Способ выращивания вируса

О Л И. С. А Н И Е ц 9380ИЗОБРЕТЕН ИяК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СомтсиихСоциал исти чесюаРеспублик(45) Дата опубликования описания 22.03.78(51) М. Кл. С 12 К 9/00 Гасудврстаененй камнтат Вааата Мнннстраа СССР кс данам нзюбратаннй н сткритнй(54) СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ ВИРУСА 200 2500 500 1 0,1 1 1 0,52,0 0,1 1,0 1,2 1,2 1,0 2,0 0,2 10,0 1,0 20,0 450 180 180 99 175 30 70 200 150 1Изобретение относится к области медици. ны, а именно к вирусологии.Известен способ размножения вирусов в культуре клеток, заключающийся в том, что для выращивания вируса используют суспен зию клеток культуры, которую в свою очередь получают посредством непрерывного культивирования клеток 111.Однако известный способ не обеспечивает непрерывного получения вируса в повышен ной концентрации.С целью непрерывного получения вируса в повышенной концентрации в процессе выращивания непрерывно добавляют неинфицированную клеточную культуру в логарифмичес кой фазе роста в концентрации 0,8 - 1,2 млн/мл и одновременно отбирают 0,3 - 0,7 объема вирусной суспензии в сутки,Способ осуществляют следующим обр азом. 20Пример. В ферментере размножают клетки Не 1 а в объеме 600 мл до концентрации 550 тыс. жизнеспособных клеток в 1 мл при температуре 37 С и скорости вращения мешалки от 200 до 300 об/мин. Для размноже ния клеток используют среду Бирча следующего состава:Соли, мг/л:ИаС 1 5900КС 1 400 Зо МдС 1 бН 20ИаНСОзХаНеР 04 2 НОСаС 1 2 НОМпС 12 4 НОХпЯ 047 Н 20геЯ 04 7 НОСи 504 5 Н 20Витамины, мг/л:-Инозитолд-БиотинФолиевая кислотаНикотин амидПантотенат СаПиридоксин гидрохлоридТиамин гидрохлоридРибофлавинГипоксантинВ 1 еХолин хлоридАминокислоты, мг/л:1-Аргинин НС 11-Изолейцин1-Лейцин1-Гистидин НС 11-Лизин НС 11-Метионин1-Фенилаланин1-Треонин1-Валин595380 Составитель С. МалютинаТехред Л. Гладкова Корректоры: Т. Добровольскаяи Л, Брахнина Редактор М. Дмитриева Изд Лго 270 Тираж 568 НПО Государственного комитета Совета Министров СССРПодписное Заказ 816 МОТ, Загорский филиал 31-Алании 90 1-Глицин 15 1-Сериен 20 1-Триптофан 20 1-Цистин 75 1-Тирозин 70 1-Глютамин 100 1-Глютамин Ма 1530 Дополнительные компоненты, мг/л:Глюкоза 2000 Феноловый красный 10 Среду Бирча обогащают 1% сыворотки эмбриона коровы, свободной от антител и ингибиторов к вирусу парагриппа 3 типа. Клетки заражают путем внесения 5 мл вируса парагриппа 3 серотипа (штамм у 2932), имеющего инфекционный титр 10 ТИДзо/мл (множественность инфекции 1 ТИДзо нз 60000 клеток).Через 7 суток культивирования, когда содержание инфекционного вируса в культу- ральной жидкости составляет 7,5 1 д/0,5 мл, содержание гемагглютининов 1:8 и процент зараженных клеток 51% при снижении жизнеопособности популяции до 30%, подключают перфузионную связь с хемостатом. К этому моменту концентрация жизнеспособных клеток в хемостате составляет 960 тыс/мл, объем равен 500 мл. Для размножения клеток,в хемостате используют среду Бирча с 2% сыворотки эмбриона коровы. Резервуар подачи среды содержит среду Бирча с 1% сыворотки эмбриона коровы, Скорость подачи среды, осуществляемая при помощи перистальтических насосов по линии в хемостат, составляет 240 - 360 мл/сутки при температуре 4 С.Через сутки содержание жизнеспособных клеток в ферментере увеличивается до 55%,4концентрация инфекционного вируса возрастает в 10 раз.В течение последующих 8 суток концентрация клеток в хемостате колеблется от 0,8 до 1,2 млн/мл, содержание инфекционного вируса в вирусном ферментере.составляет от 7,45 до 9,5 1 д ТИДзо/мл, титры гемагглютининов от 1:8 до 1:16, процент жизнеспособных клеток от 40 до 65%, а содержание клеток, 10 поддерживающих репродукцию вируса (с положительной гемадсорбцией), колеблется от 56 до 90%.Использование предлагаемого способаобеспечивает возможность непрерывного по лучения вирусной биомассы, а также повышение концентрации инфекционного вируса в 100 раз по сравнению с результатами, получаемыми при суспензионном культивировании.20 Формула изобретения Способ выращивания вируса, например па рагриппозного, в культуре клеток, о т л и ч а ющийся тем, что, с целью непрерывного получения вируса,в повышенной концентрации, в процессе выращивания непрерывно добавляют неинфицированную клеточную культуру 3 О в логарифмической фазе роста в концентрации 0,8 - 1,2 млн/мл и одновременно отбирают 0,3 - 0,7 объема вирусной суспензии в сутки. 35 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Сергеев А, Размножение вирусов животных в культуре ткани. М., 1966, с. 230.