Способ получения гамма-глобулина

; 1) М, Кл.аА 61 К 37(06 С 076 7/02 с прпсосдинснисм заявки Ъе123) Приоритет143) Опубликовано 28.02.79. Б 1 оллетень Ъ Государстаеииый комитат СССР по делам изобретений и открытий) Дата опубликов ия описания 28.02.7. Котова, С. В. Беляев и В, М, Степа ова Заявитель есоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГАММА-ГЛОБУЛИНА зом,Материалу ния - силохр нообменника пилтриэтокси шивают 0,01 Плазму или дят в контакт Изобретение относится к медицинской промышленности и касается получения гамма-глобулина, который применяется в медицине и ветеринарии для профилактических, диагностических и лечебных целей.Известен способ получения гамма-глобулин путем адсорбции сырья, содержащего фермент, на ионообменном материале - аминосилохроме при рН 7,0 - 8,0 с последующей десорбцией солевым буфером 11.Однако известный способ не обеспечивает высокого качества продукта.Целью изобретения является повышение качества продукта и расширение сырьевой базы.Эта цель достигается тем, что в качестве источника сырья используют плазму и сыворотку крови, десорбцию проводят ацетатным буфером при рН 4,0 - 5,0 в статических условиях и элюат обрабатывают сульфатом натрия или аммония.Способ осуществляют следующим обрана основе двуокиси кремому придаются свойства аниопутем обработки у-аминопросиланом, далее его уравнове- М фосфатным буфером рН 7,5. обессоленную сыворотку ввос влажным адсорбентом, что 30 обеспечивает в данинк условиях практически полную сорбцшо гамма-глобулина. Для десорбции гамма-глобулина с аминосилохромом используют буферные растворы, оптимальным является применение буфера с рН ниже изоэлсктрической точки гамма- глобулина. Целесоооразно применение 0,1 М ацетатного буф ра с рН 4,5. Процесс проводят в статических условиях, операцию отделения растворов от сорбента осуществляют простои дскантацией. Последующее осажден пе гамма-глобулиновой фракции сульфатом натрия пли аммония позволяет сконцентрировать и дополнительно очистить гамма-глобулнн. Из полученного таким образом чистого препарата гамма-глобулина, содержащего соли, последние можно удалить известным способом - диализом через полупроницаемую мембрану, после чсго, если это необходимо, препарат гамма-глобулина высушивают лиофильно.П р и м е р 1. В стакан емкостью 50 мл к 2 г сухого аминосилохрома 0 - 80 (для его уравновешивания) добавляют 40 мл 0,01 М фосфатного буфера рН 7,5. Буферный раствор через 5 мпн удаляют декантацией, на влажную поверхность анионообменника наносят 0,7 мл белковой фракции плацентарной сыворотки крови человека и перемешивают 15 мнн прп 20 С. Сорбент649436 Формула изобретенияСпособ получения гамма-глобулина путем адсорбции сырья, содержащего фермент, на ионообменном материале - аминосилохромс при рН 7,0 - 8,0 с последующей десорбцией соленым буфером, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения качества продукта и расширения сырьевой базы, в качестве источника сырья используют плазму и сыворотку крови, десорбцию проводят ацетатным буфером при рН 4,0 - 5,0 в статических условиях и элюат обрабатывают сульфатом натрия или аммония.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1, Авторское свидетельство СССР М 551339, кл. С 076 7/02, 1976. 45 5055 60 Редактор М. Дмитриева Техред С. Антипенко Корректор Т. Добровольская Изд. Мо 196 Заказ 83/6 Тираж 680 Подписное Сапунова, 2 Типография,пр. промывают многократно (1 ОХ 10 мл) исходным буфером, далее десорбируют гамма-глобулиновую фракцию 50 - 60 мл ацетатного буфера рН 4,5 (5 Х 10 мл), После этого аминосилохром промывают 60 мл (6 Х 10 мл) 1 М НС 1 до исчезновения поглощения при 280 нм в промывных водах деионизированной водой до рН 5,6. К 50 мл гамма-глобулиновой фракции с оптической плотностью при 280 нм, равной 0,120 опт.ед./мл, добавляют 45 мл 35,8%-ного раствора сульфата натрия до конечной концентрации 1 /о. После 1,5 ч перемешивания осадок отделяют центрифугированием, супернатант (47 мл, 0,075 опт. ед./мл) отбрасывают, а осадок растворяют в 1 мл 0,01 М фосфатного буфера, рН 7,5. При этом получают солевой раствор гамма-глобулина. Общая продолжительность выделения гамма-глобулина составляет 3 ч, Далее раствор диализуют известным методом против того же буфера и получают 1 мл гамма-глобулина с 2,22 опт. ед./мл, что составляет 37% к общему белку, содержащемуся в гамма-глобулиновой фракции, Полученный препарат не содержит примесей по данным диск-электрофореза в полиакриламидном геле и иммуноэлектрофореза.П р и м е р 2. В стакане емкостью 300 мл к 50 г сухого аминосилохрома добавляют 1 л 0,01 М фосфатного буфера рН 7,5. Буферный раствор затем удаляют декантацией и на поверхность анионообменника наносят 50 мл лошадиной противостолбнячной плазмы крови. После перемешивания в течение 20 - 30 мин при комнатной температуре сорбент промывают многократно 3 л (10 ХЗОО мл) 0,01 М фосфатного буфера рН 7,5 и десорбируют гамма-глобулиновую фракции 4 л (16 Х 250 мл) 1 М ацетатного буфера рН 4,5, Аминосилохром промыва 1 от после этого 3 л 1 М НС 1 до исчезновения поглощения при 280 нм в элюате и деионизированной водой до рН 5,6, К 2 л гамма-глобулиновой фракции прибавляют 600 г сульфата аммония до 30%-ного насыщения, После 2 ч перемсшивания осадок отделяют центрифугированием при 6000 об/мин в течение 15 мин. Супернатант - 1 л 985 мл (сумма опт, ед. 440) отбрасывают, а осадок растворяют в 50 мл 0,01 М фосфатного буфера рН 7,5. При этом получают солевой раствор гамма- глобулина. Длительность процесса выделения гамма-глобулина составляет 5 - 6 ч. Затем проводят диализ известным методом против того же буфера и получают 50 мл раствора гамма-глобулина с 8.0 опт. ед./мл. Выход гамма-глобулина составляет 47% к общему белку, содержащемуся в гаммаглобулиновой фракции. Полученный препа 5 10 15 20 25 30 35 40 рат не содержит примесей по данным дискэлектрофореза и иммуноэлектрофореза,П р и м с р 3. В стакане емкостью 300 мл к 50 г сухого аминосилохрома добавляют 1 л 0,01 М фосфатного буфера рН 7,5. Буферный раствор декантируют и на поверхность анионообменника наносят 80 мл лошадиной противостолбнячной сыворотки крови. После перемешивания в течение 30 мип при комнатной температуре сорбент промывают 4,5 л (15 ХЗОО мл) 0,01 М фосфатного буфера рН 7,5 и гамма-глобулиновую фракцию десорбируют 6 л (20 Х ХЗОО мл) 0,1 М ацетатного буфера рН 4,5. Затем аминосилохром промывают 5 л (12 Х Х 400 мл) 1 Н НС 1 до исчезновения поглощения при 280 нм в промывных водах и деионизированной водой рН 5,6. К 5 мл гамма-глобулиновой фракции добавляют 1,5 кг сульфата аммония до 30%-ного насыщения. После 2 ч перемешивания осадок отделяют центрифугированием при 6000 об/мин в течение 15 мин. Супернатант - 4 л 980 мл (сумма опт. ед. 950) отбрасывают, а осадок растворяют в 80 мл 0,01 М фосфатного буфера рН 7,5, получая при этом солевой раствор гамма-глобулина. Общая продолжительность процесса выделения гамма-глобулина составляет 6 ч. Далее проводят диализ известным методом против того жс буфера и получают 80 мл раствора гамма-глобулина с 9,6 опт. ед/мл, что составляет 52% к общему белку, содержащемуся в гамма-глобулиновой фракции. Полученный препарат гамма-глобулина не содержит примесей по данным диск-электрофореза и иммуноэлектрофореза,Предлагаемый способ позволяет получать гамма-глобулин из природного сырья плазмы и сыворотки крови, сокращает длительность процесса и обеспечивает высокое качество целевого продукта.