Способ определения триамтерена и его метаболитов в крови

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНРЕСПУБЛИК 6833 01 м ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ ЕЛЬСТВ ОРСНОМУ СВ(71) Куйбышевский медицинский институт им. Д.И.Ульянова(56) 1. Вгой 1 е В.В., СЬаввеапд Ь.Р.,Тау 1 ог Т., Хо 1 ввеу 7,П, - Оегеип 1 паЫ 1 оп ой Юе 61 цгег,1 с гг 1 авегей 1 пр 3 евша апд цг 1 пе ой Ьцвап Ьу Ь 1 дЬрегйогщапсе 11 п 16 сЬгова 1 одгарЬу.фСЬота 1 одг. В 1 отей. Арр 8", 19.79,чо 2, 164, М 4, р 527-553,2, Раугоп Р,д Ргц 11 А,И.,Мс Нау 7,Ь, йг, Я 1 е 1 пЬогвС Ю.ЯцЫев ю 1 Ю гг 1 юпегеп а ЯцЬвг 11 ц 1 ей, р 1 ег 161 пе цпцв 1 аЬ Ьга 1 п. 1 ор 1 ааша гаг.1 о 1 п шавапа 1 в,фИецго, рЬаппасо й ., 19 7 2, чо В. 11,3, р 435-446.3. Ьаввеп д,В, Мевоп О.Е,1 пчев 19 а 11 св 1 п 1 о гпе а 1 цге 1 сейГесг. апй е 1 тп 1 паЫоп ой гг 1 айеге-пе, в . "Асга рЬаппасо 1, еС 1 ох 1 со 1",1963, чо 6, 20, р. 309-316прототип),Я ТРИАМТЕ" РОВИ путем ющнй-. ения чуврови осажнадосадоч целевой ным до(57);СПОС И ЕГО МЕ риметрии, тем, что, тельности белки и жидкости укт ацет ) (-12) ОБ ОПРЕДЕЛЕНИТАБОЛИТОВ В Ко т л и ч ас целью повышспособа, в киэ полученнойэкстрагируютоном, охлажденСс я ств даю ной про ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИИзобретение относится к фармакокинетике лекарственных веществ и касается способов определения лекарственных веществ в крови с целью увеличения эффективности применяемых средств и уменьшения их побочного действия.Известен способ раздельного определения триамтерена и его метаболитов в крови методом жидкостной хроматографии высокого разрешения 13. 10Известна флюориметрическая методика определения триамтерена в биологическом материале (2 1.Известен также способ, предусматривающий определение триамтерена 15 в биологических жидкостях с помощью флюоресцентного метода 133.Недостатксм известного способа является его малая чувствительность, не позволякщая определять триамтерзн в крови человека в динамике после приема терапевтических доз.Цель изобретения - повышение чувствительности способа, обеспечение многократного определения трнамтере на в крови человека в динамике после приема терапевтических доз препарата.Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения триамтерена и его метаболнтов в крови путем флюориметрии, в крови осаждают белки и из полученной надосадочной жидкости экстрагируют целевой продукт ацетоном, охлажденным до - 35 (-10) - ( - 12) С.Способ осуществляют следующим образом.Из пальца больного берут микропипеткой 0,1 мл крови. Пипетку промывают только дистиллированной водой, так как растворы гепарина или цитрата влияют на результаты анализа. Кровь переносят в пробирку диамет" ром 7 мм и длиной 50-60 мм, в которую предварительно отмерено 0,7 мкл охлажденного в морозильной камере холодильника до (-10) - (-12) С ацетона (ч .) . Содержимое пробирки перемещают 5 мин, при этом происходит осаждение белков плазмы и форменных элементов крови, которые не дают возможности провести анализ триамтерена в крови. Одновременно происходит экстракция триамтерена иэ жидкой части крови и ее форменных элементов в ацетон, так как растворимость триамтерена в ацетоне весьма высокая, Наилучшая экстракция (более 90) получена в ацетоне, другие жидкости (Н-бутанол, гептан, этилацетат, бО хлороформ, эфир, трихлоруксусная кислота) дают более низкие величины экстракции триамтерена. Для обеспе" чения наименьшего исходного фона флюоресценции экстракцию триамтере на иэ проб крови производят в охлажденном ацетоне. Для лучшего осаждения белков смесь ставят в морозильную камеру холодильника, в которую заранее помещают ванну, наполненную спиртом и создающую охлаждение до (-10) - (-1 2) С. Охлаждение пробирок с пробами крови производят 30 мин. На всех этапах пробирки, содержащие ацетон, закрывают полиэтиленовыми пробками для предотвращения испарения ацетона. После 30-минутного охлаждения пробирки центрифугируют при 3000 об/мин 5 мин, надосадочную жидкость сливают в другие пробирки и флюориметрируют.Флюориметрирование производят на флюориметре или спектрофлюориметре, приспособленными к работе с объемом жидкости 0,5 мл. Для этого используюткюветы, изготовленные из кварцевых трубок с внутренним диаметром 3 мм или другие кюветы подходящего объема. При наличии высокочувствительного флюориметра типа Хитачи возможно измерение флюорисценции в кюветах несколько большего объема с соответствующим увеличением объема ацетона, взятого для экстрагирования. Длина волны возбуждения флюоресценции 360 нм, длина волны регистрируемой флюоресценции 458 нм. При работе с флюориметром возбуждение производится светом ртутной лампы при первичном светофильтре УФС, при вторичном - ЖСи синем светофильтре.П р и м е р. Больной Ф 52 года, диагноз: гипертоническая болезнь П стадии с преимущественным поражением сосудов головного мозга. Для лечения заболевания был назначен триампур в дозе: 2 таблетки 3 раза в день. Каждая таблетка триамнура содержала 25 мг триамтерена и 13,5 г гипотиазида.Б первый час после приема триампура концентрация в крови триамтерена нарастала, в 1 О.ОО концентрация триамтерена в крови оказывается максимальной - 13,0 10г/мл, в течение последующих 4 ч концентрация в крови прогрессивно падает. Параллельно изменению концентрации триамтерена изменяется и выделение. трнамтерена с мочой, Таким образом, наиболее существенный подъем концентрации триамтерена в моче и крови наблюдался 5 ч.Больному Ф. в последующие дни триампур давался 3 раза в день по 2 таблетки. Больной получал по 50 мг триамтерена и 25 мг гипотиаэида в 8,00, 13.00 и 18.00 ч. Концентрация триамтерена в крови в первые два дня не определялась, в течение третьего, четвертого, пятого дней10768 33 0 Составитель И.ЕмельяненкоРедактор Н.Стащншина Техред М,Надь Корректор Г.Решетник фУЧфеч ктт т шеее ею щт Заказ 739/42 Тираж 823 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.Проектная, 4 была равна 0,032.10 - г/мл, в течение пятого и шестого дня она быларавна нулю. Эти данные согласуютсяс результатами определения препара.,та в крови после однократного приеж. Трехкратный прием триампура втечение дня не может создать высокую постоянную концентрацию в кровив течение. суток, так как препаратобладает большой скоростью выделения. При этом достаточно высокаяконцентрация в крови не создается идиурез не возникает. Предлагаемый способ достаточно прост, не требует дорогостоящей аппаратуры, удобен, так как позволяет проводить многократные анализы крови у одного и того же больного в те" чение суток. Способ может быть применен в условиях клиники и испольЗован в поликлинических условиях для контроля эфФективности.лечения триамтереном и ,препаратами, содержащими трнамтерен.