Способ отбора лизогенных штампов холерных вибрионов

)е ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯН АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(54)(57) СПОСОБ ОТБОРА ЛИЗОГЕННЫХШТАИИОВ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ, включающий выращивание в питательном бульоне и на поверхности двухслойныхагаровых питательных сред в присутствии индикатора в верхнем слое среды, отличающийся тем,что, с целью ускорения и упрощенияспособа, полученную бульонную культуру непосредственно высевают на агаровые среды, содержащие в качествеиндикатора основной фуксин в концентрациях 0,1 0,2 и 0,3 мг/мп среды, иотбирают лйзогенные штамьы по наличию роста на средах в присутствиивсех концентраций фуксина.Э 40 20 СоставительТехред С.Легеза Корректор 1,Пеьо Редактор З.Юркова Заказ 4023/4 Тираж 522 В;1",П 1 И Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 1 1035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5;к ка .11.П "Патент", г.ужгород, ул,Проектная, 4 Изобретенке отосится к областимедицины, а именно к микробиологии,Известен способ отбора лизогенныхштаммон холерных вибрионов, нключающий выращкнаке в питательном буль -ое и а поверхности двухслойных 5агаровых пктательых сред в присут -ствии идикатора в верхнем слоесреды 1),Сднако изнестый способ являетсядовольно сложным,Целью кзсбретекя является ускорение к упрощение отбора лизогенныхштаммов хоперых вибрионов.Цель достигается тем, что н способе отбора лкзогенных штаммов,включающем выращивание и питатель -ном бульоне и на поверхности двухслойных агаровых сред в присутствииидикатора н верхнем слое среды,полученную больонную культурунепосредственно высевают на агаровыесреды, содержащие в качестве индикатора основной фуксин в концентрациях0,1 0,2 и 0,3 мг/мп среды, и отбирают лизогенные штампы по нали -чию роста а средах в присутствиинсех концентраций фуксина.Способ осуществляют следующим образом.10 мг основного Фуксина растворяют в 10 мл дистиллированной воды, 30подогревая над пламенем горелки дополного растноренкя, Затем воэрастаю-.,1 ие количества приготовленного растьора Фуксина 0,5 мл (1), 1 мл (1),1, 5 мп (18), что соответстнует 350,1: 0,2; 0,3 мг/мл основного Фуксина, вносят в 3 пробирки растопленного0,7-ого мясопептонного агара(рН 7,6-7,8) и выливают вторым слоемна поверхнос=ь 1,53-ого агара вчашки 1, П, 11 соответственно. Средаимеет малиновую окраску, На поверхэастывшего а ара наносятк аплю .е тырс хч асов ой бул ьон ной кул ь -туры лизогеного и нелизогенного45штаммов в вкде "дорожки" . Результатыучитывают чере з 1 сутки выращкнания при 37 С. Рост лкзогенных куль -тур, имеющих калоик розового цве -та, отмечается на всехсредах, содержащих Фуксин, с уменьшеием интенсквности роста к 111 чашке, где наибольшая доза препарата, Рост нелиэогенных штаммов отсутствует, иногда присутствуют единкчные коло. нии только на 1 концентрации. Через сутки выращивания посевов петлей снижают колонии с чашки, содержащей наибольшую концентрацию Фуксина и пересевают на обычную питательую среду . Выросшие лизогечые кодокк сохраняют все свойства исходных штаммов,П р и м е р Отсенают в бульон по 1 петле односуточные.агаровые культуры вибрионов зльтор 381-В (лизогенный) и 5879 ,нелкзогеный) и выращивают в течение 4 ч грк 37 С.Готовят плотную питательную сре - ду, содержащую Фуксин. Для этого 10 мг Осонс"о фуксина растворяют в 10 мп дистиллированной водя, подо. греная над пламенем горелкк до полного растворения. Затем отбирают иэ горячего раствора фуксина О, 1 мл (1) и 1 мл (П), 1, 5 мп (11) вносят н трк пробкрки с 4 мл растопленного 0,7-ного агара (1, Й, 111 ссотве.- - ственно) и выливают вторым слоем : поверхность 1,5-ого мясопептоного агара в чашки Петри Д, П, 111 соответственно) . На хорошо подсушенные чашки с агаром фуксина наносят 1 каплю четырехчасовых бульонных культур 381-В и 5879 в виде "досожек" параллельно друг другу. Посе - вы нырашивают при 37 С к учктнаютоцвета отмечается на всех агарсвых пластинках, рост нелкзогенной куль - туры 5879 отсутстнует.,1 кзоген; ую культуру снимают петлей с сашки Й 1 и пересенают на обычный агар для дальнейших Опытон. Нелкзогенную культуру пересевают в исходной чашки без Фуксина.Изобретение позволяет ускорить и упростить отбор лизогенных;таммов холерных вибрионов при проведе -нии генетических исследований.