Способ подготовки почвенного образца для электронно сканирующего микроскопирования

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУ БЛИН. ЗШ 6 018 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯН АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(53) 631.42723(088.8) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(54).(57) 1. СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ПОЧВЕННОГО ОБРАЗЦА ДЛЯ ЭЛЕКТРОННО-СКАНИРУЮЩЕГО ИИКРОСКОПИРОБАНИЯ,.включакщий.8076 2 А зачистку почвенного образца скальпелем, наклеивание его на столик-держатель электропроводящим. клеем и на пыление золота в вакууме о т л и -. ч а ю щ и й с я тем, что, с целью ,повышения точности измерений образец почвы покрывают со, всех сторон клеем на водной основе, после его высыхания верхнюю часть почвенного образца срезают и выделывают в па рах биофиксатора в течение 2-3 мии с последующим высушиванием при комнатной температуре,2. Способ по п 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что в качестве клея на водной основе используют поливинилацетатный клей, а в качестве биоФиксатора - осмневую кислоту.Способ относится к биологии ипочвоведению, в частности к способам .микроскопических исследований биологических объектов,Известен способ подготовки почвыдля микроскопических исследованийпутем фиксации образца канадскимили пихтовым бальзамами и искусственными полимериэующимися смолами с последующим получением тонкого срезапочвы - почвенного шлифа (;13.Однако данный способ сложен в исполнении и дорогостоящий, так какиспользуются вещества, отечественныеаналоги которых отсутствуют. Крометого, способ не обеспечивает подготовку образца к электронно-сканирующей микроскопии с сохранением всехпочвенных компонентов (особенно почвенных микроорганизмов и простейших),так как способ предусматривает обра Оботку почвенного образца погружениемв кипящие растворы бальзамов и смол.Это искажает результаты исследованийи делает практически невозможным иэучение п 6 чвениых простейших и микроор ганиэмов.Известен также способ подготовкипочвы для электронно-сканирующегомикроскопирования, включающий зачистку почвенного образца скальпелем, на-ЗОклеивание его на столик-держательзлектропроводящим клеем и напылениезолота в вакууме 23.Однако известный способ характеризуется сложностью сохранения нативной структуры почвенного образцаиэ-за его непрочности. В большинстве случаев в период подготовки образцы почв разрушаются, а исследованиепроводят по сколам почвенного образца, т.е. только по поверхностям почвенных агрегатов. Изучение внутриагрегативной (внутрипедной) почвен"ной массы практически невозможно.Кроме того, известным способомнельзя изучить почвы, легкие по меха ническому составу (супесчаные, песчаные), а также исследовать внутрен"ний состав многочисленных легко разрушающихся почвенных структур биогенного происхождения (капролиты дождевых червей, экспременты почвенныхбеспозвоночных) .Цель изобретения - повышение точ- .ности измерений.Поставленная цель достигается тем,что образец почвы покрывают совсех сторон клеем на водной основе,после его высыхания верхнюю частьпочвенного образца срезают и выдерживают в парах биофиксатора в течение 2-3 мин с последующим высушиванием при комнатной температуре.В качестве клея на водной основеиспользуют поливиналацетатный клей,а в качестве биофиксатора - осмиевуюкислоту. 65 П р и м е р 1. Прн помощи пинцетапереносим монолит почвы в крышкуалюминиевого бюкса с поливинилацетатным клеем (слой клея 2-3 мм) и выдерживаем 2 мин. Этого времени достаточно для того, чтобы клей пропиталоснование понолита почвы. Эатем помещаем почвенный монолит на предварительно обезжиренный столик-держа"тель и покрываем монолит с боковыхсторон поливинилацетатным клеем с помощью кисточки. После затвердеванияклея скальпелем срезаем верхнюючасть монолита на необходимой дляисследования глубине. Затем помещаемстолик-держатель с монолитом в бюксс осмиевой кислотой на 2 мин для .фиксации простейших и микроорганизмов. Высушиваем образец при комнатной температуре.П р и и е р 2. Берем комочек почвы объемом не более 1 см . При помощи пинцета погружаем его на 1/3 в поливинилацетатный клей и выдерживаем3 мин, После затвердевания клеяскальпелем делаем срез в проклееннойнижней части почвенного образца так,чтобы получилась ровная поверхность,На предварительно обезжиренный столик-держатель наносим каплю поливинилацетатного клея и помещаем почвенный образец нижней частью на столик-держатель. Кисточкой покрываемсо всех сторон комочек почвы клеем.После эатвердевания клея скальпелемсрезаем верхнюю часть образцаи фиксируем приклееный образец впарах осмиевой кислоты 3 мин. Высушиваем при комнатной температуре.Слабокорродированный фитолит в ненарушенном образце почвы (дерново-подзолистая почва, гумусо-аккумулятивный горизонт А) .П р и м е р 3. Капролит при помощи скальпеля переносим в крышку алюминиевого бюкса с поливинилацетатнымклеем (слой клея 1-2 мм) на 1 мин.Затем помещаем на предварительнообезжиренный столик-держатель и кисточкой покрываем его со всех сторонполивинилацетатным клеем. После эатвердевания клея делаем срез верхнейчасти капролита и приклеенный капролит фиксируем 3 мин в парах осмиевойкислоты,Обрастание свежеобразовавшегося капролита (2-й день) актиномицетами.П р и м е р 4. При помощи шприца пропитываем поливинилацетатным клеем слой почвы толщиной 3 мм и площадью 1 см 2. После эатвердевания клея кисточкой покрываем переднюю стенку почвы над площадной размером 1 см 2, При помощи скальпеля осторожно открывает поочередено боковые стенки монолита и покрываем их поливинилацетатным клеем. Вынимаем моноЗаказ 739/42 Тираж 823 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР ио делам изобретений и открытий 113035, Москва, З-ЗЬ, Раушская наб., д. 4/5В ЭЮЕтв тщюаВфилиал ППП Патентф, г.ужгород, ул;Проектная, 4 лит из почвы и скальпелем удаляе прилипшие песчаные частицы, зачщаем нижнюю часть монолита.На предварительно обезжиренный столик-держатель наносим каплю поливинилацетатного клея. После затвердевания клея скальпелем осторожно срезаем верхнюю иасть монолита ификсируем почвенный образец в парахосмиевой кислоты 2 мин. Высушиваниепроводим как и в предащущих примерахпри комнатной твепературе.Обрастание минеральной частицыактиномицетами.