Способ получения растворимого антигена

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 1) Дополнительное к авт. саид-ву 51 М. К 22) Заявлено 071277(2 т) 2558971/28-13с присоединением заявки Но К 39/О тет осударственныИ коСССРпо делам изобрети открытиИ 3) Приоритет Опубликовано 150579. Беллете ени Дата опубликования описания 2 Авторы изобретения В.С.Самсонова, Н.А.Бакули о-исследоват и и микробиол ский институгии осковский на эпи деми оп(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИИЯ РАСТВОРИМОГО АНТИГЕНА 2 Способ осуществляют следующимобразом.Пр им Е" р. К 1 г сухой микробной массы (во Флаконе на 500 мл)добавляют 100 мл 0,85-ного раствора хлористого натрия рН 7,2, 40 гмикробус, взвесь тщатетъйо перемешивают и рН .взвеси доводят до 7,3 спомощью "индикатора" бромтимолблау.Затем Флаконы со взвесью микробоввстряхивают в течение 4 ч на шуттельаппарате (1000-2000 колеб./мин)при +б - +10 С. После встряхивания ссуспензий выливают, центрифугируют(для отделения неразрушенных микробов) при 3-5 тыс. об/мин в течение30 мин при 0 - +боС. Полученныйцентрифугат (солевой экстракт) используют для осаждения. спиртом.К охлажденному солевому экстракт(температура +б-+10 С) добавляют5 объемов охлажденного до температуры -15 С 20 ОС спирта и смесьоставляют в холодильннке на 1,5-2 чдля формирования осадка. Затем выпавший осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин в течение20 мин при температуре - боС. Недостаточную жидкость сливают, а осадок растворяют в забуференном фиэити У Цель д предлагае ведут сол продукт о спирта, д ние 1,5-2 прогреваю ном. Кроме гревают в пящей водой продукт про- -45 мин на киого, це течение ной бан 1Изобретение относится к области микробиологии и может быть использовано для дифференциальной диаг-. ностики коклюша и паракоклюша.Известен способ получения растворимого антигена для изготовления эритроцитарного диагностикума йутем экстракции сухой биомассы С последующим осаждением из экстракта целевого продукта спиртом 11) .:Однако известный способ не обеспечивает получейия высокоспецифи.- ческого двухкомпонентного паракоклюшного антигена.Целью изобретения является получение высокоспецифического двух- компонентного паракоклюшного ан ге остигается тем, что по мому способу экстракцию евым раствором, целевой саждают 4,5-5,5 объемами алее проводят переосажде объемами спирта и затем т и обрабатывают формалиЙо 18 (53) УДК (088 8) 5793 6621ологическсм растворе рН 7,2 в объеме,равном объему экстракта, взятого дляосаждения. Нерастворившийся осадокотделяют центрифугированием при 30005000 об/мин в течение 20 мин приОос-+6 С , осадок отбрасывают, ацентрифугат используют для повторного 5осаждения. спиртом.К охлажденному центрифугату (+6"- +10 С) добавляют два объема охлажденного спирта,(-15 ОС 20 ОС) и смесьоставляют в холодильнике на 1-1,5 ч. 10Выпавший осадоК отделяют центрифугированием при 3000 о 6/мин втече-ние 20 мин при температуре -6 ОС.Надооадочную жидкость сливают, аосадок растворяют в забуференном физиологическом растворе рН 7,2 в "обьеФе, "равйом объему центрйфугата,взятого для " осажденияНерастворившийся осадок" отделя-"ют центрифугированием при 30005000 об/мин в течение 20 мин при"0+6 С, осадок отбрасывают а цент;рифугат -используют для дальнейшейобработки.Полученный центрифугат нагреваютна кипящей водяной бане в течение15-45 мин. Выпавший осадокотделяЮтценттрифугированием, отбрасйва(от ацентрифугат (растворимыйпаракоклюшный антиген) подвергают дальнейшей обработке. Затем к раствору антигена добавляют раствор коммерческогонейтрального Формалина в количестве1 по отношению к объему антигена."ьнтиген, обработанный Фобмалинбм;прййеняют при изготовлении эритро- . 35цитарного паракоклюшйого диагности 04кума. Раствор антигена хранят в холодильнике при +6 С-+10 С,Предлагаемый способ позволяетполучать растворимый антиген, содержащий два антигенных компонента,который может быть использован дляприготовления высокоспецифическогопаракоклюшного эритроцитарногодиагностикума, необходимого длядифференциальной диагностики коклюша и паракоклюша,Формула изобретения1. Способ .получения раствориМого антигена для изготовления эритроцитарного"диагностикума путем экстракции сухой биомассы с последующим осаж)(ением из экстракта целевого продукта"спиртом,о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью получения высокоспецифического двухкомпонентного паракоклюшного антиФена; экстракцию ведут солевым раствором, целевой продукт осаждают 4,5-5,5 объеМами спирта, далее проводят переосаждение 1,5-2,5,объемами спирта и затем прогревают и обрабатывают формалнном,2, Способ по п.1, о т л и ч а ю-щ и йс я тем, что целевой продукт прогревают в течение 15-45 минут на кипящей водяной бане.Источники информации, прийятые во внимание при экспертизе1. Тезисы докладов конференции по эпидемиологии и микробиологии коклюша, М., 1968, с.108.ь с уш филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.11 роектная,4Составитель С.МалютинаРедактор В.Трубченко Техред 3, Фанта КорректорЕ.ПаппЗаказ 2545/Ь Тираж 671 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035 Москва ЖРа ская набд.45