Способ получения водонерастворимых протеиновых препаратов

ОП САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик К ПАТЕНТУ99004/05 2) т Госудерственньй немотеСовете Мнннстров СССРоо делам нэобретеннйи отнРытнй 31) Р 2215687,2 33) ФРГ(45) Да 1 и с а ни я 18.11 публикования 72) Авторы изобретен Иностранцыих Рауенбуш, Гюнтерн Херберт Бартл-Кастнер, Бруно Бемер итц Хю Заявитель 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДОНЕРАСТВОРИМЫХ ПРОТЕИНОВЫХ ПРЕПАРАТ е относится к области "получе лиолз и с 5-60 вес.й полиметзкрилзта Иэобреовых во астворимых протеиновых препара.нных на сшитых, набухаемых сополиов, закрепл рах. Извест способ получения водонерастворимы препаратов путем взаимодеиствия потеля с раствором протеина в водно. прото иновых лимерного н спензи они В качеств сителей используют сополи меры малеинового ангидрида с этиленом и монови Ониловыми соединениями 11,Однако указанные сополимеры при реакции сводными растворами ферментов становятся болееили менее растворимыми, так что перед или вовремя реакции вводят дополнительное сшивающее дсредство, например диамин. Полученные по такомуспособу протеиновые препараты плохо фильтруют.ся и имеют растворимые фракции, что ведет кпотерям связанного фермента.Цель данного изобретения - устранение указанного недостатка.Эта цель достигается тем, что в качествеполимерного носителя используют сополимер0,1 - 30 вес.% ангидрида а,/) - моноолефиновой ди.карбоновой кислоты с 35 - 90 вес.% ди-и/или 25 гидрофильного мономера.Сополимеризацию проводят при температуре 20 - 200 С в присутствии соединений, образующих радикалы, методом осадительной или бисерной лолимеризации в растворителе или смеси растворите. лей, которые ннертны к ангидридным группам.Из ангидридов й/1 . моноолефинов нензсыщен. ных дикарбоновых кислот с 4 - 9 атомами углерода, преимущественно с 4 - 5, необходимых для получения сополимеров, используют главным образом ангидриды малеиновой, итаконовой и цитракоиовой кислот, преимущественно малиновый ангидрид. Ди- и/или полиметакрилаты или ди и/или по. лиакрилаты ди. н/или полиолы получают из соединений по крайней мере с 2 спиртовыми или фенольными, преимущественно спиртовыми НО - грунпз. ми, или продукты их взаимодействия с злкиленоксидами с 2 - 8 атомами углерода, преимущест. венно с 2 - 4, или смесь зтих злкиленоксидов, причем на 1 моль гидроксисоединения прививзют 1 - 10 , предпочтительно 1 - 10, звеньев алкилеиоксидз. Примерами злкиленокспдов являются зтиленоксид, дролиленоксил, оутилсиоксил, тримеилеяо. ксид, терзлгслепоксш 1, бисхлорметичоксзциклобутзи,окись стирала, преимущленоксид, Можно примесоединений, по крайнейпо Церевитинову атоманачало не от спиртов илми алкиленоксидамиметакрилатов. Ди- и/иполиолы, применяемыечают известными метастянем ди- и/или полнокриловай кислоты в пмалярных количеств, отретичных аминов, натемпературах ниже 20й/или полиолы по круглерода, преимуществрода, например этилепропандиол,3, бута"1,4, гександиолы, дектилолпропан, пентаэритдукты их взаимодейсалкиленоксидами. Приме тилак сациклобутан,ди- и/или полиалов. Пдиакрилаты или диметмами углерода и/илиодного моля этого диоксида с 2 - 4 атомампропантриметакрилат.крилаты этиленгликоэтиленгликоля, тетраэполиалкиленгликолейдо 500 или их смеси,сополимеризации состных, гидрофильных мприменяют полимериненасыщенные соедифункциональных групангидридным группамполимеры.Гидрофильные мавенно одну карбоксисульфо или сульфамиаминокарбонильной ижет быть замещен алкда или алкоксиметильуглерода в алкоксираследует привести акрвую кислоту,монозфиатомами углерода в слактамы, напримеркриламид, Ч эамещемер й . метил- и й .и М . акрилоилдиметколичестве 5 60 вес,%в зависимости от тнабухаемости получае,полиалкиленакснднайметакрилата, Добавктолько на гидрофил ственно этиленоксид и прапи ять продукты взаимодействия мвре, с двумя активнымиводорода, которые берут фенолов, с вьцценазванны. получения д. и/или поли.метакрилаты ди. и/или по данному способу, полуми, например взаимодей. ов с хлорангидридом метан сутствии примерно зкви. носительно хлорангидрида, имер триэтиламина, при в бензоле. Применяют ди. йней мере с 2 атомами нно с 2-12 атомами углегликоль, пропандиол,2, олы, особенно бутандиол. ндиолы, глицерин, тримеит, сорбит, сукроэа и проня с указанными выше одны также полибисхлор. олистиролоксид или смесь имущественна применяют .рилаты диолов с 2 - 4 атопродукты взаимодействия а с 1 - 10 молями алкиленуглерода или триметилолПредпочтительны диметая, диэтиленгликоля, триленг лик оля или высших с молекулярным весом ретья группа компонентов ит из простых ненасышенномеров. В качестве таких ационноспосабные простые ния, которые не имеют , активных па отношению к и образуют гидрофильные амеры имеют преимущестную, аминокарбонильную, ную группу, причем амин всульфамидной группе мо. лами с 1 - 4 атомами углеро. той группой с 1 - 4 атомамикале. В качестве примера ловую кислоту, метакрило.малеиновой кислоты с 1 - 8 иртовой группе, И нинв 1.винилпирролидон, мета ные метакриламиды, напри. меток симетилметакр илам ид таурин, Их добавляют в т общей смеси мономсрав, ебуемой гидрофильнасти и ых сополимеров и от длины юпи 1 и) мнагоосновнага, этих монамеров влияет не на:ть, на и на структуру мономера, что имеет значительное преимушествопри получении полимера, так как при этом видеполимеризации выбор ргзбавителя сильно ограничен из за условий нерастворимости смеси манаме.ров в парафиновых углеводородах и его инертности кангидридным группам. Изменением состава мономерной смеси можно в широких пределах менятьгидрофильность, густоту сетки, набухаемость и со.держание ангидридных групп в предлагаемых сапа.лимерах, пригодных для соответствующих цепей.Наряду с вцт. и/или полиметакрилатами добавляюттакже обычные средства для сшивания, ло крайнеймере с 2 несопряженными двойными связями, на.пример дивиниладипат, метиленбисакриламид, три.акрилформаль или триаллилцианурат в количествепримерно 0,01 - 30 вес.% относительно мономернойсмеси. Полимеризацию проводят в органическомрастворителе в виде осадительной полимеризации,причем полимер начинает выпадать вскоре посленачала полимеризации. Используют растворители,инертные к ангидридным группам: алифатические,циклоалифатические и ароматические углеводороды, а также галоидзамещенные углеводороды, ал.килароматику и эфиры карбонавых кислот, например гелтан, октан, изооктан, бензиновые фракции сточками кипения от 60 до 200 С, циклогексан, бензал, толуол, ксилол, хлорбензол, дихлорбензолы,зтилацетат, бутилацетат. Растворитель должен иметьтемпературу кипения выше 60 С и хорошо удалятьЗО ся в вакууме из полимера, полученного осадитель.ной полимериэацией, На 1 ч, мономерной смесиприменяют примерно 2 - 50, предпочтительно5 - 20 вес.ч. растворителя, На свойства сополимера,особенно на насыпной вес и удельную поверхность,З 5 оказывает значительное влияние вид и количестворастворителя. Во многих случаях применяют смесьвышеназванных растворителей, или начинают поли.мериэацию в растворителе для полимера и в процессе полимеризации непрерывно вводят осадитель для10 полимера, Осадитель можно добавлять также вопределенные моменты одной или несколькимипорциями, Кроме того, мономерную смесь с подходящим инициатором можно подавать в виде раствора или без растворителя в рассчитанное количество45 растворителя, так, чтобы ва время полимериэациисохранялась равномерная незначительная канцент.рация манаме ров. Благодаря применению метакри.ловых мономеров различной гидрофильности и ва.риацией условий полимеризации получают прадук50 ты хорошей механической стабильности с широкойобластью,набухаемасти, плотности и удельной поверхности,Сополимеры преимущественно получают суспензианной палимериэацией. В известном виде би.55 серной полимериэации, в котором мономеры сдобавкой органического растворителя суспенди.руют в вадеангидрид очень быстро гидролиэуется,возникающая дикарбановая кислота переходит вводную фазу и лишь незначительная часть входит в60 полимер, поэтому суспензианную полимеризациюцелесообразно проводить в органической среде. В качестве дисцерсионной среды используют, парафиновые углеводороды, например гексан, гептан, ок. тан и высшие гомологи, циклоалифатика, например циклогексан, а также смесь парафинов, например гексан, гептан, октан и высшие гомологи циклоалифатика например циклогексан, а также смесь пара. финов, например бензиновая фракция или парафиновое масло. Мономеры и инициатор растворяют в растворителе, не смешивающемся с парафинами и инертном к ангидридным группам, например ацетонитрил, диметилформамид, диметилсульфоксид впч триаьгид гексаметилфосфорной кислоты и распределяются в дисперсионной среде большей стью при добавке диспергаторов, Соотношение, объемов дкперсионной среды и мономерной фазы составляет 1:1 - 10:1, преимущественно от 2:1 до 5:1. Для стабилизации суспензии применяют, например моно. и диолеат глицерина, а также смесь этих соединений, моно и триолеат или стеарат сорбита, моноэфиры полиэтнленгликоля со стеариловым и лауриловым спиртом или нонилфенолом, моноэфи. ры полиэтиленгликоля с олеиновой, стеариновой и другими жирными кислотами с числом атомов углерода более 10, а также натриевая соль диокти. лового эфира сульфоянтарной кислоты. Эти ве. щества вводят в количествах, преимущественно 0,1 - 10% относительно мономерной смеси, и растворяют в углеводородной фазе. Размер частиц может быть уменьшен не только увеличением скорости перемешивания, но и добавлением 0,01-2%, относи. тельно мономера, дру гого поверхностно- активного вещества, например алкилсульфоната. Полимериза. цня инициируется радиальными инициаторами. Под. ходяШими инициаторами являются, например азосоединеющ или перекиси, Азоизобутиронитрил является наиболее распространенным азосоединением для инициирования полимеризации, Из перекисных соединений применяют главным образом диацилперекиси, например перекись бензоила, или перкарбонаты, например диизопропил- и дициклогексилперкарбонат, а также диалкилперекиси, гидроперекиси и эффективные в органических растворителях ре. докс. системы. Инициаторы добавляют в количествах 0,01 - 10 вес,%, преимущественно 0,1 - 3 вес.%, относительно мономерной смеси. Полимеризацию проводят при температурах примерно 20 - 200 С, преимущественно при 50 - 100 С, в зависимости от скорости распада инициаторов и чаще всего ниже температуры кипения растворителя, а при бисерной полимериэации ниже температуры смешиваемости обеих фаз. Кроме того, полимеризацию выгодно проводить в инертной атмосфере в отсутствии кис. лорода, Сополимеры, полученные осадительной полимеризацией, являются бесцветными или светло- желтыми порошкообразными веществами с насыпным объемом 1,5 - 30 мл/г, преимушественно 2 - 20 мл/г, и уд.льной поверхностью 0,1 - 500 м /г, предпочтительно 1 - 400 м/г. Содержание карбо. ншгьных групп, опред леншях титрованием после 5 10 15 0 Ж ЗО 35 40 45 50 55 б 0 о мы пения ангидридных групп составляет 0,01 - 14 мэкв/г, преимущественно 0,01 - 11 мэкв/г. Суспензионный полимер представляет собой бе. лый или слегка окрашенный бисер, который в некоторых случаях может быть неправильной формы и имеет диаметр 0,03 - 3 мм, преимущественно 0,05 - 0,5 мм, и насыпной объем примерно 1,4-8 мл/г, преимущественно 1,4 - 5 мг/г. Содержание карбонильных групп в нем, определенных после гидролиза ангидридных групп, состав. ляет 0,01 - 14 мэкв/г, преимущественно 0,02 - 11 мэкв/г. В сополимерах мономерные едини цы в основном распределены статистически. Из-за . высокой плотности сетки в сополимерах, они растворимы ие во всех растворителях, поэтому нельзя определить их молекулярный вес. Сополимеры набухают в воде до 1,1 - 3-х кратного насыпного объема и могут быть использованы в качестве смолы. носителя для фиксирования веществ, спо. собных реагировать с ангидридными группами со. полимера. Кроме того, они обладают отличной механической стабильностью, и следовательно практически не изнашиваемы. Вышеописанные смолы. носители образуют связи со всеми веществами, которые имеют функциональные группы, способ. ные реагировать с ангидридными группами поли. мера. У протеинов и пептидов это прежде всего концевые аминогруппы лизина и свободные амино.ыгруппы на концах пептидных цепей. Реакцию проводят путем добавления к перемешиваемому водному раствору поотеина при 0 - 30 С необходимого количества полимера, Весовое соотношение про. теина к смоле-чосителю может меняться в широких пределах, Хорошие выходы получают при соотношении 1 вес.ч. протеина и 4 - 10 вес,ч, полимерного носителя. Однако оптимальное соотношение зависит как от состава и структуры полимера, так и от вида протеина. Для многочисленных ферментов целесообразно добавлять стабилизаторы. В качестве таковых применяют полиэтиленгликоли и неионный смачиватель для ослабления денатурации на поверхности, а также известные сульфогидрильные реагенты или ионы металлов для специальных ферментов, рН-метром поддерживают оптимальное для соответствующей связи значение рН 2 - 9, преиму. щественно 5 - 7. При использовании пенициллинаци. лазы целесообразно значение рН 5,7 - о,8. Причем для постоянного поддержания рН добавляют неорганические (раствор едкого натра) или органичес. кие (органические амины) основания. О ходе реакции судят по количеству основания, необходимого для поддержания постоянного рН, При комнатной температуре для завершения реакции необходимо примерно 16 ч, при 4 С - до 40 ч, Затем смолу отсасывают и для отделения незначительной доли ионносвязанного протеина промывают буферным раствором или раствором поваренной соли концентрацией от 0,2 до 1 М. Присоединенное вещество определяют элементарным анализом или для ферментов и ингиби торов ферме нтативной актив.створы объединяют иную активность. меряют ферментативную ность 610 112 створыприсоеди.тивности 561Щ д ически или титрованием3. (И- фенилацетил) (НИФАБ) в качестве 5 С. Молярный коэффиствующей 6нитро31 Равен Е 4 оа нм=9090 ет превращению 1 ммоля ор 40 мл уреаэы в 32 мл г смолы-носителя, лолу. и постоянном перемеши. мпературе величину рН й 6,0 добавлением 1 й Реакция оканчивается че.т и промывают буфером ность, О 168 постыл, или жщавлениемности. Выход иа присоеот природы вещества инапример аминокислотыпептиды практически пприсоединении, но у протеипенной ферментатявной аксвыпю 90% первоначальнойПример 1 а.70 гтетркрилата, 20 г метакриловового аппщрида и 1 г аэоряют в 1 л бепзола и сиа60 С 4 ч, Затем добавляюти 200 мл бензина (Т.кип.ь 1зуют 2 чпри 70 С и 2 чный полимер основательнным эфиром (Т,кип,= 3кууме, Выход 96 г. НаОбъем набухания в водповерхность = 8,ба/г,омылеиия анпщридных грП риме р 16.6 гсмопо примеру 1 а, суспендирниц (О) пеннпиллинацнлакой раствора 1 й йаОН с поживают рН 6,3 и суслепри 25 С. Затем отсасыфильтр Мф 3 и промываютфосфатным буфером сраствор хлористого натрбез хлористого натрия.Слив и промьвныеопределяют их ферментаВ аликвотном количестве иактивность влажной смолыФерментативиая ак(НИФАК - тест), ИИсходиьй раствбрСлив и промьвныеСмола-носитель попения 92% исходнойФерментатнвную акзы измеряют колориме0,002 М раствором 6ниаминобензойной кислсубстрата при рН 7,5 ициент экстинкции соотве-аминобензойной кисл1 единица (О) соответствсубстрата в мин.При ме р 1 в. Врасводы суспендируют 400ченной по примеру 1 а, Пванин при к.омнатнойподдерживают постояннраствора едсого натрия,реэ 16 ч, смолу отсасывакак в примере 1 6.Ферментативизя акИсходный раствор рментативной актив.нное вещество зависитстава полимера. Так,и низкомолекулярныестью расходуются вов выход по присоеди.вности лежит от 20 дотив ности,метиленгликольдиметакислоты, 20 г малеино.утиро 3 пгтрила раствополимеризуют приг азоизобутиронитрила- 140 С) и полимери 80 С. Порошкообраз.промывают петролей.-носителя, получепногот в растворе 610 едив 150 мл воды. Добавощыо рН-метра поддерию перемешивают 20 чают через стеклянныйо 300 мл сначала 0,05 МН 7,5, содержащий 1 М, затем тем же буферомСлив и промывные растворыСмола-носитель после присоеди.пения 52% исходной активности 87Ферментативную активность уреазы определяют5титрованием 0,17 М раствором мочевины при 25 Си рН 6,11 единица (Ц соответствует количествуфермента, который расходуется на 1 ммоль мочеви.ны на 2 ммоля соляной кислоты в минуту.П р и м е р 1 г. В раствор 100 мг трипеина в1032 мл 0,02 М растворе хлорида кальция суспенди.руют 500 мг смолы. носителя, полученной по примеру 1 а. При постоянном перемешивании при 4 Свеличину рН поддерживают постоянной 6,3 добав.кой Ич раствора едкого натрия, Через 16 ч смолуотсасывают и промьвают буфером как в примере16,Ферментативная активность, ОИсходный раствор 110Слив и промьвные растворы 15,6Смола-носитель после присоеди.пения 58% исходной активности 64Ферментативную активность измеряют колори.метрически по Туппи (Тирру), бензол . аргинин .л.- нитроанилидом (БАПНА) в качестве субстрата.1 единица (О) соответствует расщеплению 1 ммольсубстрата при 25 С и рН 7,8,П р и м е р 2 а, Раствор 80 г тетраэтнленгли.кольдиметакрилата, 10 г метакриловой кислоты,10 г малеинового ангидрида и 1 г азобутиронитрилав 1 л бензола полимеризуют при медленном перемешивании в течение 4 ч при 60 С, 2 ч при 70 С и 1 ч.при 80 С. Полимер отфильтровьвают, трижды пе.ремешивают в бенэоле, промывают в петролейномэфире и сушат в вакууме. Выход составляет 70 г,Насыпной объем 7,0 мл/г, объем набухания в воде358,2 мл/г. Удельная поверхность 5,3 м /г. Содержа.2ние кислоты после омыления анпщридных групп2,55 мзкв/г.П р и м е р 2 б. 1 г полимера, полученного по40 примеру 2 а, взаимодействует аналогично приме.ру 16 с пенициллинацилаэой в 33 мл воды прирН 6,3.Ферментативная активность, ОИсходный раствор 118Слив и промьвные растворы 21СМола. носитель после присоеди.кения 69% исходной активности 82диаметр частиц 200 мкм. Содержание кислоты пос.ле омыления ангидридных групп 4,3 мэкв./г,П р и м е р 3 б. 1 г полимера, полученного попримеру 3 а, взаимодействует аналогично примеру 1 б с пенициллинацилазой в 33 мл водыпри рН 6,3.Ферментативная активность (НИФАБ-тест),ОИсходный раствор 118Слив и промывные растворы 43Смола-носитель после присоединения 81% исходной активности 96П р и м е р 4 а. Раствор 2100 г тетраэтиленгликольдиметакрилата, 600 г метакриловой кислоты,300 г малеинового ангидрида и 30 г азоиэобутиронитрила в 7,5 л ацетонитрила суспендируют в 21 лбензина (Т,кип, 100 - 140 С), в котором растворено150 г смеси моно- и диолеата глицерина, и полимеризуют 1 ч. при 50 С и 20 ч приб 0 С. Бисерныйполимер отсасывают, дважды перемешивают с пет.ролейным эфиром (Т.кип.= 30 - 50 С) и сушатпри 60 С, Выход 2,95 кг. Насыпной объем 4,7 мл/г.Объем набухания в воде 5,4 мл/г. Средний размерчастиц примерно 0,3 мм. Содержание кислоты послеомыления ангидридных групп 4,0 мэкв/г.П р и м е р 4 б. 1 г полимера, полученного попримеру 1 б, взаимодействует с пенициллинацила.зой в 33 мл воды при рН 6,3.Ферментативная активность(НИФАБ - тест), ОИсходный раствор 107Слив и промывные растворы 27Смола. носитель после присоединения 63% исходной активности 67П р и м е р 4 в. 20 г полимера, полученного попримеру 4 а, вводят при комнатной температуре в600 мл раствора 1 г неспецифической эластазы изпанкреазы свиньи при перемешивании. При этом рНподдерживают постоянной 5,8, Через 1 бч смолуотсасывают и обрабатывают по способу, описанному в примере 1 б,Ферментативная активность(казеин-тест), ЕИсходный раствор 2180Слив и промывные растворы 993Смола. носитель после присоеди.нения 56% исходной активности 1225Ферментативную активность неспецифическойэластаэы определяют титрованием казенном (концентрация 11,9 мг/мл) при рН 8,0 и 25 С. 1 едини.ца (Е) соответствует расходованию 1 ммоль едкогокалия в минуту.П р и м е р 5 а, Раствор 80 г тетраэтиленгли.кольдиметакрилата, 10 г метакриловой кислоты,10 г малеинового ангидрида и 1 г аэоиэобутиронитрила в 300 мл ацетонитрила полимернзуют по примеру 3 а. Выход 92 г белых, яйцеобразных частиц.Насыпной объем 2,5 мл/г. Объем набухания в воде3,2 мл/г, Удельная поверхность 1,7 м /г, Среднийразмер частиц 125 мкм. Содержание кислоты послеомыления ангилридных групп 3,5 мэкв/г.П р и м е р 5 б, 1 г полимера, полученного попримеру 5 а, взаимодействует с пенициллинацила.зой в 33 мл воды при рН 6,3 аналогично приме.ру 1 б.5 Ферментативная активность(НИФАБ-тест), ОИсходный раствор 118 Слив и промывнь,е растворы 34 Смола-носитель после присоьди.нения 52% исходной активности . 61П р и м е р 6 а. Раствор 50 г эпцгенгликоль.диметакрилата,40 г метакриловой кислоты, 10 г малеинового ангидрида и 1 г аэоизобутиронитрила в 300 мл ацетонитрила суспендируют в 1 л бензина 5 (Т,кип. = 100 - 140 С), в котором растворено 5 гсмеси моно и диолеата глицерина, и полимеризуют 20 ч при 60 С, Бисерный полимер отфильтровывают, трижды суспендируют в бензоле и дважды в петролейном эфире (30 - 50 С) и сушат в вакууме 20 при 50 С. Выход 87 г. Насыпной объем 4,8 мл/г.Объем набухания в воде 5,6 мл/г. Удельная поверх.ность 13,2 мф/г. Содержание кислоты после омыле.ния ангидридных групп 4,2 мэкв/г. 10 25 П р и м е р б б, 1 г полимера, полукнного попримеру б а, взаимодействует с пенициллинацилаэой в 33 мл воды при рН 6,3 аналогично примеру 1 б,Ферментативная активность 30 (НИФАБ - тест), ОИсходный раствор 118Слив и промыв ные растворы 29Смола. носитель после присоедине.ния 47% исходной активности 55 П р и м е р 7 а, Раствор 50 г тримелолпропантриметакрилата, 30 г метакриловой кислоты, 20 г малеинов ого ангидрида и 1 г аэоиэобутиронигрила в 300 мл ацетонитрила полимеризуют аналогично 40 примеру 6 а. Выход 86 г. Насьшной объем 2,0 мл/г,Объем набухания в воде 2,2 мл/г. Средний размер 1.астиц 30 мкм. Содержание кислоты после омыления анпщридных групп 4,1 мэкв/г. 45 П р и м е р 7 б. 1 г полимера, полученного попримеру 7 а, при комнатной температуре и постоянном перемешиваиии смешивают с раствором 100 мглизина в 32 мл воды, ВеличинурН поддерживаютпостоянной 6,3. Через 16 ч смолу отсасывают, сус.50 пендируют в 50 мл 1 М раствора хлористого натрия,отсасывают и промывают 100 мл воды. Осадоксушат в вакууме при 100 С и определяют содержание азота по способу Кьельдаля, Сухой вес 860 кг.Содержание азота 1,5% (соответственно содержа.65 нию смолы с 65 мг лизина), что соответствует 65%введенного количества лизина.П р и м е р 8. Полимеризацию проводятаналогично примеру ба (в опытах 1 - 7 изменяютколичества малеинового ангидрида), Результатыец опытов приведены в таблице,оказатель Количеств ТОГМ (г) 65 МАК (г) гО О: 1 З 1 М - тетраэтиленгликольдиметакрилат, (г); МАК - мета кислота, (г); МА - малеиновый ангидрид, (г) , АИБН - азо нитрил, (г), эмульгатор.смесь моно. и диолеата глицерина, нитрил и бензин, (мл); УН насыпной объем(мл/г); УНб бухания в воде, (мл/г); кислота. содержание кислоты после ангидридных групп. криловая зобутиро г) ацето объем на. ри меча омьшения ор 70 г тетраэтиленггиакриловой кислоты, 10 г1 г азоизобутиронитрила ии воздуха и при медлен. еют 4 ч при 60 С, 2 ч . Высокоцисперсньй полив бензоле и дважды в т и сушат в вакууме, Вы. м.6,8 мл/г, Объем набухаодержание кислоты после рупп 1,64 миллиэкв/г.полимера, полученного по ствует с пенициллинацила рН 6,3 аналогично притив нос 107 26 створь ле присоедий активности 38,П р и м е р 9 а. Ракольдиметакрилата, 20малеинового ангидридав 1 л бензола в отсутсном перемепиваниипри 70 С и 2 ч при 80мер суспендируют трацетонитриле, отсасываход 94 г, Насыпной обния в воде 7,6 мл/г.омыления ангидридиыхПример 9 б.1примеру 9 а, взаимодезой в 32 мл воды п имеру 1 б,Ферме нтативная(НИФАБ - тест), ОИсходный растворСлив и промывны раСмола. носитель ппения 36% исходи П р и м е р 10 а, Раствор 50 г тетраэтиленгли.40 кольдиметакрилата, 40; й-винилпирролидона, 10 гмалеинового ангидрида и 1 г дициклогексилперкарбоната в 200 мл ацетоыприла суспендируют в 1 л бензина (Т,кип.= 100 - 140 С), который содержитг 5 г смеси моно- и диолеата глицерина,. и при переме.о45 шивании греют 18 ч при 50 С. Затем добавляют 1 гинициатора и перемешивают 8 ч при 60 С, Полимерные шарики промывают бензолом и петролейным эфиром и сушат в вакууме. Выход 54 г прозрачного бисера. Насыпной объем 1,6 мл/г, Объем набухания 50 в воде 2,4 мл/г. Средний диаметр частиц 0,3 мм.Содержание кислоты после омыления ангидридных групп 3,3 мэкв/г, Содержание азота 3,4% (27% й винилпирролидон) .П р и м е р 10 б, 1 г полимера, полученного по 55 примеру 10 а, взаимодействует с пенициллинацилазой в 33 мл воды при рН 6,3,Ферментативная активностьСлив и промывные растворы 26 Смола носитель после присоедннения 77% исходной активности 82П р и м е р 11 а. Раствор 70 г тетраэтнленгли. кольдиметакрилата, 20 г метакриламида, 10 г ма. леинового ангидрида, 1 г азоизобутиронитрила и 200 мл ацетонитрила суспендируют в бензине анало. гично примеру 5 а н полимеризуют, Выход 93 г. Насыпной объем 2,0 мл/г. Объем набухания в воде 3,3 мл/г. Содержание кислоты после омыления ан. гидридньтх групп 1,7 мэка/г. П р и м е р 11 б. 1 г полимера, полученного попримеру 11 а, взаимодействует с пеницнллинацилазой в 32 мл воды при раб,3 аналогично примеру 1 бферментатнвная активностьСмола носитель после присоеди нения 3 1% исходной активности ЭЭ б формула изобретения Способ получения водонерастворнмых протеиновых препаратов пуим взаимодействия полимерного носителя с раствором протеина в водно.1 О сусле нзионной среде, о т л н ч а ю щ и й с я тем, что,с целью получения протеиновых препаратов с высо.кой степенью сшивки, в качестве полимерного носителя используют сополимер 0,1-30 вес,% ан.гидрида (Ц 1 моноолефиновой дикарбоновой кис 1 Ь лоты с 35-90 вес.% ди и/или полиметакрилата ди.и/нли полиола и с 5-60 вес.% гндрофильного моно.мера.Источники информации, принятые во вниманиепри Жспертизе:20 1, 81 осИаппатгу, 3. 1964, 1905-1909.Фнпнан ПНИ "Патент", г Ужгород, ун, 11 роентна, а Сооаантель В, Ионко Терад Н, ндрвйчун Корректор А Лвеща- ар Тнрее а 1 О Иодпненое Ц 11 ИИПИ рогунреванного коатнтет Сонат Мнннттроа СССР но делам наобретеннй н отнрцтн1 ЗЮ, Моска, Ж, Р 1 внеиаа нб н, 4/5