Способ обработки эритроцитов

О П И С А Н И Е 111)649434ИЗОБРЕТЕН ИЯ Союз Советских СоциалистическихРеспублик К АВТОРСИОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 1) Дополнительное к авт. свид 5,76 (1) 2365827,128-1ием заявки Ъ М. Клд А 61 К 35 Заявлено 01,0 присоедин Гасударственный комите СССРделам изобретений и открытий ования описания 28 72) Автор изобретения Мошиаш вил и(71) Заявитель й научно-исследоватег ский институти сывороток им, И. И. Мечникова ске" и 54) СПОСОБ ОБРАБОТКИ ЭРИТРОЦИТ Используемый формалин1 М .дСН до рН 7,2.Формалинизаци 1 о эритроцв пятиметровых стериль ыхтую р суспендированиую(заливают 2,2 л). централизуют тов проводят банках. Отмы свежую кровь раствором2 Изобретение относится к области медицины и может быть пспользовао для получения эритроцитарных диагностических препаратов.Известен способ обработки эритроцитовдля получения эритроцитарных диагностикумов путем отделения эритроцитов от сыворотки крок, с последующим их отмыванием и формалиниздцисй,Однако известный способ не обеспечивает высокой адсорбционной способности, высокого выхода и стабильности целевогопродукта.Целью изобретения является повышениеадсорбцпонной способности, увеличение выхода и стабильности целевого продукта,Эта цель достигается тем, что в процессеотмывания эритроцитов удаляют эритроцитарную строму и сывороточные липидыпутем адсорбции на инертном материале.Кроме того, в качестве инертного материала используют целлофан.Способ осуществляют следующим образом.Свежие эритроциты берут из яремной вены барана в банки емкостью 800 - 1000 млдо объема 400 - 500 мл с постоянным помешиванием в течсчпс 9 - 10 мин. Перед взятием кро в баки поещаю стеклянныебусы диаметром 3 - 5 мм. После получения кровь фильтруют через 1 - 4-слойные марли и отмывают на центрифуге со скоростью 2 - 2,5 тыс. об/мин в течение 10 мин 4 - 5 раз 3 - 5-кратным объемом раствора1 5 (состав: па каждые 10 л физиологическогораствора рН 7,2 добавляют 2 л 1,15 М фосфатного буфера рН 7,2 с содержанием 0,85% МаС 1). Раствор фильтруют через стеклянный фильтр5 и используют о охлажденным до 4 - 10 С, Надосадочнуюжидкость выливают, а отмытый осадок осторожно смешивают с остатком раствора и переливают в другой чистый центрифужныи стакан. Оставшиеся на дне стакана тя желыс белки (серая пленка на дне стакана) удаляют раствором1. Эту операцию повторяют несколько раз до полного отмывания эритроцитов. Отмытые эритроциты ресуспсндируют до 50%-ной концентрации о раствором2 (раствор готовят так же,кдк рдствор1, но вместо 2 л буферного раствора добавляют 5 л).юВ;. ъфа.-.ф 649434 Формула изобретения Составитель С. Малютина Редактор М, Дмитриева Техрсд С. Антипенко Корректоры: Т. Добровольская и А. СтепановаЗаказ 83/4 Изд. ЛЪ 190 Тнраьк 680 Подписное НПО Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 Нейтральный (с содержанием 0,857 о ИаС 1) формалин в объеме 800 - 850 мл (в зависимости от процентного содержания) заливают в целлофановые мешки, которые находятся внутри банки, и герметично за крывают. Банку шуттелируют, встряхивают при 18 - 22 С в течение 16 ч. Через 2 ч банку вскрывают и образовавшуюся пену (липиды) тщательно удаляют механически. Затем края банки протирают стерильной 10 салфеткой. Через 8 ч от начала процесса мешок прокалывают в трех местах на равном расстоянии по вертикали. Банку вновь закрывают и продолжают встряхивание в течение 6 ч. Операцию удаления липидов 15 за это время повторяют 3 раза, После этого целлофановые мешки разрывают и удаляют, а в банку помещают идентичный свежий целлофан (смоченный в растворе2). Операцию удаления липидов повто ряют еще 4 раза с интервалами по 2 ч и каждый раз меняют целлофан. Снятие пены и смена целлофана дают возможность полностью удалить липиды,Шуттелирование длится всего 16 ч. Во время встряхивания целлофановый мешок сорбирует на себя липиды и тем самым исключает их попадание на поверхности субстрата.Консервированные эритроциты фильтруют поочередно через 1 - 4-слойные марлевые стерильные фильтры и отмывают раствором1 в таких же условиях, как и для свежих эритроцитов. Процесс отмывания заканчивают тогда, когда надосадочная жидкость становится прозрачной и бесцветной.Осадок стандартизируют, ресуспендируют раствором2 (с содержанием 0,47 о формалина рН 7,2) и переливают в мерный цилиндр до удваивания объема осадка (судят по расходу раствора2 и полученного объема) или 507 о-ной концентрации. Готовый продукт разливают по 50 мл в стеклянные флаконы, герметично закрывают резиновой пробкой и хранят при 4 - 10 С.Предлагаемый способ позволяет повысить адсорбционную способность и увеличить выход целевого продукта с 50 - 607 о до 90 - 95% с длительным сроком годности. 1. Способ обработки эритроцитов для получения эритроцита рных диагностикумов путем отделения эритроцитов от сыворотки крови с последующим их отмыванием и формалинизацией, отличающийся тем, что, с ц:льо повышения адсорбционной способности, увеличения выхода и стабильности целевого продукта, в процессе отмывания эритроцитов удаляют эритроцитарную строму и сывороточные липиды путем адсорбции на инертном материале,2, Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве инертного материала используют целлофан.