Способ получения рибофлавина

О П И С А Н И Е п 11608833ИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических(45) Дата опубликования описания 07.06.78(51) М. КлР С 12 Р 5/04 Гасударственные комитет Совета Министров СССР по делам изобретенийи открытий 53) УД 6(088.8нститут биохимии и физиологии микроорганизмов АН СС(71) Заявите 4) В кач щивании виде пар томатиче углерода при выранол, поступающий в ают с помощью авподдерживая на роль за содержанит хроматографом. ласти микро во-витаминных ию рибофлави тве источника используют мет в. Метанол под кого дозаторавыше 1%, кон ла осуществляю рибофлавина, 5 ие микроорлавина в уссреде, содера и минсраль 10.ровне нем мета 1 имеба является ерспективных для их вырататочно высо 1 е процесс ся тем, что я рибофлав льзуют дро том в качес выращиван ч ж- ть 2 цента исп щим образо амм ИБФМ эрации на пминеральн ики углерод У иые аИзобретение относится к оббиологического синтеза белковеществ, в частности к полученна на основе метилового спирта.Известен способ полученияпредусматривающий выращиваганизмов - продуцентов рибофловиях аэрации па питательнойжащей источники углерода, азотные соли 1.Недостатком известого сносиспользование недостаточно пмикроорганизмов и субстратовщивания, его сложность и недоский выход продукта,Цель изобретения - упрощенповышение выхода продукта,Поставленная цель достигаетпредлагаемом способе полученина в качестве продуцента испожи вида Сапс 1 сна ЬоЫ 1 пй, при эве источника углерода придрожжей используют метанол.Кроме того, в качестве продузуют штамм ИБФМ у 671.Способ осуществляют следуюКультуру Сапс 1 Ыа ЬоЫ 1 пй шт671 выращивают в условиях атательной среде, содержащейсоли, источники азота и источи ОСОВ ПОЛУЧЕН ИЯ 1 ИВОфЛАВИНА В;.;:,/;Штамм Сапс 1 Ыа Ьо 1 сйп 11 ИБФМ у 67 ет следующую характеристику.Морфологические и культуральные признаки.Через 3 дня в жидком сусле 7 Бал. при 28 С клетки овально-удлиненные, реже округлые. Размеры клеток (1,5 - 3) Р,(3 - 5) р. Пленка беловатая сухая, припудренная, осадок скудный. Через месяц при 17 С штрих на суслоагаре кремового цвета, матовый, бархатистый. Псевдомицелий (на стекле, на луковом агаре) хорошо развит, древовидно-ветвящийся, бластоспоры овальной формы, собраны в цепочки. Колонии на сусло-агаре круглые, беловатые, матовые, складчатые в центре, края ровные.Образования аскоспор, баллистоспор, телиоспор не наблюдают.Физиологические признаки.Сбраживают только глюкозу.Ассимилирует глюкозу, этанол, метанол, глицерин, этиленгликоль, эритрнт, сорбит, маннит, янтарную н яблочную кислоту.608833 45 50 55 60 Изд. Мо 428 Заказ 688/16 нпо Тираж 568 Подписное Типография, пр. Сапунова, 2 3Не ассимилирует галактозу, сахарозу, мальтозу, лактозу, сорбозу, целлобиозу, трегалозу, мелибиозу, мелицитозу, раффинозу, инулин, крахмал, О-ксилозу, Э-арабинозу, рибозу, рамнозу, адонит, дульцит, молочную кислоту, лимонную кислоту, инозит, винную кислоту, углеводороды.Нитр аты ассимилирует.Жир не расщепляет.Крахмал и внеклеточные полисахариды не образует.Арбутин расщепляет слабо.Желатину не разжижает.Нуждается в биотине (0,0005 7 мл), оптимальная температура роста 29 С, максимальная температура роста 32 С.Штамм СапйЫа Ьо 1 йпй ИБФМ у 671 хранится в коллекции культур Института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР под указанным номером.Аминокислотный состав Сапйда Ьо 1 йп 11 ИБФМ у 671, в % от белка;Лизин 3,46 Гистидин 0,78 Аргинин 2,42 Аспарагин 5,64 Треонин 2,53 Серии 2,73 Глутамин 5,30 Пролин 1,5 Глицин 2,05 Алании 2,58 Валин 2,05 Мети онин 0,58 Изолейцин 2,07 Лейцин 3,07 Тирозин 1,59 Фенилаланин 1,69 Цистеин О,5Итого 41,09.П р и м ер. Культуру СапдЫа ЬоЫ 1 п 11 штамм ИБФМ у 671 поддерживают на агаризованной среде 8 Е следующего состава, г:(КН 4) НР 04КН,Р 04 0,7 Мд 504 7 НзО 0,8 ИаС 1 0,05Микроэлементы, мг:СаС 12 2 Н 20 0,66 Сц 504 5 Н,О 0,16 Хп 304 6 Н 20 0,18 Мп 304 4 Н 20 0,15 СоС 12 6 Н,О 0,18 РеС 1 з 6 НзО 8,35Витамины:Биотин, мл 0,0005 р 1 Агар, г 20 Вода дистиллированная, л До 1В качестве источника углерода и энергии используют метанол в виде паров.Засев инокуляционной среды производят с 5 10 15 20 25 Зо 35 40 косяков после выращивания их в течение 48 ч при 27 - 28 С.Для выращивания инокулята используют колбу, в которую вносят 100 мл минеральной среды указанного выше остатка. Колбу укрепляют на качалке при 200 об/мип и выращивание проводят при 27 - 28 С 24 ч.Полученную культуру используют для засева лабораторного ферментера. Ферментер с рабочей емкостью 1,5 л заполняют средой 8 Е и инокулятом в количестве 100 мл.Метанол подают в среду автоматически дозатором и поддерживают на уровне не выше 1/о, контроль за содержанием метанола осуществляют с помощью хроматографа Хром(ЧССР) .Расход воздуха в ферментере 0,8 - 1,0 л/мин при 500 об(мин мешалки, температура 28 С, рН 5,5 поддерживают автоматически подтитровкой 5% -ным раствором аммиака,Контроль за ростом культуры осуществляют по сухому весу биомассы и по расходу аммиака.Выращивание проводят 4 суток, после чего содержание рибофлавина в биомассе 27 мг/л и всего в 1 л содержится 71 мг рибофлавина. Биомассу отделяют от культуральной жидкости центрифугированием, высушивают лиофильно и взвешивают. Из 1,5 л получают 48 г сухой биомассы, что составляет 32 г/л,Предлагаемый способ получения рибофлавина по сравнению с известным техническим решением той же задачи позволяет повысить содержание биомассы в 5 - 7 раз, увеличить содержание рибофлавина с 20 мкг/мл до 70 - 80 мкг/мл, т. е. в 3,5 - 4 раза.Способ прост в осуществлении и позволяет использовать более перспективные микроорганизмы и субстрат для их выращивания. Формула изобретения1. Способ получения рибофлавина, включающий выращивание микроорганизмов - продуцентов рибофлавина в условиях аэрации на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, отл ич а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения процесса и повышения выхода продукта, в качестве продуцента используют дрожжи вида Сапйда ЬоЫ 1 пй, при этом в качестве источника углерода при выращивании дрожжей используют метанол.2, Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве продуцента используют штамм ИБФМ у 671,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР330189,кл. С 12 Р 5/04, 1972.