Способ консервирования лейкоцитов крови

ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик(23) Г риоритет Госудаоственный комет СССР по делам нэооретеннй и открытнйОпубликовано 05,02,70.Бюллетень % 5 Дата опубликования описания 08,02,7 И, Луговой, Л. П. Кравченко, А, И, Г 1 опяков и Г. С, Лобынцевв 2) Авторы изобретеиия Инст(71) Заяви проблем криобиопогии и криомедициныУкраинской ССР СЕРВИРОВАНИЯ ЛЕЙКОДИТО КРОВИ 54) СПО медицины и может найти применение нвстанциях перепиввния крови для консервирования крови и ее компонентов,Известен способ консервированияпейкоконцентрата периодической ипри .низких температурах с прим темкриопротектора 1 1.Однако известный способ не позвопяесохранять высокий уровень жизне обности после деконсервирования.Белью изобретения явпяется сохранение и стабилизация жизнеспособностипосле деконсервирования,Эта цепь достигается тем, что пейкоконцентрат перед замораживаниешивают с 10 - 10М дексамеи 1-6% попиэтипеноксидом. ( кров енент спос м сме- . твэоном ПЭО 400) .Предпагаемый способ осуществляюедующим образом.Лейкоцитврную массу, выделеннуюиз донорской крови методом фракпиони-з 6ия, смещиввют с 1 С - 10 Мм раствором дексаметвэопв. К т рован водиь обретение относится к обпвс пробам с дексаметазоном добавляют1,а 1-6%-ный раствор попиэтипеноксидв. Затем выдерживают раствор с криопротектором ПЭОпри комна 1 ъной температуре, после чего суспенэию клеток разпивают в полиэтиленовые ампупы и эамораживают по двухэтапной программе; на первом этапе - со скоростью 2-4 С в 1 мин до - 15 с тепповой остановкой при этой температуре в течение 10 мин; на втором этапео о со скоростью 400 С в 1 мин доС. Замороженный материал хранят в жид ком азоте, Размораживание проводятов термостате при 42 С,П р и м е р. Лейкоцитарную массу выдепяют из донорской крови методом фрвкционироввния, К 5 мд суспензии клеток добавляют 0,02 мл 10 о М водного раствора дексаметвэона. Пробы с дексаметазоном оставпяют на 15 мин при комнатной температуре, поспе чего к ним добавляют раствор ПЭОдо получения 5% конечной концентрации. Экспозиция с криопротектором ПЭО645633 До замораживания Сразу после отогреваС остав проб Через 3 ч после отогрева, ранившихся жизне- % сох% сохжиэнесп.по Шреку ранивщихся спосо ранив- щихся клеток ностьпо Шреку клеток клеток Лейкоциты +10% ПЗОЛейкоцит +5% П ЭОЛейкоциты +5% П ЭО+Дексаметазон (10 -1 С м) 66 76 60 83 0,64 88 90 70 91 0,20 96 100 0,49 0,15 100 96 0,17 0,25 90 90 95 100 97 Тираж 965 Подписное ЦНИИПИ Заказ 1/1 Филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 400 выдерживается 30 мин при комнатной температуре, после чего суспензию клеток разливают в полиэтиленовые ампулы по 1,5-2,0 мл и эамораживают, по двухэтапной программе: на первом этапе - со скоростью 2-4 С в 1 минадо -1 д с тепловой остановкой при этой температуре в течение 10 мин; нао втором этапе - со скоростью 400 С в 1 мин до -196 С, Замороженный материал хранят в жидком азоте в течение суток, а затем раэмораживаютов водяном термостате при 42 С.Определение показателей сохранности клеток проводят сразу же и через 3 ч после размораживания проб. В течение вэтого времени пробы хранят в холодильнике при 0-4 С, В качестве основныхфпоказателей сохранности лейкоцитов пос- пе низкотемпературной консервации применяют следуюшие тесты: определение Таким образом, из привед"иной таблицы видно, что применение 1-6% попи 3 6этипеноксида и 10 -10 дексаметазона позволяет предупредить разрушение клеток (не менее 24) и повысить жизнеспособность (не менее 16), а также позволяет снизить не менее, чем . в 2 раза концентрацию криопротектора, при этом показатели сохранности лейкоцитов сразу после их размораживания остаются без изменения.формула изобретенияСпособ консервирования лейкоцитов крови путем замораживания в присутжизнеспособности клеток методом суправительного окрашивания эоэином (поШреку): в эксперименте сразу послеотогрева -95, через 3 ч -92, подсчет 5 общего количества клеток с вычислением.процента морфологически сохранившихсяклеток; в эксперименте сразу послеотогрева -90%, через 3 ч -90%. Определение в среде замораживания уровня 10 активности кислой рибонуклеазы-фермента-маркера лизосом, характеризуюшего степень интактности лизосомальной мембраны и повреждения клетки:в эксперименте до замораживания -О, 17, 5 через 3 ч.Влияние применения ПЭО.400 идексаметазона на показатели сохранности лейкоцитов при ниэкотемпературномконсервировании и средние величины показателей из 5 опытов приведены втаблице. ствии криопротектора, о т л и ч а юш и й с я тем, что, с целью увеличе-,ния срока хранения и стабилизации жизне 45 способности лейкоцитов, перед эамора 3живанием лейкоциты смешивают с 1010 М дексаметазоном и 1-6%., полиэтиленоксидом,Источники информации, принятые во внимание при экспертизе1. Материалы У 1 Всесоюзной научной конференции по пересадке органов и тканей под ред. Н. М. Соловьева, 1972, с, 495-500.