Способ получения посевного материала

Союз Советских Соцналнстнческмх РеслубликОП КСАН ИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ пп 889703 фЪ, ф ,.-ь(22) Заявлено 150280 (21) 2895554/28-13с присоединением заявки йо(51)М. Клз С 12 й 1/14 Государственный комитет СССР по делам изобретений н открытий(088. 8) Дата опубликования описания 151181(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОСЕВНОГО МАТ авленно 5 ита- меныпо технической ому положителья способ полу- риала, заклюи готового кони- стерильной водоймагнитной мена качалке в Наиболесущности иному эффекчения посечающийся вдиальногогомогенизашалке и по близким достигаем у являетс ного мате увлажнени атерйала ии его на ращивании5 Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для получения продуктов микробиологического синтеза при культивировании плесневых грибов в частности микроорганизмов из родов Азрегд 111 ць и Реп 1 с 1111 ца,Известны способы подготовки посевного материала в виде конидий, выращенных на твердых питательных средах. Для производственных п тельных сред перед посевом фер тов колбы со споровым материалом,в ращенным на сыпучих твердых питатель ных средах,заливали стерильной водопроводной водой, производственной питательной средой или производственной питательной средой, разведенной в несколько раз с помощью воды, Колбы помещали на качалку для набухания и подращивания конидий 1 1. ферментационной среде,.раэб йв 2-4 раза водой 1 21.Недостатками известного способаявляются возможность инфицированиябактериальной микрофлорой посевногоматериала при подготовке к инокуляции; отсутствие возможности подавления посторонней микрофлоры, ужеимеющейся в посевном материале.Цель изобретения - улучшение качества посевного материала и подавление бактериальной микрофлоры.Поставленная цель достигается,тем, что согласно способу получения 5 посевного материала, предусматривающему выращивание спор на твердых питательных средах, увлажнение готового конидиального материала стерильным раствором и подращивание его на 20 качалке до начала прорастания конидий, подращивание проводят в 0,255,0-ном растворе галлотанина.Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.Питательная среда, состоящая изпшеничных отрубей с 55-62 влажности, распределяется в колбы Эрленмей-ера общим объемом 0,25-0,75 л илив пробирки 18 х 220 мм по 4,0-15,0 г 0 по сухомч весу отрубей на каждую889703 честно бактеиальных клеток состав) ляет 2,1 10 на 1 мл культуральнойжидкости.П р и л е р 2 (опыт). В качестве посевного материала для посевапроизводственной питательной средыв ферментере на 1 м с коэффициентом заполнения 0,5 используется культура Азр. аиавог штамм 16 той жепартии, что н примере 1 (с бактериальной обсемененностью 2,310 на1 г культуры). Перед посеном в кол 20 бы с конидиями наливают по 150 мл1,5-ного стерильного нодного раствора галлотанина и прокачивают на качалке при 30 С б ч,Ферментер с питательной средой,25 содержащей кашалотовый жир, соевуюмуку, кукурузный экстракт, минеральные соли и воду, инокулируют посевной культурой, обработанной раствором галлотанина. В процессе выращивания в ферментере посторонняя микрофлора отсутствует, биомасса микроскопического гриба к 48 ч выращивания составляет 16 г/л. Активность 35 40 45 50 55 Тираж 531 Подписное ВИИИПИ Заказ 10898/44 Филиал ПП "Патент", г.ужгород,ул,Проектная,4 емкость и стерилизуется при 1 ати 1 ч, В качестве питательной среды для пробирок может быть использована также любая агаризованная среда по 8-10 мл на одну пробирку. После охлаждения питательная среда инокулируется конидиями, полученными с культуры, выросшей н пробирках на скошенной агаризованной питательной среде, из расчета 1 ф 10-1 "10 на ем 7кость. Культуру выращивают н стационарных условиях при 28-34 С 5-10 сут.оГотовая культура хранится в прохладном месте. Перед инокуляцией промышленной питательной среды колбы или "пробирки, предназначенные для посева, увлажняют 10-150 мл 0,25-5,0-ным стерильным водным раствором галлотанина и помещают на качалку при 28 34 С на 4-8 ч. Затем производят инокуляцию производственной питательной среды. В качестве минимальной концентрации галлотанина применяют его 0,25-ный водный раствор, так как использование этого вещества в меньших количествах не гарантирует гибель посторонней бактериальной микро- флоры, Максимальная концентрация галлотанина может превышать 5, однако это ограничение концентрации выбрано в связи с высокой стоимостью вещества. Использование больших концентраций галлотанина может привести к удорожанию себестоимости конечного продукта производства.Определение необходимой концентрации галлотанина для применения конкретных условий производят путем выявления наличия посторонней микрофлоры и ее количества микроскопиронанием.П р и м е р 1 (контроль) . В колбы общей емкостью 0,75 л с посевным конидиальным материаломштамм Аьрегф 11 оя аиащог штамм 16 - продуцентом липазы, выращенным на пшеничных отрубях с исходной влажностью 62, перед посевом заливают по 50 мл стерильной водопроводной воды, помещают На качалку и прокачивают б ч при 30 С. Затем произнодят посев ферментера емкостью 1 м с коэффициентом заполнения 0,5, содержащего питательную среду (кашалотовый жир, соевая мука, кукурузный экстракт, минеральные соли и вода).При проверке чистоты посевного материала микроскопированием обнаружены бактерии 4-6 в поле зрения. Рассев на чашки Петри с МПА и последующая инкубация при 37 С 24 ч показываоют наличие бактериального заражения в количестве 2,3 -10 на 1 г культуры,ликроорганизмы принадлежат к Ро уВасой.В процессе ферментации развитие.посторонней бактериальной микрофлорыпродолжается, рост Авр. аиааог штамм16 угнетен. К концу культиниронаниянес лицелия составляет 5 г на 1 лкультуральной жидкости. Активностьлипазы отсутствует. При рассене колилипазы 12,000 ед/мл (по методу Оса ,1 аваева К., 1966, Ацг. В 1 о 1. С Ьеа, 30, с,351) .Таким образом, реализация изобре - тения позволяет подавить бактериальную микрофлору и улучшить качество посевного материала.Формула изобретения Способ получения посевного материала, предусматривающий выращиваниеспор на твердой питательной среде,унлажнение готового конидиальногоматериала стерильным раствором и подращивание его на качалке до началапрорастания конидий, о т ли ч а ющ и й с я тем, что, с целью подавления бактериальной микрофлоры иулучшения качества посевного материала, подращивание проводят н 0,255,0-ном растворе галлотанина.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССРР 300513, кл. С 12 О 13/10, 1969,2. Авторское свидетельство СССРпо заявкеР 2771137/28-13,кл, С 12 .О 13/10, 1979.