Способ хранения культуры тнiовасillus ferrooxidans

Сотоз СоветскнхСоцналнстнческниРеспублик ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ, СВИДЕТЕЛЬСТВУ 1 и 859439(53)М. Кл. С 12 М 1/00 Государственный квинтет СССР пю делан изобретений и открытий(72) Авторы изобретения К.А. Ильина, А.А, Касенова и Л,Ф. Фроло а Институт микробиологии и вирусологии АН Казазхжой ССР(71) Заявитель 154) СПОСОБ ХРАНЕНИЯ КУЛЬТУРЫ ТН 1 ОВАС 11.ШЬ ГЕВВООХ 1 ОАИЬ Изобретение относится к микробиологической промьппленности и касаетсядлительного хранения промышленныхштаммов микроорганизмов,в частностиТ 111 оЬас 111 оз 1 еггоох 1 дапэ.Тионовые бактерии-автотрофные микроорганизмы, способные существоватьна минеральной среде за счет энергии,выделяющейся при окислении серы ижелеза, Т 61 оЬас 111 цз 1 еггоох 1 дапзявляется строгим автотрофом с оптимумом развития рН около 2-2,5. Культура выдерживает высокие концентрацииметаллов, мьппьяка и серной кислоты,что дает возможность использоватьее для выщелачивания металлов и мышьяка иэ руц и концентратов.Хранить штамм для промьапленныхнужд только методом периодическогопересева на жидких питательных средах затруднительно и чревато егопотерей,Известный способ хранения тионовых бактерий в лиофильно высушенном состоянии также не пригоден, таккак культура не пепеносит органических защитных сред О 3,Наиболее близким к предлагаемомуявляется способ хранения культурыв Т 11 оЬас 111 цз 1 еггоох 1 дапэ в жидкомазоте. Капли культуры объемом 0,03 млвносят в стеклянный стакан, содержащий жидкий азот, затем застывшиекапли культуры переносят в стеклянныеколбочки, которые помещают в сосудс жидким азотом (температура 12080 оС) 1.2.1,Однако этот способ трудоемкий,1дорогостоящий и не всегда приемлемдля заводских и лабораторных условий.Цель изобретения - упрощение способа и его удешевление,Поставленная цель достигается тем,что в способе хранения культурыТ 111 оЬас 111 оз Геггоох 1 дапз, выращенньй на жидкой питательной среде споследующей ее консервацией, культу-фру помещают в пробирку .или ампулу859 20 Формула изобретения со смесью песка и пирита, взятых в ,соотношении 1:3, с последующей герметизацией пробирки или ампулы, при этом смесь песка и пирита вносят в количестве 2-3 г на 1-2 мл культуры плотностью 10 клеток/мл,1 Сущность способа заключается в следующем.Тионовые бактерии выращивают нажидкой среде 9 К до уровня плотностиГ10 клеток/мл, затем вносят в стерильные пробирки или ампулы со смесью песка и пирита в соотношении 1:3в количестве 1-2 мл, песок и пиритпредварительно промывают и высушивают. Смесь тщательно перемешивают, рНв культуре 2-2,5 гН 350-370, количество окисленногожелеза 4,5-4,7 гл.Ампулы залаивают, пробирки парафи 1нируют. В таком виде культуру хранятпри комнатных температурах 2,5-3 .П р и м е р 1, Культуру ТЬ 1 оЬас 111 цз Геггоох 1 с 1 апз выращивают на жидкойсреде 9 К 48 ч,Состав среды 9 К,1-й раствор: в 700 мл дистиллированной воды растворяют сернокислыйаммоний (1 Н 4)50, Зг; хлористый калий(КС 1) 0,1 г; фосфорнокислый калийдвухзамещеный (К 2 НРО) 0,5 г; сернокислый магний (М 95047 Н 20) 0,5 г; азотнокислый кальций (Са(МО 0,01 г.2-й раствор: в 300 мл дистиллиро"ванной воды растворяют 44,2 г Ге 504 х7 Н 20 и добавляют 1 мл 10 М серной кислоты,Растворы стерилизуют отдельно:1-й раствор при 1 атм и 2-й растворпри 0,5 атм, перед употреблением обараствора смешивают. Пробирки с культурой тщательно встряхивают, закрываютрезиновыми пробками, которые обрезают по краю пробирки, парафинируют илиже запаивают в большие ампулы.После 2 5 лет хранения титр культу 9ры равнялся 10 клеток/мл, рН 1,9 439 4гН 315, количество окисленного железа 4,3 г/л.Регенерацию культуры осуществляютследующим образом.Содержимое пробирки или ампулыпереносят в качалочные колбы с пита-.тельной средой 9 К. После определенного срока инкубации, который зависитот состояния культуры, ее можно ис 0 пользовать для работы.Хранение культуры в запарафинированных пробирках и запаянных ампулахв течение 3 лет обеспечивает жизнеспособность клеток ТЬ 1 оЬас 111 цз Гегуоох 1 дапз,Таким образом, предлагаемое техническое решение позволяет упроститьи удешевить способ хранения культуры ТЫоЬас 111 цэ Геггоохс 1 апз,1, Способ хранения культуры ТйоЬас 11 1 цз Геггоох 1 дапз, выращеннойна жидкой питательной среде с последующей ее консервацией, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа и его удешевления, культуру помещают в пробирку или ампулусо смесью песка и пирита, взятых 30в соотношении 1:3, с последующей герметизацией пробирки или ампулы.2, Способ по п.1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что смесь песка и пирита вносят в количестве 2-3на1-2 мл культуры плотностью 10 кле ток /МпИсточники информации,при 4 ятые во внимание при экспертизе1. Соколов Г.А., Каравайко Г.И,40 Физиология и геохимическая деятельность тионовых бактерий. М "Наука,19 б 4.2. МапсЬее к. 1. оц гпа 1 оГ О рр 11 ед Ьас 1 ег 1 о 1 осу, чо 1 цш. 38, В 2,45 р.191-192, 1975 (прототип).Составитель Н. ПаниковРедактор К. Лембак Техред Ж.Кастелевич Корректор М. КостаЗаказ 7472743 Тираж 528 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССР фпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП Патент , г. Ужгород, ул. Проектная, 4