Способ определения мочевой кислоты

А 1 11 4 С 01 ЗОБРЕТЕНИ ЕЛЬСТВУ ПИСАНИ ОРСКОМУ СВИ С.С.у 8 еп Еоге - Апа 1. 6 8 етая кислот ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ССС ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫ(56)Яатцо М. апй Си 11 Ъаиг Епеуще Е 1 есггойе Зепзпя Ох Югс АсЫ Ы Бегов цпй Цгп , СЬепиаггу,1974, чо 1. 46, В 12, р. 1769-1772.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МОЧЕВОЙ КИСЛОТЫ(57) Изобретение относится к электро химическим методам анализа физиологически активных соединений в присутствии ферментов. Цель изобретения- повышение точности способа эа счет проведения электролиза в растворе,801236 ферроцианида калия. Каталитическуюмембрану изготавливают путем растворения 10 мг альбумина и 5 мг пероксидазы в О, 1 мл раствора уриказы вО, 1 М боратном буфере рН 9,0. Смесьобрабатывают 0,01 мл 253-ного глутарового альдегида и выпивают надиализную мембрану, Высушенную мембрану накладывают на стеклоуглеродный электрод и закрепляют. В качестве рабочего электрода используютстеклоуглерод, в качестве медиатора - ферроцианид калия. Электролизпроводится при нулевом потенциалев интервале рН 8,8 - 9,2. Концентрация мочевой кислоты определяетсяпо данным графика. Иэ графика видночто зависимость величины стационарного тока от концентрации мочевойкислоты линейна до 6 мл Х. 1 ил,2 табл.12363Изобретение относится к медицине, в частности к электрохимическим методам анализа физиологически активных соединений в присутствии Ферментов. 5Цель изобретения - повышение точности способа эа счет проведенияэлектролиза в растворе ферроцианидакалия,Способ осуществляется следующим 10образом.Предварительно изготавливают каталитическую мембрану путем растворения 10 мг альбумина и 5 мг перокси"дазы в О, 1 мл раствора уриказы 15(2,4 мг/мл) в О, 1 М боратном буферерН 9,0. Смесь обрабатывают 0,01 мл25%-ного глутарового альдегида ивыливают на диализную мембрану площадью 3 см. Высушенную мембрану толщиной 0,05 мм накладывают на стеклоуглеродный электрод и прикрепляютрезиновым кольцом.В предлагаемом способе в качестве рабочего электрода используется 25стеклоуглерод, в качестве медиатора - ферроцианид калия.Электролиз проводится при нулевом потенциале относительно насыщенного Ад/А 8 С 1 электрода сравнения в О, 1 М боратном буферном растворе в интервале рН 8,8-9,2,Изменение рН буферного раствора вэтом интервале практически не влияетна ток электрода. Способ применим ив менее щелочной области, однако припереходе к менее щелочной среде уменьшается каталитическая активностьуриказы. Так, если при рН 8,8 и0,145 мМ (2,4 мг Х) мочевой кислотыток ячейки равен 3,07 мкА/см, прирН 9,0 - 3, 14 мкА/см 2, рН 9,25 -3, 17 мкА/см, то при рН 8,0. он равен2,71 мкА/см, рН 7,0 - 0,78 мкА/см.Таким образом, интервал рН 8,8 - 9,2является оптимальным для действия 4системы.1 мг Х - 1,25 мкА/см Х - 05 мкА/см К = 0,4 мг ХКонцентрация мочевой кислоты висследуемом растворе будет равна0,4 мг Х х 100 (степень разбавления)=- 40 мг Х,П р и м е р 2. Определение мочевой кислоты в сыворотке крови проводят с помощью стеклоуглеродногоэлектрода, 0,0 В, при концентрацииКГе(СИ) 1 1 мМ, 0,1 М боратныйбуФер, рН 9,2, п = 5. Степень разбавления сыворотки 50 раз,В табл. 1 дана зависимость величины тока от концентрации мочевой кислоты Таблица 1 Ток,нА/см Концентрация мочевой кислоты в сыворотке, мг % 43 86 129 177 260 78 2центрации введенной мочевой кислоты линейна до 6 мг Х.П р и и е р 1.При концентрации в ячейке мочевой кислоты 1 мг Х (в 198 мл буфера вводится 0,2 мл 100 мг Х мочевой кислоты) величина стационарного тока равна 1,25 мкА/см. а при введении в буфер 0,2 мл исследуемого раствора (например, мочи) - 0,5 мкА/см. Высчитывается концентрация мочевой кислоты в ячейке.347 50 Концентрация мочевой кислоты в исследуемых растворах определяется по данным калибровочного графика (см. чертеж), построенного на использовании известных концентраций мочевой кислоты, поскольку при нулевом потенциале остаточный ток электрода практически отсутствует (как в чистых,. так и в сложных биологических растворах),Из графика видно, что зависимость величины стационарного тока от кон. Как следует из табл. 1 зависимость величины тока от концентрации мочевой кислоты описывается корреляционной прямой д = (21,74+0,44)х + + (-0,22+4,12) с коэффициентом корреляции 0,9999, Следовательно, предложенный способ обладает высокой точностью - коэффициент вариации1236378 4Таблица 2 Известныйспособ Предлагаемый способ Объект исследо 5 Вания Не определено Буферныйраствор,7 2,5 Б100ЧХ 1 О Моча, Ж 2,4 Сывороткакрови,Х 2,5 15Цельная кровь,7. Не пригоден 2,9 формула из обретения20 Коэффициент вариации рассчитываютпри и = 5 (см. табл. 2), Сопоставление полученньпс результатов с известными, которые приведены в табл.2,показывает, что точность определениямочевой кислоты предложенным способом почти в 2-4 раза превышает точность определения известным способом(соответственно величины коэффициентов вариации 2,4 и 47. или 25 и 97)Кроме того, известный способ не пригоден для определения мочевой кис-лоты в цельной крови,Составитель Л. ШилинаРедактор С, Патрушева Техред Г.Гербер Корректор А. Обручар Заказ 3084/47 Тираж 778 Подписное ВНИИПИ Государственного. комитета СССР. по делам изобретений н открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-полиграФическое предприятие,г.ужгород,ул.Проектная, 4 при пятикратном определении мочевойкислоты не превышает 2,57 Для определения положительного эффекта используют коэффициенг вариации, отражающий воспроизводимость и точность результатов: где Ч - коэффициент вариации,Я - среднее квадратическое отклонение;среднее, полученное при параллельном и-кратном измерении.Чем меньше коэффициент вариации Ч, тем точнее метод определения. Способ определения мочевой кислоты путем электролиза в щелочном растворе, содержащем исследуемое вещество, с помощью уриказной мембраны с.последукицим полярографическим измерением концентрации мочевой кислоты,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью повышения точности способа, 30электролиз проводят в растворе ферро.цианида калия в концентрации не менее 1 мМ, а в уриказную мембранудополнительно вводят пероксидазу.