Способ количественного определения пектина

Союз Советснин Со цналнстическнн Республнн(23) Приоритет осудврственнмй ноннтетйввтв Мнннотров СССоо делам изобретенийн отнрытнй 15,12.785 юллетень46 ования описания 18,12,78 43) Опубликова 45) Дата опубл(71) Заявитель 4) СПОС КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕЛЕЛЕНИ ПЕКТИНЛ юИзобретение относится к количественному определению пектина, который широко применяется в пищевой, микробиологической, текстильной, полиграфической промышленности, а также в медицине.Известны способы количественного определения пектина, основанные на образовании окрашенного соединения галактуроновой кислоты с цветореагентом (цистеин, нафторезорцин, карбазол),Наиболее близким к изобретению потехнической сущности и д стигаемому результату является способ количественного определения пектина, по которому выделенный из экстракта пектин или препарат пектина растворяют в воде и прибавляют 0,05 и, гидрат окиси металла длядиметоксилирования пектина так как неодинаковая степень метоксилирооания влияет на показатели оптической плотности,Через 30 мин раствор нейтрализуют0,05 и. раствором соляной кислоты, Затем разбавляют раствор пектина до 8100 мкг пектина в 1 мл раствора. Затем 0,5 мл полученного ооаствора кипятят с охлажденным до 3-5 С реактивом концентрированной серной кислоты 6 мин, охлаждают в воде со льдом, после чего добавляют 0,1 мл 0,2%-ного реактива карбазола и кипятят ельце 10 мин. После охлаждения измеряют оптическую плотность при длине волны 535 нм, Расчет производят по калибровочной кривой, построенной по галактуроновой кислоте. Однако точность определения пектина недостаточна, так как окрашенные соединения с карбазолом наряду с пектином образуют другие углеводы анализируемой смеси, Кроме того, большое число операций,особенно стадии разложения пектина при кипячении в концентрированной серной кислоте и взаимодействия продуктов разложения с карбазолом, из-за зависимости от окислителей и колебаний температуры оснижают точность определения.Недостатками способа также являются высокая себестоимость за счет значительного расхода реактивов, и том числе637671 Филиал 1 Г 1 Г 1 "Патент, г. Ужгород, ул, Проектная, 4 дефицитных реактивов (карбазол, сернаякислота) и затрат труда, недостаточнаябезопасность иэ-оа применения агрессивного реактива - концентрированной серной кислоты при кипячении за счет выделения ядовитых окислов серы в атмосферу и возможности химических ожогов.Цель изобретения - упрощение способаи повышение его точности,Это достигается тем, что по предлага емому способу в качестве цветореагента используют щелочной агент, преимушественно гидрат окиси натрияа оптическую плотность измеряют при рН 1112 и длине водны 375-385 нм, 13Способ осуществляется следующим образом.Препарат пектина или пектин, выделенный из питательной среды, в концентрации0,1-1 мг,мл растворяют в воде, затем 6приливают цветореагент - гидрат окисинатрия до рН 1112 и измеряют оптическую плотность раствора при длине волны375-385 нм. Стандартное отклонение1+1,5%. Время анализа 30 мин.23П р и м е р 1, 0,050 г препарата пектина растворяют в 50 мл дистиллированной воды, Затем в четыре пробирки приливают 7,5 мл раствора пектина. В контрольную пробирку приливают 2,5 мл во- фды и размешивают, а в опытные пробирки приливают 2,5 мл 0,1 н, гидрата окиси натрия и размешивают. Оптическаяплотность опытных растворов при пдиневодны 380 нм 0 640 0 650 0 645По калибровочной кривой зависимости оптической плотности щелочных растворовпектина при длине волны 380 нм от концентрации пектина находят соответствукшее количество пектина, Количество пектина в 7,5 мл реакционной смеси 6,18,6,28 и 6,20 мг. Среднее количество пектина 6,22 мг. Процентное содержаниепектина 6,22:7,5=82,9%. Бремя анализа30 мин, Стандартное отклонение+0,65%,П р и м е р 2. Определение содержанияпектина в питательной среде лдя культивирования Др-ааапог 1-16.К 1 мд питательной среды прибавляют7 мл 96%-ного спирта для осажленияпектина, размешивают и пентрифугируютпри 2000 об/мин в течение 5 мин. НадЦН 1 ЯПИ Заказ 7092/32 осадочную жидкость сливают, а к осалкуприбавляют 2,5 мл спирта лля прс.лывкиосадка, центрифугируют при 2000 об/минв течение 5 мин. Промывку повторяютеше раз, Осадок пектина растворяют в7,5 мл воды, добавляют 2,5 мл 0,1 н,МаОН, размешивают и измеряют оптическую плотность раствора при длине волны380 нм на спектрофотометре ( в контроль-.ном растворе вместо ИаОН добавлено25 мл воды). Оптическая плотность0,454, 0,464, 0,469, Соответственно покалибровочной кривой находят количествопектина в 1 мл питательной среды З,ЗО,3,34 и 3,36 мг, Среднее содержаниепектина 3,33 мг/мл, Стандартное отклопение +0,7%. Время анализа 30 мин,Таким образом, улучшаются качествабиохимпрепаратов на основе. пектина, таккак обеспечивается оперативный контрольза содержанием пектина в процессе производства, что особенно существенно приподученни таких важных пектолитическихферментов, как пектаваморин пектоцимерин. Кроме того, повышается точность(с 3 ло 15%) и уменьшается время определения пектина (с 5 ч до 30 ллин),за счет исключения стадий и сокрашенияреагентов значйтельно упрощается процессснижается себестоимость о срелеленияпектина. Предлагаемый способ предотвращает загрязнение окружающей среды иповыииет безопасность процесса из-заисключения агрессивного реактива - серной кислоты,Формула изобретения Способ количественного определенияпектина путем обработки его волного раствора цветореагентом с последующим измерением оптической плотности подученногоокрашенного соединения, о т д и ч а -ю ш и й с я тем, что, с целью упрощения способа и повышения его точности,в качестве цветореагента используютщелочной тент, преимущественно гидратокиси натрия, а оптическую плотностьизмеряют при рН 11-12 и длине волны375-385 нм,Тираж 1070 Подписное