Способ определения иммунологического статуса у больных лимфогранулематозом

. Неприна,шин и А. А. Яри 5, с. 48 - 51. ЛЕН ИЯ ИМУСА У БОЛЬТОЗОМ путем левамизолом,ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДМУНОЛОГИЧЕСКОГО СТАНЫХ ЛИМФОГРАНУЛЕМАинкубирования лимфоцитов проведения реакции розеткообразования с эритроцитами барана и подсчета розеткообразующих клеток, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, осуществляют инкубирование лимфоцитов с левамизолом в концентрациях 1 пг/мл и 10 мкг/мл, подсчитывают количество розеткообразующих клеток в каждой пробе, вычисляют разность показателей второй и первой проб и при положительном значении разности определяется нарушение иммунологического статуса, а при отрицательном значении - отсутствие нарушения иммунологического статуса.1228864 50 Изобретение относится к медицине, в частности к клинической иммунологии.Цель изобретения - повышение точностиопределения иммунологического статусабольных в активной фазе заболевания.Указанная цель достигается тем, чтолимфоциты, выделенные из периферическойкрови пациента, разделяют на 2 пробы и инкубирует их с левамизолом в концентрации1 пг/мл и 10 мкг/мл. Затем проводят реакциюЕ-розеткообразования, подсчитывают показатели в каждой пробе, вычисляют разность показателей между второй и первойпробами и при положительном значенииразности определяют нарушение иммунологического статуса, а при отрицательном значении - отсутствие нарушения статуса, 15Способ осуществляют следующим образом.Из исследуемой периферической кровичеловека выделяют лимфоциты путем центрифугирования в градиенте плотности раствора фиколла-верографина, отмывают лимфоциты растворов Хенкса.Выделенные лимфоциты разливают в 6пробирок по 0,1 мл (2)( 10 клеток в 1 мл),В первую пару пробирок добавляют стандартный раствор среды 199 по 0,1 мл (контрольная проба), во вторую пару - по 0,1 млраствора левамизола на среде 199 в концентрации С = 1 пг/мл, а в третью - по 0,1 млраствора левамизола на среде 199 в концентрации Сг = 10 мкг/мл. Пробы инкубируютпри 36 - 37 С в течение 30 - 35 мин. После ,этого лимфоциты используют в реакции спонтанного Е-розеткообразования с эритроцитами барана при 4 С для определения числа ЕРОК, Во всех пробах с помощью световогомикроскопа считают количество Е-РОК на100 лимфоцитов, т. е. Е) - контроль, зЕ(с) и Есг) - для проб с левамизоломв меньшей и большей концентрациях соответственно. Затем вычисляют разность между количеством Е-РОК, соответствующимкаждой дозе левамизола, и количествомЕ-РОК контрольной пробы: 401) = Есс) - Еск) - разность для первой дозы;АЕ(г) = Е(сг) - Еос) - разность для Второй дозы,После этого определяют характер приращения для разностей Е-РОК при меньшей 45и большей концентрациях левамизола посоотношению При этом (0, если значение разности Е-РОК уменьшается, и р)0, если значение разности Е-РОК увеличивается при повышении концентрации левамизола.Пример 1. Больная Р-на Г. Н., 1966 года 55 рождения, история болезни7049, находилась в гематологическом отделении клиники НИИМР АМН СССР с 28.11.80 г. по 20,02.81 с диагнозом лимфогранулематоза 1 А стадии с поражением подключичных лимфоузлов справа. Поступила с жалобами на увеличение лимфатических узлов справа под ключицей. Больна с 1978 г. В августе 1980 года после биопсии установлен диагноз лимфогранулематоза (узелковый склероз).До начала терапии у больной брали из локтевой вены 5 - 7 мл крови в 0,7 - 1 мл 2,7 Я-ного раствора динатриевой соли этилен диаминотетраацетата. Лимфоциты из крови выделяли путем центрифугирования в градиенте плотности фикол-верографина.Для постановки реакции в 3 группы пробирок (по 2 пробирки в каждой группе) наливали по 0,1 мл суспензии лимфоцитов (2(10 клеток в 1 мл) Далее в первую группу пробирок наливали по 0,1 мл среды 199 (контрольные пробы), во вторую - по 0,1 мл левамизола в концентрации 1 пг/мл, в третью -- по 0,1 мл левамизола в концентрации 1 О мкг/мл. Затем пробы инкубировали при 36 - 37 в течение 30 - 35 мин, после чего клетки отмывали дважды средой 199 путем центрифугирования при 200 о 5 мин. Надосадочную жидкость сливали, а осадками лимфоцитов ставили реакцию спонтанного Е-розеткообразования с эритроцитами барана; к осадкам приливали по 0,1 мл среды 199 и 0,5 Я-ной суспензии эритроцитов барана. Далее смеси инкубировали при 36- - 37 в течение 10 мин, затем центрифугировали при 200 д 5 мин и инкубировали при 4 С в течение 1 ч. Затем проводили подсчет под микроскопом числа образовавшихся Е-РОК, т. е. лимфоцитов, окруженных тремя и более эритроцитами, на 100 клеток в каждой пробе.Г 1 ол учены следующие резул ьтаты а н ал иза: число Е-РОК в пробе без левамизола (Е) = 55; число Е-РОК при концентрации левамизола 1 пг/мл = 36 (Е ); число Е-РОК при концентрации левамизола10 мкг/мл = 61 (Есг).Разности между количеством Е-РОК при каждой дозе левамизола и количеством Е-РОК контрольной пробы составилиЛЕЛЕг = Е( ) - Е, -- +6;р = ЛЕг - ЛЕ) = 25.Характер разностей Е-РОК от малой к большой концентрациям левамизола имеет положительное приращение (Г)О). Следовательно, делаем заключение о нарушении иммунологического статуса у данной больной. Пример 2. Больной П-в А. Г., 1923 года рождения, история болезни3463. Находился в гематологическом отделении клиники НИИМР АМН СССР с 10.12.79 по 21.12.79 г. Был вызван для контрольного обследования. Жалоб не предъявляет. В 1966 году был диагностирован лимфогранулематоз 11 А стадии с поражением шейнонадключичных и медиастинальных лимфоузлов. Прошел курс комбинированного ле1228864 Составитель Л. Падюков Техред И. Верес Корректор А. Тяско Тираж 660 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4Редактор О. БугирЗаказ 2209/4 чения. С 1969 года наступила клиническая ремиссия. В настоящее время при обследовании признаков рецидива не обнаружено. Диагноз при выписке: лимфогранулематоз 11 А стадии в ремиссии продолжительностью 10 лет.14.12.1979 года у больного взята периферическая кровь. Все процедуры по выделению лимфоцитов и постановке реакций проведены как описано выше.Получены следующие результаты анализа: число Е-РОК в пробле без левамизола (Е) = 35; число Е-РОК при концентрации левамизола 1 пг/мл (Ес ) = 45; число Е-РОК при концентрации левамизола 10 мкг/мл (Ц ) = 23. Разности между количеством Е-РОК при каждой дозе левами- зола и количеством Е-РОК контрольной пробы составилиЛЕ = Е(с,) - Е(.)= +10 Характер разностей Е-РОК от малои к большой концентрациям левамизола имеет отрицательное приращение (гр(0).Заключение: иммунологический статусв норме,Таким образом иммунологический статусорганизма определяют не по абсолютнойвеличине Е-РОК в суспензии лимфоцитовпериферической крови, а по харакгеру приращения гр, исключив тем самым из рас 1 О смотрения фоновую составляющую Е-РОК.В случае если ср)0, делают заключение онарушении иммунного статуса организма,если гр(0, судят о норме или восстановлениииммунного статуса.Применение предлагаемого способа поз 15воляет повысить эффективность контроля иммунологического статуса больных активнойформой лимфогранулематоза, в сравнениис использованием одной концентрации левамизола, с 72 Я до 85 Я, а в случае ремиссии - до 80 Я.