Способ количественного определения ванилилминдальной кислоты в моче

О и И С А Н И Е (и)940069ИЗОБРЕТЕН ИяК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Ссиоз СоветскикСфциалистическикРеспубттик(51)М. Кл. С О 1 М 33/48 3 Ьеударстюный квинтет СССР во аеам нзобретеннй н открытий(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВАНИЛИЛ-МИНДАЛЬНОЙ КИСЛОТЫ В МОЧЕ 1Изобретение относится к биохимии конкретно к способам определения ванилил -миндальной кислоты в моче, и может быть использовано в медицине для оценки состояния симпатоадренало. вой системы и диагностики опухолей симпатической нервной системы.Известен способ определения ванилил-миндальной кислоты ( ВМК ) в моче,путем ионообменной хроматографии этилацетатного экстракта мочи на колонке, заполненной ионообменной смолой - амберлитом или дауэксом с элюцией уксуснои кислотой, повторной экстракции этилацетатом, деметилирования ванилил-миндальной кислоты с целью перевода ее в 34-дигидрооксиминдальную кислоту, повторной экстракции хроматографией на колонке, заполненной окисью алюминия, с использованием в качестве элюента серной кислоты, Для определения количества ВМК к последующему,элюату добавляют молибдат-нитратный реа 2гент с образованием окрашенного продукта и измеряют оптическую плотность 111.Однако способ является длительным и трудоемким в связи с многостадийностью процесса.Цель изобретения - упрощениеспособа количественного определенияванилил-миндальной кислоты в моче.Поставленная цель достигаетсяспособом количественного определенияВМК в моче путем хроматографии этил,ацетатного экстракта мочи и перевода ВМК в окрашенное соединение, об"работкой анализируемой фракции реагентом с последующим определениемоптической плотности получаемогоокрашенного соединения, по которойопределяют количество исследуемого 2 о вещества, причем этилацетатный экс"тракт подвергают тонкослойной хроматографии на диэтиламиноэтилцеллюлозе с использованием в качестве подвижной фазы 0,4-0,6 М глицин-соляно"ческими заболеваниями печени, же; удка и поджелудочной железы. Содержа" ние ВМК в суточяом количестве моци у здоровых людей от 1,3 до 7,6 мг, в среднем 3,97 ф 0,33 мг, у больных от 1,2 до 27,3 мг,в среднем 5,43+0,89 мг,Технико-экономическая эффективность предлагаемого способа заключается е более простом и удобном определении ВМК в моче в серийных клинических исследованиях. Формула изобретения Способ количественного определенияванилил-миндальной кислоты в мочепутем хроматографии этилацетатногоэкстракта мочи и перевода ванилил-мин -дальной кислоты в окрашенное соединение обработкой анализируемой фракции реагентом с последующим определением оптической плотности окрашенно .о соединения, по которой определяют количество ванилил-миндальной кислоты, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью упрощения процесса -этилацетатный экстракт подвергают тонкослойной хроматографии на диэтиламиноэтилцеллюлозе с использованием вкачестве подвижной фазы 0,4-0,6 Мглицин-солянокислого буфера с рН 3,053,2, а перевод ванилил-миндальнойкислоты в окрашенное соединение осуществляют с помощью диазотированногопаранитроанилина непосредственно вслое сорбента.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе. ТМайа 561 Е, Ехрегщепа 1 апдс 11 п 1 са вид 1 еБ оп сайесЬо 1 ащ 1 пещейаЬо 11 зщ, Керогаз 1. Езй 1 щай 1 оп оГЬощочап 111 с ас 1 д апд чап 111 у 1-щапде 11 с ас 14 1 п цг 1 пе. Го 11 а епсЗосг 1 по 1 оп 1 са,1 ароп 1 са, 1970, 46, М 5,рр,539-558,Составитель О. СкородумоваРедактор С, Юско Техред М.Гергель Корректор М. Демчик Заказ 4659/66 Тираж 887 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, В, Раушская наб., д, 4/5Ужгород, ул. Проектная, 4 Филиал ПГ 1 Г 1 Патент", г,3 940069 4 кислого буфера рН 3,05-3,2 а перевод ванилил"миндальной кислоты вокрашенное соединение осуществляютс помощью диазотированного парвнитроанилина непосредственно в слое 5сорбента.Предлагаемое изобретение позволяетзначительно упростить процесс ипредставляет возможность серийногоопределения ванилил-миндальной кислофты в моче для клинических целей.П р и м е р. Упаренный досухаэтилацетатный экстракт из 1 мл мочирастворяют в 0,1 мл абсолютного этилового спирта, 0,01 мл раствора наносят капиллярным аппликатором настеклянную пластинку размером 5 х 20или 20 х 20 см с тонким слоем ДЕАЕцеллюлозы, На ту же пластину в качестве "свидетеля" наносят 5 мклраствора ВМК с концентрацией 100 мкгвмл,Пластину устанавливают в хромато"графическую камеру, заполненную на1 см по высоте 0,45 М глицин-солянокислым буфером с рН 3,05. Разрешение хроматограммы осуществляется втечение часа, По окончании разрешения пластину высушивают феном и опрыскивают свежеприготовленным раст"вором диазотированного паранитроанилина. ВМК проявляется е виде фиолетового пятна на расстр ячии 6-7 см отстарта (В=0,40). После высушиваниясоскабливают е пробирку участок цел 35люлозы с пятном ВМК и заливают необходимым для фотометрии объемом метанольной щелочи. лмирование окрашенного вещества с периодическимвстряхиванием длится 30 мин, после4 вчего пробирку с элюатом центрифуги"руют в течение 10 мин при 000 об/мини фотометрируют супернатант при длине волны 520.нм.Данным способом исследовано 2545здоровых лиц и 37 больных с хирурги"