического гепатита у детейпутем исследввания клеток, о т л и -ч а ю щ и й с я тем, что, с цельюповышения точности способа, контактным методом получают препарат клетокмакрофагов кожи, окрашивают акриди- .новым оранжевым на РНК, по содержаЭнию которрй определяют активность 1 Б процесса ипри содержанииРНК 0,19 +0,03 ед. диагносцируют хроническийпассивный гепатит, а при содержанииРНК 0,150,01 ед диагносцируют хронический активный гепатит.