Штамм 9-тест-культура для определения -фенилаланина

с сссссссссссссс се сРЕСПУБЛИН ЫЙ НОМИТЕ ТЮИЙ ИГОСУД АРСТВЕННПО ДЕЛАМ ИЭ с" гс, с Ч ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ВИДЕТЕЛЬСТВ АВТОР(7 Р.А (53 (56 Васс 97 3864844/28-1301.03.8530.08.86. Бюл. У 32Белорусский ордена Трудовогоого Знамени государственныйрситет им. В.И. ЛенинаН,П. Максимова, И.Н. ОлехновичЖелдакова и Ю.К. Фомичев663.18 (088.8)Авторское свидетельство СССР1464, кл. С 12 Р 13/22, 1985.г 8 еу Я Мапиа 1 оЕ Вейега 1 паедчагю 1 ояу. 8 СЬ Ед, Ва 1 гдаоге,159 4 С 12 Р 13/22 // С 12 В. 1 й 3 С 2 Р 22(54) ШТАММ РЯЕСЭОМОИАЯ ЯРЕС 1 ЕЯ М 9ТЕСТ-КУЛЬТЗРА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ Ь-ФЕН ИЛЛЛАНИНА,(57) Штамм Рвеийошопав вресдев М 9(коллекция музея культур промьшиенных микроорганизмов Института "ВНИгенетика", коллекдионный номерВ) - тест-культура для определения Ь-фенилаланина,Штамм Рзеайошопая яресез М 9 хранится в Центральном музее промышленных микроорганизмов "ВНИИгенетика" (Москва), У В.Штамм Ряецйошопая зр. М 9 имеет следующие характеристики. 1 12Изобретение относится к микробиологической промышленности и касаетсянового штамма, являющегося тесткультурой для определения Ь-фенилаланина.Целью изобретения является получение нового штамма Рзецйошопаз зрес 1.ез М 9 специфичного и чувствительного к содержанию .-фенилаланина всреде, с помощью которого можновыявлять продукцию Ь"фенилаланина,начиная с 0,5 мкг/мл, на простых посоставу жидких и агаризованных минеральных средах среди различных группмикроорганизмов, в том числе ассимилирующих низшие спирты (этанол и ме"танол) в качестве источника углерода и энергии,Предлагаемый штамм Ряецйошопаззресея М 9 получен с. помощьюмутагенеза Б-метил-М -нитро-И-нитрозогуанидином и является ауксотрофным фенилаланинэависимым мутантомштамма дикого типа Рзецс 1 ошопаз зресез, выделенного из сточных вод Минского завода медпрепаратов.Идентификацию мутации РЬе у бактерий Рзецйошопая зресея М 9 осуществляли по отсутствию способностирасти на минеральных средах безЬ-фенилаланина. Минимальная концентрация Ь"фенилаланина, обеспечивающая рост бактерий этого штамма вжиДких и агаризованных минеральныхсредах, соответствует 0,5 мкг/мл. Морфологические особенности штамма, Клетки прямые, палочковидной формы с округленными концами О,бф 2-3 р подвижные с 2-4 монополярными жгутиками, грамотрицательные, спор не образуют.Культуральные признаки. Колонии на агаризованных питательных средах (мясо"пептонном агаре, Кинг В агаре) гладкие, плоские, круглые, край ровный, серовато"белые. Через 24 ч при 28 С образуют колонии размером 2" 3 мм. Рост по уколу в МПА умеренный в основном на поверхности среды, В жидких питательных средах образует интенсивную муть. 54005 2Хорошо растет на минеральных средах простого состава, дополненныхЬ-фенилаланином, и не нуждается вдобавлении ростовых факторов и другихаминокислот.Физиолого-биохимические признаки.По отношению к кислороду - облигатный аэроб. Оптимальная температурароста 28-30 С, рН среды в пределах10 6,8-,8, Азот утилизирует в виде солей аммония, мочевины, нитратов.Пигменты. Образует желто-зеленыйводорастворимый флюоресцирующийпигмент на Кинг В агаре, Внутрикле 15 точного пигмента не образует.Реакция на оксидазу и каталазуположительная. Реакция Фогес-Проскауэра отрицательная. Индол не образует. Тест на анаэробную аргинин-де 20 гидролазу положительный. Реакция наанаэробную денитрификацию отрицательная. Лецитинаэная активность отсутствует.Нгидролиэует крахмал, желатин,25 Твин.В качестве источников углеродаиспользуют глюкозу, глицерин, сахарозу, галактозу, мальтоэу, фруктоэу,этанол, метанол, тирозин, фенилаланин, орнитин, глицин, лейцин, глютаминовую кислоту, аснарагиновуюкислоту. Не утилизирует арабинозу,маннозу, ксилозу, лактозу, маннит,раффинозу, дульцит, сорбит, целлобиозу, инозит, серии, лизин, триптофан, антраниловую кислоту, ацетамид.Штамм идентифицирован как Рзецйошопаз зресьез согласно определителюВегдеу,П р и м е р 1. Определение про"1дукции 1.-фенилаланина с помощьютест-культуры Рзецйошопаз ярес 1 ез М 9производят следующим образом, Делаютпосев культуры Рзецйошопаз зресхея М 9с косяка в МПБ (мясо-пептонный45бульон) либо другую питательнуюсреду, обеспечивающую рост бактерий,и культивируют в течение 10-12 ч при28 С. Затем бактериальные клеткиотмывают дважды физиологическимраствором с помощью центрифугирования (10 мин, 50008) и ресуспендируют до первоначального объема в.этом же растворе, 0,1 мл суспензииклеток вносят в пробирку с 4 мл расплавленного и охлажденного до 45 Сминимального полужидкого агара(0,77), приготовленного на основеминеральной среды, содержащего вСоставитель И, АфанасьеваТехред М.Коданич Корректор Л. Пилипенко Редактор Л. Повхан Заказ 4687/29 Тираж 490 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета ГССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, %-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная,4 3 1254 качестве источника углерода глюкозу(в концентрации О, 2 ), и наслаивают вторым слоем на поверхность агариэованной среды (1,5 ) того же состава. После застывания верхнего слоя с культурой уколом делают посевы от. дельных клонов испытуемых ла продукцию Ь-фенилаланина культур микроорганизмов, утилизирующих в качестве источника углерода и энергии глюкозу 1 О(по 20-30 клонов на чашку Петри). Пробы выращивают в течение 24-48 ч при 28-30 С. Вокруг колоний, клетки которых продуцируют Ь-фенилаланнн, наблюдаются четкие, интенсивные зоны 15 роста индикаторной тест-культурыРзеа 4 ошопав зр. М 9, размеры которых зависят от количества синтезируемого Ь-фенилаланина.П р и м е р2. Посевной материал 20 тест-культуры Рзепйошопаз вр. М 9 и последующие процедуры производят как в примере 1, за исключением того, что в качестве источника углерода и энергии в используемые мине ральные среды добавляют вместо глюкозы этанол (в концентрации 1 ) и делают посевы испытуемых на продук 005 4цию Ь-фенилаланина культур микроорганизмов, утилизирующих этанол.П р и м е р 3. Посевной материалтест-культуры Рзеайошопаз вр. И 9и последующие процедуры производят,как в примере 1, за исключением того, что в качестве источника углерода и энергии в используемые минеральные среды добавляют метанол (вконцентрации 12) и делают посевыиспытуемых на продукцию Ь-фенилаланина культур микроорганизмов, утилизирующих метанол. Пробы выращиваютв течение 48-72 ч,Штамм Рвеойошопаз зр. И 9 является мутантом по РЬе-гену, .что обеспечивает его потребность и высокую специфичность по отношению к Ь-вменил" аланину. С помощью штамма Рвеийошопав вр. М 9 можно выявлять и изучать содержание Ь-фенилаланина, начиная с 0,5 мкг/мл, на простых по составу минеральных средах среди различных групп микроорганизмов, в том числе ассимилирующих низшие спирты (этанол и метанол) в качестве источников углерода и энергии.