Способ выделения альбумина

ОПИСАЙЙЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Савв Ссввтекнх Свциалистических Рвспуслик(51) М. Кл,А 61 К 35/16 с присоединением заявкиГасударственный комитат СССР ав делав изсврвтвний и вткрытий(71) Заявите сследовательскии институт гематологии переливания крови А 1 ДЕЛ ЕН ЪБУ 4) СПОС а только инактивирует виругостадийность и большой а делают технологию изготов а малоэкономичной.Известен также способ выделения альбумина из крови человека, включающий осаждение балластных белков в присутствии 0,02 - 0,15 моль/л каприлата натрия при температуре 62 - 70 С и рН сначала 0 8,0, а затем 5,6 при охлаждении смеси докомнатной температуры 2. Однако нагревание белковой смеси до 62 - 70 С при указанных значениях рН приводит к потере альбумпна и его частичной денатурации и, 5 кроме того, требуется дополнительная очистка от каприлата натрия с помощью ионообменных смол, не обеспечивающая, однако, эффективное освобождение от примесей, присутствующих в плацентарной и 0 абортной крови человека. с гепатита. Мно расход этанол ления альбумин увеличени повышени Целью изо выхода целев производител 25 Поставленн осуществлен п ных белков в и 0,33% капр при нагреван 30 30 - 40 мин, бретения являетсяого продукта иьности процесса.ая цель достигается стадии осажденияприсутствии 25 - 26%плата натрия при рНип до 50 - 52 С в я путем балласт- этанола 6,8 - тече(43) Опубликовано 30.01 (45) Дата опубликовани Изобретение относится к технологии получения белковых препаратов и может быть использовано в медицинской промышленности. Известен способ выделения альбумина из плацентарной крови человека, заключающийся в том, что к исходному сырью добавляют ацетатный буфер до рН 4,6 - 4,8, понижают температуру смеси до ( - 8) - ( - 10)С, центрифугируют после 12 ч отстоя, растворяют осадок и добавляют каприлат натрия до концентрации 0,18%, выдерживают смесь при 0 С в течение 12 ч, центрифугируют и фильтруют надосадочную жидкость для осветления белкового раствора, доводят рН раствора до 6,6 - 7,0 с последующей пастеризацией при 60 С для инактивации вирусов гепатита и, наконец, дважды фракционируют белки этанолом с установлением рН 4,8 - 5,2 и ионной силы, равной 0,1, и выделяют альбумин 1.Известный способ выделения альбумина обладает тем недостатком, что многократные переосаждения и фильтрации в процессе фракционирования белков приводят к потере альбумина и уменьшают выход целевого продукта. Кроме того, пастеризация перед стадией фракционирования белков этанолом не обеспечивает требуемую для терапевтических целей чистоту препарата,всксоючняЪ 2089712089 Формула изобретения Составитель Т. Шмелева Редактор Н. Хубларова Техред А. КамышниковаКорректор О. Данишева Заказ 292/4 Изд Мв 120 Тираж 673 ПодписноеНПО Г 1 оиск Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 13035, Москва, М(.35, Раушская наб., д. 4/5 Сапунова, 2 Типография, пр. П р и м е р. Центрифугат 4 - отход производства гамма-глобулина из ретроплацентарной и абортной сывороток, содержащий 25 - 26% этанола, загружают в реактор, набженный рубашкой и мешалкои, и добавляют каприлат натрия из расчета 3,3 г на 1 л центрифугата, После растворения каприлата рЛ смеси доводят до 6,8 и нагревают при оО С в течение 30 мин. Затем смесь постепенно охлаждают при перемешивании до +3 С и центрифугируют. Осадок отбрасывают, а центрифугат помещают в реактор и при перемешивании охлаждают до + 7 С, доводят рН до 5,8 с помощью 1 н. соляной кислоты и добавляют охлажденный до ( - 15) - ( - 20)С 96%-ный этанол до его концентрации 40% в конце осаждения. Выпавший осадок, содержащий а- и Р-глобулины, гемоппгменты и незначительное количество альбумина, отделяют центрифугированием, а центрифугат загружают в реактор, в котором поддерживают температуру - 7"С, и добавляют при перемешивании охлажденный 1 н. раствор уксусной кислоты в 40%-ном этаноле, доводя рН смеси до 4,8. Смесь выдерживают 10 - 12 ч и отделяют осадок центрифугированием. Выход сырого альбумина составляет 4 - 5 кг на 100 л центрифугата А,Для дополнительной очистки от глобулинов и гемопигментов осадок сырого альбу- мина растворяют 2 ч в апирогенной дистиллированной воде, предварительно охлажденной до +2 С из расчета 1,6 л на 1 кг осадка и отделяют нерастворившуюся часть центрифугированием. Центрифугат осветляют, фильтруя на нутч-фильтре через бумажную мезгу или тесто. Затем к раствору альбумина добавляют охлажденную апирогепную дистиллированную воду из расчета 3 л на каждый килограмм осадка сырого альбумина, учитывая ранее добавленное количество воды (1,6 л на 1 кг). Полученный прозрачный раствор альбумина разливают по 200 мл во флаконы емкостью 500 мл и помещают в ванны охлаждающего устройства сублимационного аппарата при температуре - 40 С и замораживают в горизонтальном положении флаконов при медленном вращении вокруг оси так, чтобы раствор альбумина не попал в горло флакона. 1 О 15 20 25 30 35 10 45 50 Продолжительность замораживания составляет 40 мин. Затем лиосрильно высушивают сначала при температуре не выше - 251, а через 1016 ч постепенно повышают температуру так, чтобы температура сухого альбумпна не превышала (+35) - (+40) С.Выгрузку производят в асептических условиях, флаконы быстро закрывают прооками и извлекают из сублиматора. Герметически закупоренные флаконы можно хранить до растворения в течение 3-х месяцев в темном месте при комнатной температуре,Растворение альбумина проводят в асептических условиях, добавляя апирогенную дистиллированную воду. После растворения проводят стерилизующую фильтрацию через керамические фильтры Ф, асбестовые пластины или через пластины Миллипор. Раствор стерильно разливают во флаконы, укупоривают резиновыми пробками, закатывают алюминиевыми колпачками и пастеризуют при температуре 60 С в течение 10 ч для инактивации вирусов инфекционного гепатита, после чего препарат альбумина готов к терапевтическому применению,Способ выделения альбумина из плацентарной и абортной сыворотки крови человека, включающий осаждение балластных белков с использованием каприлата натрия и дополнительную очистку альбумина известными приемами, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и производительности процесса, осаждение балластных белков осуществляют путем введения 25 - 26% этанола и 0,33% каприлата натрия и нагревания до 50 - 52 С в течение 30 - 40 мин при рН 6,8 - 7,2.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР215428, кл. А 61 К 37/02, 1966 (прототип),2. Патент США2705230, кл. 260 в 122, опублик, 1955 (аналог).