Способ контроля качества тиогликолевой среды

.А, Гавристова,Государственны стандартизациипрепарато 7) Заявите Й) СПОСОБ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ТИОГЛИКОЛЕВО СРЕДЫобласти биологии. я качест- спользо- врогояе 15 5,0-6,0 0,9-1,1 АгарКазеин хлор- кальциевый (г/на 10 мл среды РБ 7.,Ж 0,1еред посевом сус ьтуры с концентрклеток/мп разво 0,3-0,5ензию рабочейцией 7,0 ф 0,3.дят изотоничн 1Изобретение относится к медицины, а именно к микроИзвестен способ контрол ва тиогликолевой среды с и ванием штамма С 1 овйгдцщ пез 1,1.Известен также способ контроля качества тиогликолевой среды путем выращивания культуры тест-штамма С 1 озйгд 1 цв почу 198 с последующим хранением на питательной среде, получением рабочей культуры путем двукратного пассирования на среде Тароцци и посевом ее в контролируемую среду 12;Однако известный способ является недостаточно чувствительным.Целью изобретения является повышение чувствительности способа.Эта цель достигается тем, что согласно способу контроля качества тиогликолевой среды путем выращивания культуры тест-штамма С 1 овйг 8 це Почу 198 с последующим хранением на 1 . лАндреева и 1,Г. Бенда питательной среде, получением рабо= чей культуры путем двукратного пассирования на среде Тароцци и посевом ее в контролируемую среду, отличительной особенностью является то, что культуру Соврагдце почу 198 выращивают и хранят на питательной .среде, содержащей,. г/л воды:Панкреатическийгидролизат ка- .зеина неглубокой степени расщепления 15,0-20,0Глюкоза 1,8-2,2Хлористый нат5 10 15 го г 5 5, О,0 0,9-1,1 зо 35 4 О 45 0,3 мл 5055 3 99 раствором хлористого натрия, содержащим редуцирующее вещество, при этом в качестве редуцирующего вещества используют тиогликолевую кислоту из расчета 0,3 мл кислоты на 1 л раствора,П р и м е р. Исходную культуру С 1. почу 1 198 получают в споровой форме на питательной среде следующего состава, г/л воды;Панкреатическийгидролизат каэеина неглубокойстепени расщепления 15,0-20,0Глюкоза 1,8- 2,2Хлористый натрийАгарКаэеин хлоркальциевый (г/на1 О мл среды)рН 7,8 0,1 0,3- 0,5Перед посевом на данную питательную среду двухсуточную культуру отделяют от среды выращивания (модифицированная среда Тароцци) центрифугированием при 3000 об/мин в течение 20 мин, подводят под оптический стандарт мутности, соответствующий 1 О единицам с применением разводящей жидкости следующего состава, г/л;Хлористыйнатрий 8,5Тиогликолевая кислотаДистиллированнаявода р 11710, 2 До 1 л Затем. культуру высевают по 1 мл на ряд пробирок с 10 мл питательной. среды для получения спор, Посевы инкубируют в течение 48 ч при 37 С и путем микроскопировайия определяют наличие спор. Пробирки с исходной споровой культурой С 1. почу 1 198 закрывают резиновыми колпачками и хранят при температуре +4 С - +8 С, либо полученную культуру высушивают методом лиофильной сушки в геле гидрата окиси алюминия и хранят при той же температуре.Для получения рабочей культуры споровую форму тест-атамма по 1 мл пересевают на 2-3 пробирки с 10 мл среды Тароцци, инкубируют в течение 0808 4 20-48 ч при 37 С, после чего осуществляют второй пересев тест-штаммана 2-3 пробирки с той же средой ипроводят инкубйрбвание в течение17-19 ч при 37 С.Полученную культуру центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин,образовавшуюся биомассу подводятпод оптический стандарт мутности,соответствующий 1 О единицам, с использованием разводящей жидкости.Иэ полученной суспензии 1 мл культуры переносят в пробирку, содержащую 9 мл стерильной разводящей жидкости (разведение 10") и подобнымобразом последосательно получаютдесятикратные разведения культурыдо седьмой пробирки - 10 ,Для посева на испытуемую средуиспользуют четыре последних разведения; 10 4; 10 , 10 , 10 . Изкаждого указанного разведения по0,5 мл взвеси вносят в пробирки с10 мл тиогликолевой среды, инкубируют посевы в течение 48 ч при 37 С,после чего производят учет результатов, Среда считается пригодной при росте тест-штамма не ниже, чем из разведения 10 6, что соответствует определенному количеству (30-40) засеянных микробных клеток,Исследовано качество 7 серий тиогликолевой среды промышленного изготовления по известному и предложенному способам. Контрольной средой служила тиогликолевая среда серии У 40. Разница в полученных результатах при оценке разных серий тиогликолевой среды по известному способу незначительна и составила 1 1 д(10 8 -10 ), Такая разница (1 19) наблюдалась в данных и для контрольной серии У 40, По предложенному способу разница в результатах контроля испытуемых серий составила 3 1 д(10 - 10 ) при стандартных результатах (1 О 1 одной и той же серии 11 40, выбранной в качестве контрольной. Иэ 7 отконтролированных серий по предложенному способу было выявлено 2 серии среды низкого качества, которые не соответствуют предъявляемым требованиям, т.е. не обеспечивает рост минимальных количеств клеток тест-штамма, что соответствует посевной дозе шестого разведения (10 ), содержащей 30-40 микробных15,0-20,01,8-2,2 5 9клеток, тогда как по известномуспособу все серии среды оказалисьпригодными для проверки стерильности медицинских препаратов.Использование изобретения позволит улучшить контроль стерильностимедицинских препаратов на всех зтаепах их изготовления,формула изобретения1. Способ контроля качества тиогликолевой среды путем выращиваниякультуры тест-штамма С 1 оэйг 161 цщ почу 198 с последующим хранением напитательной среде, получением рабочей культуры путем двукратного пассирования на среде Тароцци и посевомее в контролируемую среду, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с цельюповышения чувствительности способа,культуру С 1 озтг 101 ца почу 1 . 198выращивают и хранят на питательнойсреде, содержащей, г/л воды:Панкреатическийгидролизат казеина неглубокой степени расщепленияГлюкоза 90808 6Хлористый натрий 5,06,0Агар 0,91,1Казеин хлоркальциевый (г/на10 мл среды)рн 7,8 о,1 а,з-о,5и перед посевом суспензию рабочейкультуры с концентрацией 7,0 д 0,3 " 1010 клеток/мл разводят иэотоничнымраствором хлористого натрия, содержащим редуцирующее вещество,2. Способ по и, 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что в качестве ре дуцирующего вещества используют тиогликолевую кислоту из расчета 0,3 млкислоты на 1 л раствора. Источйики информации,20 принятые во внимание при экспертизе1. Фармакопея. ЧССР, 1970 Изд. З-е,163.2. Инструкция по контролю стериль" 2 з ности вакцин, анатоксинов, бактериофагов, сывороточных препаратов и аллергенов. Приложение к приказу И 192 Из. СССР, 1979, 79 (прототип).Составитель Е. Ярных Редактор Г. Волкова Техред А,Бабинец Корректор А. Дэятко Заказ 56/36 Тираж 521 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035 Иосква Ж 35 Раушская наб, д. 4/5 тететю 3 тате 3 ее тте тететейт Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, Ч