Способ получения -лизина

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК А МЮ С ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ АВТОРСК СВИДЕТЕЛЬСТВУ(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ е(,-ЛИЗИНАпутем глубинного культивированияпродуцирующих его микроорганиЪовна питательной среде, содержащеймелассу в качестве источника углерода, источник азота, необходимыеминеральные соли и стимулятор биосинтеза лизина, в условиях аэрациисреды с последующим выделением целевого продукта, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повыаения выхода, в качестве стимулятора биосинтеэа с(,-лизина используют 15-ный водный экстракт морских водорослей рода Рцсцз ,чез 1 сц 1 озцз в кличестве 0,02-0,8 г/л среды. СУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОП (РОТ(56) 1.Авторское свидетельство СССРР 494040, кл. С 12 Р 13/08, 1970.2.Патент Японии Р 45-32233,кл. 32/2/ВО 2, опублик. 1970.З.Влияние экстрактов их зеленыхводорослей Б.асцш 1 пацз на развитиедрожжей С.1.ро 1 уС 1 са в газоконденсатосодержащих средах. - Узбекскийбиологический журнал, 1979, М 4,с. 12-14.4.Дагис И.К,Карапюте И.К. Стимуляторы роста в водорослях Балтийского побережья. - Сб. "Физиологически активные вещества и их применение в растениеводстве"Вильнюс,институт Ботаники АН Лит ССР, 1965,с. 83-89.5.Авторское свидетельство СССРВ 661013, кл. С 12, Р 13/08, 1976. 2 Р 13/08// С 12 Н 1/38;2 Н 1/13 С 12 Н 1/15азота, необходимые минеральные соли и стимулятор биосинтеза лизина,в усло 65 Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именнок способам получения (, -лизина ферментацией.ф Известен способ получения,-лизина путем глубинного культивирования 5продуцирующих его микроорганизмовв питательной среде, содержащей минеральные соли, с введением в неепорционно или непрерывно источниковуглерода, необходимых для роста аминокислот, и стимуляторов роста споследующим выделением (, -лизина иэкультуральной жидкости одним из известных способов. В качестве стимуляторов роста используют кукурузныйэкстракт, клеточный сок картофеля,дрожжевой гидролизат или дрожжевойэкстракт. Ферментацию ведут при 3032 С, рН 7,0-7,2, непрерывной аэрации и перемешивании 1 ,Известно использование экстрактов различных водорослей в качествестимуляторов роста микроорганизмов,таких как хлорелла 2 , зеленых водорослей Я,асцш 1 паСцз 3 1 , а такжеэкстрактов морских водорослей родаРцсцв чес 1 си 1 овцз (.43Однако указанные выше экстрактыводорослей, в частности водные илиспиртовые экстракты морских водорослей рода Р.чезси 1 овцв,используются30в качестве стимуляторов роста биомассы, т.е. их использование при выращивании дрожжей, грибов Аврег 8111 цв пдег И ряски.1,ешпа шхпог направлено на повышение урожайности биомассы,Наиболее близок к предлагаемомуспособ получения-лизина путемглубинного культивирования его продуцентов на питательной среде, содержащей мелассу, в качестве источника углерода, кукрузный экстрактили ферментативный гидролизат дрожжевых клеток в качестве стимуляторабиосинтеза и источника азота и минеральные соли, при аэрации среды счоследующим выделением . -лизинаизвестным методом 5 1Недостатком способа является то,что он не обеспечивает достаточновысокого выхода (.-лизина (33,4390 г/л), а также предусматриваетиспользование дорогих и дефицитныхкомпонентов - источника азота, кановым является кукурузный экстракт.Цель изобретения - повышение выхода -лизина.ПОставленная цель достигаетсятем, что согласно способу получения-лизина, предусматривающему глубинное культивирование продуцирующих его микроорганизмов на питательной среде, содержащей мелассу в качестве источника углерода, источникриях аэрации среды с последующим выделением целевого продукта,в качестве стимулятора биосинтеза (, -лизина используют 1-5-ный водный экстракт морских водорослей рода Рцсцв чез 1 сц-, 1 овцв в количЕстве 0,2-0,8 г/л средЫ,Экстракт готовят путем настаивания сухих водорослей в течение 2-4 ч при 25-30. С, после чего центриФугируют, стерилизуют и вводят через 10- 16 ч после внесения в питательную среду посевного материала.Культивирование продуцентов (, -лиЗииа СогупеЬасСегцш 1 цСашдсцш Тили штамм "ВНИИгенетика" 4995, или Вгеч 1 ЬасСегиш Бр 22 ., ,или 22 , Д проводят на питательной среде следующего состава, вес. :Меласса 16-21 (сахар48) Кислотный гидролизат БВК 3,5-4,1Кукурузныйэкстракт1-5-ный водныйэкстракт морскихводорослей 0.,002-0,008НН 1,5 - 2,5Мел 1,5 - 2,5Вода водопроводнаярН среды составляет 7,4. ОстальноеП р и м е р 1. Для получения лизина используют культуру рода Сог,1 иСаш 1 сцш Т-З, которую выращивают на питательной среде следующего состава, вес.:Меласса 1,0-2,0 Водный экстракт готовят из сухих морских водорослей рода Рцсцз чез 1 сц 1 озцзпутем настаивания в .течение 2 ч при 25 С. По окончании экстракции суспензию центрифугируют при 6000 об/мин, стерилиэуют в течение 0,5 ч при 1,0 ати и полученный Фугат используют в качестве стимулятора при биосинтезе-лизина.Ферментацию проводят в колбах Эрпенмейера емкостью 250 мл в лабораторных условиях на качалке(240 об/мин). Процесс протекает при 30 + 1 С и рН 7,4. Объем ферментационной среды 10 мл. 16 (сахар48)Кислотный гидролизат БВК 3,5Кукурузный экстрактМел 1,5Вода водопроводная ОстальноерН среды составляет 7,4.Через 10 ч после внесения посевного материала, выращенного в пробирках на скошенной агариэованной среде МПА, добавляют стерильный 1-ный фугат водного экстракта морских водорослей рода Рцсив,чезси 1 озцв из расчета 0,2 г/л (0,002 вес.)Тираж 522 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж"35, Раушская наб д.4/5Заказ 1677/24 щ,Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная,4 При этом на выходе , -лизина (определяется методом бумажного электрофореза): в культуральной жидкости составляет 30 г/л.П р и м е р 2. Режим культивирования продуцента , -лизина Сог. 81 ц Фаш 1 сцш "ВНИИгенетика" 4995 аналогичен примеру 1.Используют питательную среду следующего состава, вес.ЗгМеласса 19 (сахар 48) 16Кислотный гидролизат БВК 3,8Кукурузный экстракт 1,5ВН 4 С 1 2,0Мел 2,0 15Вода водопроводная ОстальноерН среды составляет 7,4. Через 13 ч после внесения посевного материала добавляют в питательную среду стерильный фугат 3%-ного водного экстракта морских водорослей рода Рцсця еяхсц 1 ояця в количестве 0,5 г/л. Времянастаивания сухих водорослей 3 ч,при 30 С. Через 72 ч ферментации выход-лизина в культивированной жидкости составляет 45 г/л. П р и м е р 3. Режим культивиро-.вания продуцента Ь -лизина Вгеч 1 - 30 Ьас 1 ег 1 цщ Яр, 2 Ь аналогичен примерам 1 и 2.Используют питательную среду следующего состава, вес.В:Меласса 21 (сахар48) Кислотный гидролиэат БВКб4,1Кукурузный экстракт 1,51" Н 4 с 1 2,5Мел 2,5Вода водопроводная ОстальноерН среды составляет 7,4.Через 16 частов после внесения посевного материала добавляют в питательную среду стерильный фугат 5%-ного водного экстракта морских водорослей рода Гцсця чея 1 сц 1 ояця в количестве 0 8 г/л. Время настаиваУния сухих водорослей 4 ч при 35 С, Выход Ь -лизина в культуральной жидкости через 72 ч ферментации составляет 39,1 г/л.П р и м е р 4. Режим культивирования продуцента Ь -лизина В.БР 22 ЕР аналогичен примеру 3. Через 72 ч ферментации активность лизина составляет 42,8 г/л.Таким образом, предлагаемый спо . соб позволяет увеличить выход лизина с 30 до 45 г/л по сравнению с известным (33,4 - 39,6 г/л).