Способ выявления антигенов

А 1 Ю и 514 А 61 ОО ИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ПИСА АВТОР ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторному выявлению антигенов в организме. Цельизобретения - упрощение техническойпостановки способа выявления антигеновВ пробирку с цитратной кровью добавляют дистиллированную,воду. Суспензию клеток центрифугируют надосадочную жидкость отса"сывают. Осадок лейкоцитов ресуспендируют. К взвеси лейкоцитов добавляют 0,1-0,2 мл взвеси зритроцитарногоантигенного диагностикума. Смесьинкубируют при температуре 37-37,5 фСв течение 5-6 мин и центрифугируютНадосадочную жидкость удаляют, оса"док ресуспендируют в интактной сыворотке. Из полученной суспенэииклеток делают мазок. Высушивают мазок, фиксируют его и окрашивают поРомановскому-Гимза. Под микроскопомв мазке подсчитывают число роэеткообразующих клеток. 2 табл.. Изобретение относится к медицине,а именно к лабораторному выяв 1 ениюантигенов в организме.Цель изобретения - ускорение иупрощение технической постановки 5способа выявления антигенов при сохранении его специфичности и чувствительности.Способ осуществляют следующимобразом.1 ОЗабирают одну-две капли крови(0,05-0,1 мл) иэ пальца обследуемогочеловека в центрифужную пробирку с0,1-0,2 мл 57.-ного свежеприготовленного раствора цитрата натриядляпредупреждения свертывания крови.После тщательного встряхивания про",бирки в нее добавляют для лизирования эритроцитов 0,8-0,9 мл дистиллированной воды. Суспензию клетокцентрифугируют 5-6 мин при1500 об./мин, после чего недостаточную жидкость отсасывают пипеткой,а осадок лейкоцитов ресуспендируютв 0,1-0,2 мл изотонического раствора хлорида натрия, К полученнойвзвеси лейкоцитов добавляют 0,10,2 мл 0,57, -ной взвеси эритроцитарного антигенного диагностикума иннкубируют смесь при 37-3,5 С в 30течение 5-6 мин, после чего ее центрифугируит при 1500 об./мин в течение10-15 мин, надосадочнуюжидкость удаляют с помощью пипетки, а осадок ресуспендируют в капле любой интактной сыворотки (бычьей, лошадиной, человеческой)Из полученной суспензии клеток делают мазок, который высушивают, фиксируют в метиловом (3-4 мин) или этиловом (20-25 мин) спирте и окрашивают по Романовскому-Гимза, Просматривают в мазке под микроскопом при900-кратном увеличении 100 лимфоцитов, отмечая среди них число (в 7)лейкоцитов, фиксировавших на себе 45три и более эритроцита (розеткообразующие клетки РОК). 20 50 55 П р и м е р 1. Через 10 мин после подкожного введения крысам прозерина (50 мкг/кг) из хвоста получено О,1 мл крови для осуществления . предлагаемого способа, после декапи тации собрано 5 мл крови для осуществления известного метода розеткообразования, Установлено, что в крови интактных крыс число розеток, специфичных прозерину, составляло соответственно 6,2+1,12 и 6,0+0,80%,732а в опыте через 10 мин после введения прозерина оно достигало соответственно 30,22,74 и 29,0+1,933.Сравнительный анализ двух способоввыявления антигена показал, чтопредлагаемый способ не уступает почувствительности и специфичностиизвестному, о чем свидетельствуетпрактически равное число иммунныхлимфоцитов, образующих розетки сэритроцитами, сенсибилизированнымипроэерином, которые выявлены какпредлагаемым, так и известным способами,П р и м е р 2. В крови крыс, которым вводят под кожу 0,3 мл коммерческого раствора риккетсиозногоантигена Провачека, с помощью предлагаемого способа выявлено 21,3++1,29 Е РОК, с помощью известного -23,4+1,4 Е, иммунных к антигену Провачека,Обследование крови детей больныхдизентерией и высевающих палочкуФлекснера показало, что число РОК,специфичных антигену последней колебалось в пределах от 30 до 407,тогда как число РОК, специфичныхантигенам палочки дизентерии Зонне"или Григорьева-Шига - в пределах 10%.Напротив, если возбудителем болезниявлялась палочка дизентерии Зонне,то число РОК, специфичных ее антигену, составляло около 407., а специфичных антигенам других возбудителейкишечной группы не превышало 107.,При доказательстве того, 4 то предлагаемый способ не утрачивает специфичности по сравнению с известнымУустановлено, что в крови животныхУкоторым вводился сыпно-тифозный антиген Провачека, обоими способами невыявляются лимфоциты, иммунные кРезультаты осуществления предлагаемого способа с использованием 0,05 мл исследуемой крови, О, мл диагностикума, инкубацией длительностью 5 и 6 мин и температурой 3,0 37,5 С, приведены в таблет.1. Результаты осуществления предла"гаемого способа с использованием 0,1 мл исследуемой крови,.0,2 мл диагностикума, инкубацией длительностью 5 и 6 мин и температурой .37,0 и 37,5"С привецены в табл. 2., Ж, Рауш Подписноеого комитета СССРний и открытийская наб., д.4/5 изводственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная,4 3 2Преимущества способа заключаются в технической простоте его исполнения, быстроте осуществления (60 - 90 мин), -практически немедленном выявлении с его помощью антигенов, попавших в организм, необходимости для анализа микрообъема крови, забираемой из пальца обследуемого, специфичности, высокой чувствительности, возможности использования в случае выявления микробных антигенов промышленных эритроцитарных диагностикумов, необходимости минимального количества доступных реактивов и оборудования, отсутствии необходимости привлечения для осуществления способа высококвалифицированного пер,сонала. Простота исполнения и экспрессность способа позволяет реализо 68173 4вать его в любых, в том числе и полевых условиях, дают возможность оченьраннего и быстрого выявления антигенов в организме. 5 Формула изобретения Способ выявления антигенов путемдобавления к клеткам периферической, р крови эритроцитарного антигенногодиагностикума с последующей инкубацией и подсчетом розеткообраэующих клеток, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа, из 0,05-0,1 мл периферической крови выделяют лейкоциты, добавляют к ним 0,1-0,2 мл диагностикума, инкубируют при 37-37,5 С в течение 5- 6 мин и центрифугируют.20Таблица 1