Способ определения мутагенного действия химических соединений

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИРЕСПУБЛИН 9) (1 5 4 С 15/00 АНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ПР ЕДЕЛЕНИЯХИМИЧЕСКИХ СО цию испыту фотобакте елением му чению шта МУТАГЕНДИНЕНИЙ,У 30государственныйитут биофизики мого аге а ото ю и и повышения точности проводят со штамЪасгег 1 цш 1 е 18 пагРЬогоЬасгегшш в условиях аэрации 1., ОНА - с 1 ашазупгЬеядя 1 п 1 пеясепсе 1 п 1.поця Ьасгега.443-450. г/мл ТР ТР ТР фОе ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(7 1) Красноярскийуниверситет и ИнстСО АН СССР(56) И 11 яег 1. ег. а81 п 8 а 8 епгз апс 1 ВИАМЬ 1 еогя 1 пдцсе 1 цшйогК наг 1 апгз оЕ 1 цтМцгаТ 1 оп. Вез, 1981,(54)(57) СПОСОБ О НОГО ДЕЙСТВИЯ включающий инкуба щества со штаммом последующим опред го действия по св бактерий, о т л и тем, что, с целью способа, инкубаци мом бактерий Рпог Ьд У 1746 или 1 е 1 апаЬ 1 У 1745125057 10 15 20 25 Число Частота Общее число колоний Дозы мутагенов,мкг/мл 30 светя щихся коло- ний реверсий х) 0,01 ШтаммУ 1х) 0,1 3 2,1 .О 1420 40 ШтаммУ 1 170 2,2 1 О 7500 хх) 10 Штаммй 2 8200 208 2,з 10 х) 10 ШтаммР 3 7300КонтрольШтаммы 1 1,2 3 310 18 2,5 1 О 50 31 О среде куль- всего опыИзобретение относится к способам испытания химических соединений на биологическую активность и может быть использонацо для определения мутагецного действия химических соединений,Целью изобретения янлчется повышение точности способа за счет использования мутантных штаммов РЬооЬасег 1 цш.На фпг. 1 и фиг. 2 показаны графики, поясняющие предлагаемый способ.П р и м е р. Индикаторые темновые штаммы и дикий тип РЬ, 1 еояпатЬ культивируют на полусинтетическай среде, состав которой известен. Иэ этих штаммов готовят бактериальные суспецзии одинаковой оптической плотности путем смыва с твердой среды.В биологические пробирки, содержащие по 9 мл полусинтетической среды, засевают по 1 мл бактериальной суспензии. В эти же пробирки добавляют ло 0,1 мл испытуемых не - ществ в различных концентрациях. Культивирование ведут ца качалке прио29 С, Свечение измеряют с ицтенвалам. 4-б ч. Через 10-20 ч в занисимости от типа мутагена, его токсичности и концентрации наблюдаетсяувеличение интенсивности свеченияпо сравнению с темноным контролем,связанное с накоплением н суспенэии светящихся ревертацтон, возникших под действием мутагенов, Таким образом, тестируют мутагеццое действие нитрозогуацидина (фиг, 1) и цитрозометилмоченицы.Под действием всех проверенных концентрациях мутагенон наблюдается увеличение удельной интенсивности свечения, Даже при таких низких концентрациях нитрозогуанидина как 0,001 мкг/мп и концентрации цитрозо метилмоченины 0,025 мкг/мл интенсивность свечения превышает значения контроля,Испытания мутагенной активностихимических соединений проводят такжепри кратковременной экспозиции мутагенов в течение 30-35 мин. ослечего бактериальцую суспензию дваждыцентрифугируют при 7000 об/мин по15 мин и ресуспендируют в полусицтетической среде до исходного объема,Зафиксировано мутагенное действиеэтилметансульфоната, нитрозометилмочевины, цитроэогуацидина и гидроксиламица, В связи с непродолжительным действием мутагена нарастание интенсивности свечения происходит позже и чувствительность метода несколько снижается фиг. 2 . Однако даже в такой модификации метод по чувствительности не уступает тесту Эймса.Для всех используемых мутацтных штаммов была оценена частота возникновения спонтанных ревертантов в условиях реализации способа, оказавша яся в 8 10 , н то время как у К-нарианта в аналогичных условиях составляет 2-5;10В отдельных случаях проведено сопоставление результатов скриницга мутагенного действия в жидкой среде с подсчетом числа возникших ревертацтов на чашках Петри, подтвердившее, что нарастание свечения связано с накоплением ренертантов.В таблице показан учет частоты возникновения светящихся ревертантов путем подсчета числа колоний на чашках Петри,х) 1 утаген присутствует в тивированил ца протяжении та,хх) Экспозиция мутагена 30 мин.1250574 Таким образом, предла аемый способ позволяет с высокой степенью томатизирован. чувствительности тест не уступает ИМИ 1 О смь О 3 Составитель А.МакаровРедактор Л.Аврамерко Техред Н,Бонкало Корректор В.Бутяга Заказ 4376/20 НИИП по1303 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная,достоверности определять мутагенноедействие химических соединений, вызывающих замены оснований в ЦНК. По Тираж 490 Государственног елам изобретени осква, Ж, Ра трзлипионному методу Эймса, а в ряде случаев превосходит его несколько порядков. Метод прост в исполнении, позволяет проводить мас совые анализы и может был ь авПодписноемитета СССРоткрьггийая наб., д. 4/5