Способ выделения лейкоцитов из крови

(19) (11) 8 А з(50 С 01 М 33/48 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТЖ(54) (57) СПОСОБ ВЬПЕЛЕНИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ ИЗ КРОВИ путем смешивания кровис гепарином, осаждения в термостатепри 370 С и отделения лейкоцитарноймассы от остатка, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью увеличения выхода лейкоцитов и ускоренияспособа, лейкоцитарную массу центрифугируют 9-10 мин, верхний слойвозвращают в термостатируемый остаток, перемешивают и после повторноготермостатирования вновь отделяютлейкоцитарную массу, весь цикл повторяют четыре раза, причем при каждом цикле угол наклона термостатируемой емкости изменяют ступенчато из положения наклона под углои45 до вертикального, а термостатирование проводят 20-40 мин.Изобретение относится к биологии и медицине, в частности к гематологии и иммунологии, и может быть использовано в клинической практике и для исследовательских работ.Известен способ выделения лейкоцитов периферической крови слонтанным осаждением гепаринизированной венозной крови путем отбора 30-50 мл крови,помещения ее в про" бнрку с гепарином, осаждения в термостате при 37 С в течение 1-1,5 ч и однократного отделения в градиенте фиккол-уоотраста осажденной плазмы 13Недо татками указанного способа выделения лейкоцитов являются сравнительно низкий выход лейкоцитов (не более 22 Е от возможного максимального количества), необходимость отбора большого количества крови у больных для полноценного их обследования и получения достоверных данных о их чувствительности к раз личным антигенам, что особенно необходимо при операциях трансплантации, неэкономное использование донорской крови, необходимой для работ, длительность процесса.Цель изобретения - увеличение выхода лейкоцитов и ускорени способа.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу выделения лейкоцитов из крови путем смешивания крови с гепарином, осажденияов термостате при 37 С и отделения лейкоцитарной массы от остатка,лейкоцитарную массу центрифугируют 9- 10 мин, верхний слой возвращают в .термостатируемый остаток, перемешивают и после повторного термостатирования вновь отделяют лейкоцитарную массу, весь цикл повторяют 4 раза, причем при каждом цикле угол наклона термостатируемой емкости изменяют ступенчато из положения наклона под углом 45 до вертикального, а термостатирование проводят 20-40 мин.П р и м е р. У больного забирают из вены 10 мт 1 крови в пластиковый шприц, содержащий гепарин, для достижения конечной концентрации 50 ед/мл. Смесь выливают в стериль.ные пробирки емкостью 20 мл и помещают в термостат при 37 С. Пробиркиоразмещают с наклоном в 45 О на стан 08358 2дартных подставках. Через 30 минпри достижении видимой границыраздела отбирают первую порцию надосадочной жидкости плазмы и центрифугируют ее при 150 в течение10 мин. После отделения клеток ихпомещают в среду 199, плазму выпивают в пробирки, находящиеся в термостате, встряхивают, перемешивая 1 О с имевшимся в них остатком, и размещают в термостате под углом 60После получасового стояния вновьотбирают плазму и центрифугируют9 мин. Отделив ее от образовавшегосяосадка, возвращают в термостатируемые пробирки. Термостатированиепробирок со смесью проводят при тойже температуре (37 ОС), расположивоих вертикально (угол наклона 90 ).20 Общее количество циклов термостатирования и последующего центрифугирования плазмы равно четырем. За этовремя удается выделить 28 мпн/млклеток.25 Данные, характеризующие преимущества предлагаемого способа выделения лейкоцитов перец известным,представлены в табл. 1.Т а блица 1 30 Число лейкоцитов,млн/мн, полученных Показатепо предла- с использовагаемому нием фикколспособу, уротраста 35 28,0 11,2 5,0 2,2 Числонаблюдений Таким образом, предлагаемый способ по сравнению с прототипом позво"ляет повысить выход лейкоцитов в2,5 раза. Причем для выделения необ ходимого количества лейкоцитов, например при иммунологических тестах,можно использовать меньшее количество крови, что позволяет получать достоверные результаты исследований 55 при щадящем режиме отбора крови уобследуемого, Кроме того, предлагаемый режим выделения лейкоцитов позволяет интенсифицировать собствен, за счет повышения выхода лейкоцитов.Данные по времени осуществленияспособа представлены в табл.2. Таблица 2 Угол наклона,град. 50 32 36 42 38 40 40 40 Время, мин 20 Из данных таблицы видно, чтооптимальным является изменение угла 15наклона пробирки с кровью при териостатировании в таком порядке: 1-45,11-60 , 111-90 , 17-90 . Время,затрачиваемое при этом режиме термостатирования, минимально при максимальном получении лейкоцитов. Составитель Е. КолчинаРедактор К. Волощук ТехредЛ. Коцюбняк Корректор А Обручар Тираж 823 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Иосква, Ж, Раушская наб., д. 4/5Заказ 5854/30 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,4 зно процесс осаждения и добитьсяболее эффективного и экономичногоиспользования донорской крови.Стоимость выделяемой лейкоцитарной Предложенный способ позволяет повысить выход лейкоцитов при одновременном сокращении времени, Он эффективен в клинической практике при дифференциальной диагностике заболеваний, а также может быть применен при изготовлении препаратов крови на станциях переливания крови.