Способ обнаружения в кормах микотоксинов из группы 12, 13эпокси -трихотеценов

Союз Советских Социалистических РеспубликОП ИСАНИИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДВТБЛЬСТВУ пп 660653(22) Заявлено 04.04.77 (21) 2473360/30 1)М,КлеА 23 К 1/00// 601 Х 33/02 присоединением заявк осударатеенный каме ссср аа делам нзааретен н открытий(53) УДК 576.8, .097 (088,8) плетень5.05.7 публиковано ата опублико ния описания 11(54) СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ В КОРМАХ МИКОТОКСИНО ИЗ ГРУППЫ 12,13-ЭПОКСИ-Д 9-ТРИХОТЕЦЕНОВ2 Изобретение относится к методам токсикологических исследований зернофуража и комбикормов.Известен способ обнаружения в кормах микотоксинов из группы 13,13-эпокси-трихотеценов путем получения фракций из экстракта исследуемого образца, очистку их колоночной хроматографией и кацественнос определение микотоксинов с помогцыо тонкослойной хроматографии 11.Недостатком известного способа является то, что он позволяет только качественное определение в пробе корма микотоксинов из группы 2,13-энокси--трихотеценов и не позволяет определить их количество в исследуемом субстрате.Целью изобретения является повышение точности определения количества микотоксинов из группы 12,13-эпокси-трихотеценов в пробе корма.Г 1 оста ил еюю на я цель дости гается тем, что в способе обнаружения в кормах микотоксинов из группы 12,13-эпокси-Ь "-трихотеценов вклюцаюпн м нанесение исследуемой пробы 20 корма на пластинку с селикагелем и последующую ее хроматографию, после ее проведения ня пластинку наносят агаризированную питательнук среду для культвирования Сапд 1 да рэеис 1 о 1 горся 1 в 44 и. по характеру роста которой судят о количестве микотоксинов в корме.Способ осуществляется следующим образом.На пластинку с тонким закрепленным слоем силикагеля с нанесенным экстрактом испытуемой пробы корма после хроматографии наносят агаризированную питательную среду, поверхность которой засеваот суспензией клеток штамма дрожжей Сапд да, рвецс 1 отгорсяв 44 пК чувствительного к микотоксинам из группы 12,13-эпокси-Ь -трихотеценов. Пластинку выдерживактг 18 - 20 ч при +28 С, после цего учитывают характер роста дрожжей. Зона подавления роста дрожжей с центром в точке, К которой равен Кт вещества свидетеля (на каждую пластинку наносят 5 - 50 мкл растворов микотоксинов из группы 12, 3-эпокси-Ь -трихотеценов в кацестве контроля) свидетельствует о наличии в испытуемом образце корма микотоксинов из группы 12,13-эпокси- -Ь"-трихотеценов. Количество каждого микотоксина (Х) в испытуемом образце корма определяютя по формулеА .Е 1Б Г660653 Формула изобретения 35 О 2 мкг 0004аког Хмкл Составитель А. МакаровТехред О. Луговая Корректор А. Власенко Тираж 568 Подписное Редактор Н. Тимонина Заказ 2323/3 ЦНИИ ПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул, Проектная, 4где: А - наименьшее количество (в мкг) микотоксина из группы 12,13-эпокси-Ь 9-трихотеценов, которое вызывает образование зоны задержки роста дрожжей;Б - вес испытуемой пробы корма; В - объем экстракта испытуемой пробы, мкл;Г - наименьшее количество экстракта (в мкл), которое дает зону задержки роста дрожжей.Пример. 50 г сухого измельченного испытуемого корма 3-кратно экстрагируют пс 1 О мин в смесителе 200 мл смеси хлороформа и ацетона 1:1. Экстракты сливают в одну посуду, выпаривают до объема 5 мл и наносят в количестве от 5 до 50 мкл на хроматографические пластинки. 15а) В качестве контроля на каждую пластинку наносят 5 мкл раствора 4,15-диацетокси-13-метилбутирилокси -12,13-эпокситрихотецена-ол (микотоксина Т - 2) в ацетоне (0,1 мг/мл). Пластинки хроматографируют в системе этилацетат-толуол 3:1, вы 2 о сушивают, после чего на поверхность пластинок наносят агар Чапека с 20% пивного неохмеленного сусла, поверхность которого засевают суспензией клеток штамма Сапс(1 са рвеыдо(грса 5 44 пЕ. Пластинки выдержи вают во влажной камере при +20 С, 18 - 20 ч, после чего учитывают характер роста 44 пк. Наличие зоны подавления рост с центром в точке, которой равен К зоны, вызванной веществом - свидетелем, указывает на наличие в испытуемом образце корма микотоксина Т - 2. Количество микотоксина Т - 2 в испытуемом образце корма вычисляют по вышеприведенной формуле (А 0,2 мкг, Б =- 50 г, В = 5000 мкл, Г = 5 мкл): Ь) В качестве контроля на каждую пластинку наносят 5 мкл раствора 3,4-дигидро кси- 3-метилбутирилокси) -12,13-эпокси-ацетокси-Ь 9-трихотецена-ол (м икотокси. на НТ - 2) в. ацетоне (0,1 мг/мл). Пластинки хроматографируютв системе этилацетаттолуол 3:1, высушивают, после чего на поверхность пластинок наносят агар Чапека с 20% пивного неохмеленного сусла, поверхность которого засевают суспензией клеток штамма Сапсса ракешо 1 го 1 са 115 44 1 с. ластинки выдерживают во влажной камере при +28 С 8 ч, после чего учитывают характер роста СапсЫа рвепдогор 1 са 1544 п 1 с. Наличие зоны подавления роста Сапс 1 га рвецдо(горсав 44 ис с центром в точке, Ю которой равен К зоны, вызванной веществом - свидетелем, свидетельствует о наличии в испытуемом образце корма микотоксина НТ - 2. Количество микотоксина НТ - 2 в испытуемом образце вычисляют по вышеприведенной формуле (А = 0,35 мкг, Б 50 г, В = 500 мкг, Г= 20 мкл): О,ЗХмкг5 000 л 1 75 мкг/гУО г 20 икр Способ прост и экономичен и позволяетопределять микотоксины в концентрациях0,6 - 1,0 мкг/г и выше Точность метода 20%. Способ обнаружения в кормах микотоксинов из группы 12,13-эпокси-"-трихотеценов путем тонкослойной хроматографии, включающий нанесение экстракта исследуемой пробы корма на пластинку с силикагелем и последующую ее хроматографию, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения количества микотоксинов, после хроматографии на пластинку наносят агаризованную питательную среду для культивирования с помощью штамма Сапсда рвецс(о 1 гор(са 1 э 44 пк, по характеру роста которой судят о количестве микотоксинов в корме. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССР389446, кл. А 23 К 1/00, 1973.