Способ получения эритроцитарных диагностикумов

пе.теы ио теиноческая О П И С А Н 648228 ИЗОБРЕТЕН Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик ВТОРИЧНОМУ СВИДВТВ) Заявлено 27,09,77 (21) 25282присоединением заявки-Кл,1 К 35/1 Государственный номнтет СССР оо делам нзобретеннй н отнрытнй(23) Г 1 риорнтет убликовано 25.02,79.Бюлл та опубликования описани 3) У Д К 61 6-097 (088,8) 72) Лв и Н, Е, Канделак(71) Заявнтел Московский. научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРО 11 ИТАРНЫХ ДИ АГНОСТИК УМ ОВ ия растводят раст 6. Дл малин р раствор 7, Гото 5%, рН раство атного б на бидиРаствор раствора фор ции 4%-ным Раствор го натрия 0,8 литру такого 1/15 М фосфготовленногоприготовле зводят до к ом 5 (р вят раствор = 7,1 - 7,2, а добавляю фера (рН - стиллирован ния этого онцентра- Н - 7,2), хлористоК одному т 300 мп 7,2), при; юи воде,Изобретение относится к медицине и ка- сается получения эритроцитарных диагностикумов..Известен способ получения эритроцитарных диагностикумов путем формалинизации, танизации и сенсибилизации эритроцитов высокоактивным специфическим белковым сенситином с последующим осаждением сенсибилизированных эритроцитов, отмыванием и консервацией формалином 111.Однако известный способ не обеспечивает высокой специфичности дна гностикума.Для повышения специфичности диагностикума непосредственно после сенсибилизации специфическим сенситином осуществляют дополнительную сенсибилизацию эритроцитов неспецифическим белком.Кроме того, сенсибилизацию неспецифическим белком проводят при температуре 4 - 8 С в течение 18 - 20 ч.А сенсибилизированные эритроциты консервируют 4 О/о-ньм раствором формалина в фосфатно-буферном растворе,Для осуществления способа приготавливают следующие растворы.Раствор 1. Готовят, 0,89 О/о-ный раствор хлористого натрия на дистиллированной воде (рН 7,2). На каждые 10 л такого раствора добавляют 2 л 1/15 М фосфатного буфера (рН - 7,2) с содержанием 0,85% хло-ристого натрия, приготовленного на бидистиллированной воде. Раствор фильтруют через стеклянный фильтр3 - 5.Раствор 2. 40%-ный раствор формалинадоводят до рН - б,4 или 7,2 1 М растворомедкого натра или формалина,Раствор 3. Для приготовленра раствор 2 .(рН - 7,2) развовором 5 в 100 раз..Раствор 4. Для приготовления этогораствора танин перед употреблением разводят 1:40000 раствором 5,Раствор 5. Готовят 1/15 М фосфатный5 буфер (рН - 7,2) с содержанием 0,85 О/о хлористого натрия на бидистиллированной воде.648228 Составитель С.Малютиия Редактор Т.1 Иагова ТсхредО Луговая Корректор С. И 1 екмар Заказ 4 8/5 тир"ж 671 Подписное ЦНИИ ПИ Го ударственного комн гста СССР ио делам изобретений и открытий 11 ЗОЗ 5, Москва, Ж.35, Раунская наб., д. 4/5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4Способ осуществля;от следуощим образом.Дефибринировацну 1 о оарацью кров 1;фильтруют поочередно через двух, трех, четырех и восьмислойные марлевые стерильные фильтры. Фильтровднцуо крОвь отмь 1- вают от сыворотки раствором М. 1.Форм алинизацио эритроцитов производят в пятилитровых банках. Для чего бараньи эритроциты разводят 1: 4 растворо1, затем в банку вносят нейтральныйформалин (рдствор2, рН ==- 7,2) в объеме, равном 1/5 к объем взвеси эритропитов, прц эт 1 ум формалин здливспот в мешокиз вискозы, который находится в банке соЪзвесью эритроцитов. Субстрат шуттелиуют на аппарате марки ДВА - -3 220 в. Встряхивание длится 16 ц при комнатной температуре. По истечении 2 ч вискозцьй мешокпрокалыва 1 от на равном рдсстояции по вертикали в пяти местахи удаляют пенули. ш 1 ды путем адсорбции. Через 12 ч вискозпцй мешок разрывают, улаля 1 от, а эритроциты шуттелируют еще 2 и. Формдлццизировдцные эритроциты фильтруют. Фильтрование заканчивают, когда надосалочндя жидкость становится бесцветной. После этопстандартизуют эритроциты цецтрифугированием при 2000 - 3000 об/мцн в течение 10 мицпрц температуре 5 С, полученный осадок" ца спонтанную агглютинацию:Затем осуществляют таццздцию эритрл,- цитов, формалицизированные эритроциты отмывают 100-кратным объемом раствора1.в тех же условиях, что и при формалинизации, Осадок отмытых эритропитов ресуспендируют раствором 5 ло 2,5/г гу 1 стотыи смешивают с равным объемом растворатанина (раствор4). Колбу с содержимым периодически . встряхивдот (5 раз) .Тдцизация длится 10 мин при комнатнойтемпературе, после чего эритроцитыосаждают на центрифуге и олин раз отмываютраствором1. Отмытые танизировацц 1,1 еэритроциты ресуспендируют раствором5до 2,5 о/о густоты.,Далее проводят сенсибилиздцик эритроДля сенсибилизацци эритроцитов оптимальную дозу высокоочищенного и высокоактивного сенситина (5 мкг) разводят раствором5 в объеме не более 10"/о от общего объема приготовляемого лидгностикумд,доливают в суспецзию с тацизированнь 1 ми эритроцитами, после чего осторожно смешивают вращательными движениями, Суспецзцю оставляют при комнатной температуре 45 миц с пятикратным перемешиванием содержимого. После этого сенсибилизацию прололжд 1 от в холодильнике при темпердту- рс 4 Г в течение 20 ч с пятикратным перемешиваццем в течение 1 О мин. По истечении этого срока сенсибилизированцые эрит-.10 ропиты осажлают цецтрифугировацием и ресуспендцруют в растворе5 с содержанием 1/о-цого цеспепифического белка и сенсибилизируют аналогично прсдылущему. Затем эритроциты осаждают на центрифуге и лвакды отмывают раствором1, ресусисцдиру 1 от ло 2,5/-ной густоты раствором5. На каждые 10 мл лиагностикума добдвля 1 от 1 мл раствора6 и смешивают.Готовый лиагностикум хранят в холодильнике при температуре 4 - 10 С. Срок годности препаратд 5 лет,Предлагаемый способ ооеспечивает высцкую специфичность лиагцостикумов и позволяет повысить срок годности их. 25Формула изобретения. Способ получения эритроцитарцых диагцо.тцкумов путем формалинизапии, таниздции и сецсибилизации эритроцитов высокодктипцым специфическим белковым сенситином с последующим осаждением сенсибилизировацных эритропитов, отмыванием и консс рвдцией формалином, отличающийся тем, что, с целью повьпцения специфичности З 5 Лиагностикума, непосредственно после сенсиби,1 изации специфическим сенситином осу 1 цсствляот дополнительную сецсибилизацию эритроцитов цеспепифическим белком.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, 40что сенсибилизапию неспецифическим белком проводят при температуре 4 - 8 С в течение 1820 ч.3. Способ по п, 1, отличающийся тем,что сенсибилизировацные эритроциты коцсервируют 4%-нь 1 м раствором формалина в 45 фосфдтно-буферном растворе.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе1, Ст. Басовой Н. Н. и др. Эритроцитдрный и-диагцостикум и его применение в реакццн пдссивной гемаплотицапии при бркпцном тифе - сЛктудльные вопросы эцидеми.ологии. М., 1967, с. 57.