Способ определения церулоплазмина в сыворотке крови

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК 9) (11 4 С 01 И 33/48 ТЕТ СССРИ ОТНРЫТИИ ОБР НИЯ Т твен ство СССР 48, 1983. ЦЕРУЛОПЛА я к биеским хиабобреба и ти спос об за сч 00 ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИ ОПИСАНИЕ ИЗ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТ(71) Черновицкий госудамедицинский институт(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (57) Изобретение относи мии, в частности к клини раторным исследованиям. тения - повышение точно при длительном хранении добавления к пробе раствора этонияв ацетатном буфере. Для этого в двеопытные и одну контрольную пробиркивносят 2 мп ацетатного буфера, О, 1 мписследуемой биологической жидкостии 0,1 мл 0,4-1,27-ного раствора этония в ацетатном буфере, Пробы взбалтывают, закрывают резиновыми пробками и помещают на хранение в холодильник при 5-10 С. В последующие120 дней аналогично подготовленныепробы накапливают в холодильнике.Затем не позже 120-го дня определяют активность церулоплазмина во всехпробах, на что затрачивается значительно меньше рабочего времени,2 табл.800 1 1273Изобретение относится к биохимии, в частности к клиническим лабораторным исследованиям.Целью изобретения является повышение точности способа при длительном хранении проб за счет добавления к пробе раствора этония в ацетатном буфере.Способ осуществляется следующим образом. 1 ОВ две опытные и одну контрольную пробирки вносят 2 мл ацетатного буфера, О, 1 мл исследуемой биологической жидкости и 0,1 мл 0,4-1,27.-ного раствора этония в ацетатном буфе ре. Пробы взбалтывают, закрывают резиновыми пробками и помещают на хранение в холодильник при температуре 5-10 С. В последующие 120 дней аналогично подготовленные пробы на капливают в холодильнике. На 120-й день или в любой удобный для научного работника день, но не позже 120- го дня, определяют активность церулоплазмина во всех пробах, на что за трачивается значительно меньше рабочего времени.П р и м е р. В две опытные и одну контрольную пробирки вносят 2 мл ацетатного буфера, 0,01 мп исследуе- ЗОомой биологической жидкости и 0,1 мл раствора этония. Пробы взбалтывают, закрывают резиновыми пробками и помещают на хранение в холодильник при 5-10 С, В последующие 120 дней аналогично подготовленные пробы накапливают в холодильнике. На 120-й или в любой удобный для научного работника день, но не позже 120-го дня, определяют активность церулоплазмина во всех накопившихся пробах, для чего в контрольные пробирки добавляют 1 мл раствора сульфита натрия и взбалтывают их содержимое. Во все пробирки вносят по 1 мп и-фенилендиамина, встряхивают и помещают их в водяной ультратермостат с температурой 37 С на 60 мин, взбалтывая их через каждые 2-5 мин. При этом церулоплазмин взаимодействует с п-фенилендиамином и превращает его в продукт синего цвета. Через 1 ч во все пробирки приливают по 7 мл н-бутилового спирта, в результате чего останавливается ферментативная реакция в опытных пробирках. Пробирки закрывают пробками, интенсивно встряхивают 30 с, помещают в ледяную баню на 10 минут, после чего центрифугируют со скоростью 1500 об/мин в течение 10 мин, отсасывают верхнюю бутаноловую фазу, переносят ее в кювету с толщиной рабочего слоя 10 мм и колориметрируют на ФЭК при длине световой волны 582 нм (фильтр Р 7) . Для выражения активности церулоплазмина в условных единицах среднюю арифметическую величину экстинкции, полученную при колориметрии двух параллельных опытных проб против контроля, умножают на 100 и делят на количество миллиграммов белка, содержащегося в 0,1 мл биологической жидкости. Содержание белка определяют по одной из известных методик.В табл, 1 представлена зависимость экстинкции проб при определении активности церулоплазмина по известному способу (сыворотка Р 4) от сроков хранения проб, состоящих из 2 мл ацетатного буфера и О, 1 мл сыворотки крови человека, в холодильнике при 5-10 С.В табл. 2 приведены экстинкции, полученные по предлагаемому способу в разные сроки хранения, проб, состоящих из 2 мл ацетатного буфера, О, 1 мл сыворотки крови и 0,4 мл этония. Проведенные эксперименты в процессе испытаний предлагаемого способа подтверждают его экономический эффект, выражающийся в значительном снижении себестоимости одного анализа на активность церулоплазмина. Использование предлагаемого способасущественно экономит рабочее время научного сотрудника, а также затратыэлектроэнергии и облегчает выполнение научной работы. Формула изобретения Способ определения церулоплазмина в сыворотке крови путем добавления кпробе растворап-фенилендиамина, экстракции продукта реакции н-бутанолом с последующим фотометрическим измерением экстракта, о т л и ч а - ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа при длительном хранениипроб,к пробе предварительно добавляют 0,4-1,5%-ный раствор этония в ацетатном буфере.