Способ определения са-связывающих белков
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Номер патента: 1108357
Авторы: Синичкин, Страдомский
Текст
,801108357 А ВШ С 01 Х 33/48 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬПИЙ(71) Ростовский ордена ТрудовогоКрасного Знамени государственныйуниверситет(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ Са-СВЯЗЫВАЮЩИХ БЕЛКОВ путем насыщенияполиакриламидного геля ионамикальция в щелочных системах с последующим промыванием геля от несвязавшегося с белками кальция и выявления зон Са-связывающих белков, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью ускорения способа, после промывания гель насыщают оксалатомкальция.1108357 1щих белков и для количественноиоценки гели сканируют на денситометре. При этом на денситограммах вы 1 О 15 пиков денситограмм. 20 25 30 40 ВНИИПИ Заказ 5854/30 Тираж 823Подписное филиал НПП "Патент", г. Ужгород. ул.Проектная,4 1Изобретение относится к биохимии, а именно к определению Са-связывающих белков, и может быть использовано при изучении их роли вметаболических процессах организма.Известен способ определенияСа-связывающих белков - радиоиэотопный 1).Недостатком радиоизотопного метода является сложность процессаэа счет применения специальных радиоактивных реактивов, аппаратуры,длительного времени экспозициирадиочувствительной пленки (до30 дней).Цель изобретения - ускорениеспособа, упрощение технологии засчет применения доступных безопасных реактивов, использования широкораспространенной аппаратуры,кратковременности, простоты операций.Указанная цель достигается тем,что согласно способу определенияСа-связывающих белков путем насыщения полиакриламидного геля ионами кальция в щелочных системах споследующим промыванием геля отнесвязавшегося с белками кальцияи выявления зон Са в связывающбелков после промывания гель насыщают оксалатом кальция.Способ осуществпяют следующимобразом.Полиакриламидные гели с разде 35ленными в них белками, в том числе Са - связывающими белками, насыщают Са-ионами, помещая гелив 17-ный раствор Са(О,), на 40 мин.Затем гели отмывают пятикратнойсменой 27-ной уксусной кислоты по10-12 миц,Отмытый гель помещают в 107-ныйраствор оксалата натрия на 1 О мин, врезультате чего в гелях выявляются45белые полосы оксалата кальция в местах локализации белков, связывающих Са. Экспозиция в течение 10 минприводит к развитию максимальногосветорассеивания зонами,0Затем гели отмывают от избыткаоксалата натрия трехкратной сменойдистиллировацной воды по 15 миц. 1 ос -ле отмытия гелей визуально опреде -ляют выявившиеся зоны Са-свнзываюявляют эоны Са-связывающих белков. Чувствительность предложенного способа 1-10 мкг ионов Са+ в зоне. Время осуществления способа 2,5 часа,П р и м е р 1. Кислый Са-связывающий белок молока (каэеин) выделяют из цельного молока известнымспособом и разделяют методом дискэлектрофореза в 7,57,-ном полиакриламидном геле в 1-й (щелочной) системе по Мауреру. После дискэлектрофоретического разделения казеина гель подвергают указанным процедурам.В геле идентифицируют 6 зон Са-связывающих белков. Интенсивность зонопределяют по весу соответствующих П р и м е р 2, Водорастворимые белки сыворотки крови крыс подвергают дискэлектрофоретическому разделению в 7,57.-ном полиакриламидном геле в 1-й (щелочной) системе по Мауреру,В гелях идентифицируют Са-связывающие белки описанным способом. Обнаруживают 8 зон Са-связывающих белков среди 15 зон водорастворимых белков. П р и м е р 3, Методом дискэлектрофореза в 7,57-ном ПААГ разделяют водорастворимые белки головного мозга крыс в 1-й (щелочной) системе по Мауреру. Идентифицируют Са-связывающие белки предложенным способом.Обнаруживают 13 зон Са-связывающих белков иэ 18 зон водорастворимых белков.Таким образом, предложенный спо- соб позволяет определять Са-связывающие белки в полиакриламидных гелях с помощью метода дискэлектрофореза в щелочных системах, а также упрощает определение и ускоряет его в несколько десятков раз (2,5 ч вместо 30 сут по известному способу). Предлагаемый способ прост и доступен, так как не требует специальной аппаратуры и радиоактивных реактивов, снижает требования к технике безопасности.
СмотретьЗаявка
3405069, 09.03.1982
РОСТОВСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ
СИНИЧКИН АЛЕКСАНДР АЛЕКСАНДРОВИЧ, СТРАДОМСКИЙ БОРИС ВИТАЛЬЕВИЧ
МПК / Метки
МПК: G01N 33/48
Метки: белков, са-связывающих
Опубликовано: 15.08.1984
Код ссылки
<a href="https://patents.su/2-1108357-sposob-opredeleniya-sa-svyazyvayushhikh-belkov.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ определения са-связывающих белков</a>
Предыдущий патент: Способ определения ориентации синтетических нитей в однородных холстах
Следующий патент: Способ выделения лейкоцитов из крови
Случайный патент: Устройство для перемещения безопочных форм