Способ электрофоретического разделения лейкоцитов крови

(54) СПОСОБ ДЕЛЕНИЯ ЛЕЙ (57) Изобре ЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКЦИТОВ КРОВИ ние относится к м/ми спосоГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ОПИСАНИЕ ИЗОБ Д ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ.зц 1262 З 75 бам электрофоретического разделенияклеток крови. Цель изобретения - повышение числа и чистоты клеточныхфункций. 8 мл крови помещают в пробирку 3 гепарином и имидазольным буФерным раствором. К содержимому пробирки добавляют 0,5 мл 10%-ногораствора желатины в 5%-ном растворесахарозы. Смесь перемешивают и отстаивают, Светлый слой плазмы отсасываютНадосадочную жидкость смешивают с раствором сахарозы. Гемолизированные эритроциты отмываютимидазольным буферным раствором,Разведенную разделяемую смесь клетокподают в разделительную камеру прибора снизу вверх со скоростью 1Изобретение относится к медицине,а именно к фракционированию клетоккрови.Цель изобретения - повышение числа и чистоты клеточных Фракций засчет подачи разделяемой смеси клеток и рабочего раствора в разделительную камеру прибора снизу вверхи использования определенного состава рабочего раствора,П р и м е р 18 мл крови, взятой иэ вены, помещают в пробирку,дно которой покрыто гепарином, разведенным.имидазольным буферным раствором, содержащим, мас.Х: имидазол0,001; сахароза 8,3, глюкоза 0,191,дистиллированная вдда до 100. Соотношение гепарин : имидазольный буферный раствор 1:10. В пробирку добавляют 0,5 мл 103-ного раствора желатина в 57.-ном растворе сахарозы.Смесь перемешивают и отстаивают втечение 30 мин при 37 С.После отостаивания светлый слой плазмы с лейкоцитами отсасывают, не задевая эритроцитов, в отдельную пробирку. Кнадосадочной жидкости добавляют ЗХный раствор сахарозы в соотношении3: 1. Смесь перемешивают в течение30 с. Гемолизированные эритроцитытрехкратно отмывают имидазольным буферным раствором. После отмыванияэритроцитов клеточную взвесь разводят этим же буфером до тех нор, покаконцентрация клеток не составит20 1 О в 1 мл. Разведенная таким об 6разом разделяемая смесь клеток непрерывно подается в разделительнуюкамеру прибора для препаративногоэлектрофореза под давлением снизувверх при 0=600 В со скоростью протока имидазольного буферного раствораи разделяемой смеси .клеток 4 см/мин.При этом используют прибор дляэлектрофореза клеток, содержащийвертикальную разделительную камерус размерами 50 10 0,1 см, смежные сней две электродные камеры, блок выведения, укрепленный в верхней части разделительной камеры и содержащий 105 каналов для выведения разделенных фракций. Рабочие растворы подаются в камеры при помощи генераторов пневматического давления, которые выдавливают рабочие растворы изгерметичных сосудов.Избыточное давление рабочегораствора в разделительной камере 2050 КПа, напряжение, приложенное кразделительной камере, 400-600 В.Скорость протока рабочего раствора определяется следующим образом.5 Герметичные сосуды с рабочими растворами имеют мерные деления ценой100 мл, Визуально определяются изменение объема рабочего раствора вгерметичном сосуде за известное время, При этом на протяжении всеговремени измерения давление в указанном сосуде контролируют по образцовому манометру, отклонение первоначально установленного давления завсе время измерения составляет 0,53.Затем вычисляют скорость протокарабочего раствора,Измеряют температуру разделительной камеры.20Для подготовки к работе с клетками крови камеры прибора промываются2-3 л дистиллированной воды. Затемразделительную камеру на 30 мин заполняют 27-ным раствором человеческого альбумина. Затем под давлением50 КПа через разделительную камерупрокачивается такое же количествоимидазольного рабочего раствора.30 После этого камеры заполняются рабочим раствором. Через отверстие внижней части разделительной камерыпод небольшим избыточным давлениемподается разделяемая смесь.35После отклонения в электростатическом поле лейкоциты разделяются на 35 фракций (из них лимфоциты в 25 Фракциях) в соответствии со своей 0 электрофоретической подвижностью,П р и м е р 2. Аналогичен примеру 1. Содержание имидазола в буферном растворе 0,004 мас.Х. После отклонения в электростатическом поле лейкоциты разделяются на 35 фракций.Положительный эффект изобретениязаключается в увеличении числа получаемых Фракций клеток от 22 до 35.50Формула из обре тения Способ электрофоретического разделения лейкоцитов крови, включающий стабилизацию взятой из вены крови, выделение из нее разделяемой смеси клеток и,подачу этой смеси с постоянной скоростью в вертикальную раз1262375 Составитель А, АгуреевТехред Л.Олейник Корректор М. Самборская Редактор О, Бугир тираж 778 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Заказ 5420/4 1 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная,4 делительную камеру, заполненную рабочим раствором, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышениячисла и чистоты клеточных фракций,подачу разделяемой смеси клеток ирабочего раствора осуществляют снизувверх со скоростью 1-5 см/мин при этом рабочий раствор состоит из следующих компонентов, мас.7:Имидазол 0,001 в ,004Сахароза Не менее 8,3Глюкоза Не менее О, 191Дистиллированная вода До 100