Способ определения концентрации ацетилхолина в структурах мозга

ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ и 934377 Сфюэ СеветсинкСоциалистическиереспублик(22)Заявлено 09,07.80 (21) 2952762/28-13с присоединением заявки рй = С 01 М 33/48 ееудерствеяные квеятет СССР,Опубликовано 07.06.82; Бтоллетень М 21 Дата опубликования описания 07.06.82ае делам явебретенк и еткрытяй(72) Авторы изобретения Б.А. Ройтруб, Р.С. Златин и И.Я. Иосим Институт физиологии им, Р.Р.Богомольца.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРРЦИИ РЦЕТИЛХОЛИНД Изобретение относится к медицине,в частности к нейрохимии физиологически активных веществ, и может быть использовано для определения микро- количеств свободного ацетилхолина в структурах мозга. Известен способ5 определения концентрации ацетилхолина в структурах мозга путем воздействия испытуемой пробы на изолировайную мышцу пиявки и электрографической регистрации сокращений препарата 1 1Однако известный способ не обеспечивает достаточной точности, посколь ку полученные известным способом препараты обладают недостаточной стабильностью высокой чувствительностиЦель изобретения - повышение точности способа.Указанная цель достигается тем, что при осуществлении способа определения концентрации ацетилхолина в структурах мозга путем воздействия испытуемой пробы на изолированную 2мышцу пиявки и электрографической ре" гистрации сокращений препарата, пиявку предварительно выдерживают в воде при 4-боС в течение 4-6 сут, а затем изолированную мышцу - в растворе Рингера в течение 46-0 ч.П р и м е р. В день опыта изолированную спинную мышцу пиявки перемещают из охлажденного раствора Рингера в раствор Кребса+прозерин такой же температуры на 1 ч.Непосредственно перед опытом изолированную мышцу пиявки помещают на пенопластовый препаровальный столик и поперечным разрезом с помощью спаренных лезвий, находящихся на расстоянии 8-12 мм, вырезают участок мышцы в области оральной присоски на 5 мм каудальнее головных ганглиев. Вслед за этим обрезают продольно- боковые участки мыщцы с таким расчетом, чтобы препарат имел ширину 3-4 мм. Препарат укрепляют двумя сер-. финками в плексигласовой ванночке,формула изобретения Составитель Р.Катосова Техред А, Ач Корректор В.Бутяга Редактор В.ПилипенкоВ а Ш Е Е В Е Еа ьюее е г ю Заказ 3927/40 Тираж 887 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4 заполненной аэрируемым раствором Креб.са с прозерином, и присоединяют к механической части электронного устройства. Исследование проводят притемпературе раствора в ванночке 1015 С, Перед началом опыта готовятостандартные растворы ацетилхолина(тестирующие) на растворе Кребса спрозерином.Опыт проводят в следующей после- оовательности, определение минимальной концентрации ацетилхолина,,вызывающей сокращение участка спинной мышцы пиявки, определение степени повторяемости отношения "доза" 15,эффект" до четырех определений),оп.ределение концентрации ацетилхоли-на в исследуемых растворах, затемв интервале между определениями раствором Коебса с прозерином производятотмывание препарата от связанного срецепторами ацетилхолина, а такжемышцу освобождают от натяжения насрок не менее 15 мин. После отдыхамышцу вновь натягивают и в натянутомсостоянии стабилизируют в течение10 мин.Регистрацию сокращения участка изолированной спинной мышцы пиявки производят на движущейся диаграммнойленте электронного чернильного регистратора, соединенного с электроннойсистемой преобразователя механического натяжения мышцы. Регистрациюпроводят до получения прямой (нулевой)линии, характеризующеи исходное35натяжение мышцы,Показателем концентрации ацетилхолина является изменение тангенсаугла, образованного в результате от 40клонения писчика от нулевой линии(исходный фон) после добавления опытного или тестирующего раствора. По 7 4строив калибровочную кривую зависимости угла отклонения от концентрации ацетилхолина, определяют содержание ацетилхолина в опытных растворах,Предлагаемый способ дает возможность стабильно определять микро- количества свободного ацетилхолинаа)о(до 10 " г/мл) в малых навесках (1-2 мг) ткани мозга с использованием широко доступного тест-объекта (медицинской пиявки), а также аппаратуры, изготовленной на базе стандартных устройств, что дает возможность внедрить его в практику не только научно-исследовательских, но и лечебных учреждений для определения функционального состояния парасимпатической нервной системы. Способ определения концентрации ацетилхолина в структурах мозга путем воздействия испытуемой пробы на изолированную мышцу пиявки и электрографической регистрации сокращений препарата, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, пиявку предварительно выдерживают в воде при 4-6 С в течение 4-6 сут, а затем изолированную мышцу в растворе Рингера в течение 46-50 ч. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Кадочка К Насайа М. ВоаззауоГ асеевусЬо 1 пе и 1 Ь Ьи вцспсеьйгр оГ йЬе арапеье пес 1 саеесЬа рге 1 щпагу пойе оГ бе геарргазаоГ йЬе едааЬНу оГ йЬз щебод