Способ приготовления гистологического препарата ткани печени

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКРЕСПУБЛИН 09 03) Р1 ТИЙ ОП АНИЕ ИЗОБРЕ ОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ЕНИЯ 1К АВТО ии 5 а 20 420-450307Остальное Са буф СУДАРСТЮНН 1 Й НОМИТЕТО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТН(1) Тюменский государственный мед цинский институт(56) 1, Непомнящих Л.М. и Колесникова Л.В. Количественные взаимоотношения стромы и паренхимы миока да кроликов при атеросклеротическом кярдиосклероэе. - "Бюллетень экспементальной биологии и медицины",1977, У 84, 8, с. 247-250.2; Лилли Р. Патогистологическая техника н практическая гистохнмия. И., "Мир", 1969, с. 205. а) С 01 Я 1/28 А 61 В 10 0(54) (57) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ТКАНИ ПЕЧЕНИ включающий Фиксацию биоптата в растворах формалина, последующее приготовление срезов и их окрашивание, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью четкой дифференцировки паренхимы от стромы, фиксацию в тече" ние 45-48 ч при 4-6 С, а окрашивание ведут при 18-24 С в течение 20-30,мин в смеси, содержащей А-нафтил ацетат, прочный синий Б, ацетон и фосфатный буфер рН 7,2- 7,4 при следующих соотношениях компонентов, вес.Х:Ж-Нафтил ацетатПрочный синий БАцетонИзобретение относится к медицине, а именно к области микроскопических исследований паренхиматоэных органов в частности печени.Известен способ приготовления 5 гистологического препарата ткани паренхиматозных органов, в частнос- ти ткани миокарда, включающий фиксацию биоптата в осмиевой кислоте, приготовление срезов и их окрашива" 10 ние 1 .Однако данный способ не позволяет приготовить, гистологический препарат ткани печени.Наиболее близким к предлагаемому 15 по технической сущности является способ приготовления гистологического препарата ткани печени, включающий фиксацию биоптата в растворах дюрмалина, последующее приготов. 20 ление срезов и их окрашивание в гематоксилин - эозин И .Однако известный способ не позволяет четко дифференцировать паренхи. му от стромы, что затрудняет 25 проведение цитоспектроскопических исследований при изученииструктуры печени.1 ель изобретения - четкаядифференцировка паренхимы от стромы. Поставленная цель достигаетсясогласно способу приготовления гисто логического препарата ткани печени, включающему Фиксацию биоптата в растворах формалина, последующее при готовление срезов ы их окрашивание, тем, что фиксацию проводят в, течение 45-48 ч, нри 4-6 С, а окрашивание ведут при 18-24 С в течение 20-30 мин в смеси, содержащей ф;нафтил ацетат, прочный синю Б, ацетон и Фосфатный буфер рН 7,2- 7,4 при следующих соотношениях компонентов, вес.Х:ю-Нафтил ацетат 20-45Прочный синий Б 20-45Ацетон 0,3-0, 7Фосфатный буфер ОстальноеСпособ осуществляют следующим образом, 50Биоптат ткани печени Фиксируют в 10-123-ном нейтральном формалине в 45-48 ч при 4-6 С. Лалее биоптатаФомывают водой в течение 10 мин, приготавливают замороженные срезы 55 на криомикротоме, которые окрашивают при 18-24 С в течение 20-30 мин в смеси, содержащей Ф -нафтил. аце-. тат, прочный синий Б, ацетон и Фосфатный буфер рН 7,2-7,4 при следующих соотношениях компонентов,вес.Х:К-Нафтил ацетат 20-45Прочный синий Б 20-45Ацетон 0,3-0,7Фосфатный буфер ОстальноеФиксация биоптата в 10-127."номрастворе Формалине в течение меньше 45 и больше 48 ч при температурахменьше 4 и больше 6 С не позволяетОполучить четкую дифференцировку паренхимы от стромы,что видно из таблицы, где приведены показатели опти.ческого поглощения стромы и паренхимы печени интактного золотистогохомяка через различное время послеэкспозиции образцов ткани в 10127"ном нейтральном формалине прио4-6 С (в условных единицах оптической плотности),Окрашивание при температурахменьше 18 и больше 24 С в течениевремени меньше 20 и больше 30 миитакже приводит к менее четкой дифФеренцировке паренхимы от стромыза счет полной ииактивации выявляе"мых красителем эстераз, имеющей мес"то при этих режимах обработки.П р и и е р 1. У наркотизированного животного вскрывали брюшную полость,удаляли печень и из каждой доли ее вырезали кусочки, которые помещали в10-122-ный нейтральный формалин на45 ч, предварительно охлажденный доо4 С, после чего промывали кусочкив дистиллированной воде 10 мин, изготовляли на микротоме замороженные срезы. Срезы наклеивали белком на сухиеобезжиренные предметные стекла иокрашивали при температуре 18 С вотечение 20 мин в смеси, содержащей-нафтил ацетат, прочный синий Б,ацетон и фосфатный буФер рН 7,2-7,4 приследующих соотношениях компонентов,весф 7Ж-Нафтил ацетат 20Прочный синю Б 20Ацетон 0,3Фосфатный буфер ОстальноеСоотношение стромы и паренхимыв печени у интактного животного, вчастности золотистого хомяка, проводится при планиметрии на микровидеомате на тестовой площади, равной19200 мк, принятой за 1002, и равно0,0967 + 0,01.П р и м е р 2. У наркотизированного животного (золотистого хомяка),Время экс- Паренхимапозициив формалине, ч Строма 45-48 17,8+ 0,9 0. 15,11 0,9 0,5 й 0,1 Составитель Л. Стебаева Техред С.Ле геэ а Корректор О Луговая редактор Е. Папп Заказ 7682/19 Тираж 822 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,4 инвазированного эписторхоэом, вскрывали брюшную полость, удаляли печень, которую помещали в 10-127-ный нейтральный формалин на 48 ч, предварительно охлаяденный до боС, после чего промывали кусочки в дистиллированной воде 10 мин, изготавливали замороженные срезы, которые окрашивали при 24 С в течение 30 мин восмеси, содержащей К -нафтил ацетат, прочный синий Б,ацетон и Фосфатный буфер рН 7,2-7,4 при следующих соотношениях компонентов, вес.Х:Ю,-11 афтил ацетат 45 Прочный синий Б 45 Ацетон 0,7 фосфатный буфер Остальное Соотношение стромы и паренхимы у золотистого хомяка при описторхозе 1,1 ф 0,13.Специфичность и достоверность маркирования стромы и паренхнмы обусловлены избирательным маркиро" ванием этих структур, Интенсивная 119983 аокраска паренхиматозного компонента ткани связана с выявлением в нем неспецвЬических эстераз. Четкая диф.ференцировка паренхимы от стромы позволяет проводить количественные- исследования с помощью телевизионного планиметра "Иикровидеомат" и цитоспектрофотометра, что повышает точность определения различных па О тологических состояний.йв 12 24 э 7+ Оэ 7 1,2+ 0,1224 24 1+ 0 5 0 71+ 0 06