Способ получения литических ферментов

(61) Дополнительное к авт. свид-ву - (22) Заявлено 28.07.75 (21) 2163334/28 2М. Кл. 13/10 заявки присоелинени23) Приоритет Ц)(ЩЛМВЫ 1 МОМУ И юн Маци БР ы рив мйрюйотцщй(45) Дата опубликования етен аниЯ 11.01,7,Гусев, К.А.Ник а и Т,Г,Юд Трудового Красного ет им. М,В.Ломоносоваосковский ордена Ленин намени Государственный ордеиверс(":4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИ ЧЕСКИХ ФЕРМЕЯТ робио" сается епа а док клруют цром с ддают сСпоразом. ток дезинтегрирую левой продукт буф етергентом Тритон льйатом аммония. об осуществляют с траги- раствои осаж э Изобретение относится к мик логической промышленности и ка получения микробиологических пр р " тов.Известен способ получения литическнх Ферментов путем выращивания продуцента гриба Мкороуз рога штамма 434 на питательной среде, содержащей источники углерода и азота в присутствии минеральных. солей, с последующим выделением Фермента из культуральной жидкости обработкой ее сульфатом аммония и ацетоном ) 1(,Известен также способ получения литических Ферментов путем культивирования продуцентов на питательной среде, содержащей основные источники питания, с последующим выделением целевого продукта центрифугированием 12Однако известные способы не позволяют получить препараты с высокой активностью.о10 лия КИОЭ агния МД 5 Сульфат м 0,04 Дикалийфосфат Ж Н Хлорное железо Ге Хлорнд кальция СаС 0 6 НОЦитрат натрия,02 ,16 Раствор микроэлементов активности пре" му способу в каользуютсинезеле а чалаЬбэ или культивируют их прн освещенности туре 30-35 сС, поФугирования оса слеиме Раствор микроэлементующий состав, г/л: Борная кислота НЗВОХлорндмарганца 11,8 С целью повьпденияпарата по предлагаемчестве продуцехта исные водоросли АиаЬаеклиасузйэ п Ыо 0 а пв,на минеральной среде600-6000 лк и темперлученный после центр Сеют по 5 мл восьмиуры АиаЬаепа ча(аЬ 0 з О мл среды следующегоСульфат марГанцаМкео 4 И ОМслябдат натрияЙаМОО 4 2 ИОСульфат медиСцВС 2 5 И ОВода Дистиллированная 0,022 0,0252Ор 079 тИСПОЛЬЗУЮТ СКвЕ=ЕЧЕ,Ыя астро Формула яэсб 2 етениЯ Составитель С.МалютинаТекред М.Келемеш . Корректор А.Лакида Редактор Л.Волкова Заказ 84/21 Тираж Ы Подписное ЦИИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Жр Раушская наб.р д 4/5филиал ППП Патентт, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Выращивают культуру В;юмт, тостате10 в течение 20 суток прк освещенности 2000 лк и температуре 35-40 С. Затеи берут 1000 мл суспензин клетскр щают В 50 раз Центркфугкрсзаныем при 1"2 суток прк -20 Ср сттаявают прк комнатной темпеРатуРер затем экстРа Гкруют лктяческтий препаОат кэ раэру ЩЕННЫЧ КЛЕТОК Гвщв юФа ГЕРаМЕчЧВВ тта Н Ф МВГНИТ НОЙ МЕщалка трКСХлажДЕНИК В тЕЧЕЯЯЕ 20 МКН СС С 2 ЕДУЮ 1,ай СМЕСЬЮ: 13 Тритона ХО 05 М-,.о.:.с -ИСГ-бу= ф рный раствор РИ 7,0/10;-Р.,2. Смесь ДобаВляют В объеме, Гвавном 1/5 объема сгущенной суспензия клеток, Затем смесь Центртфугкррют при 17000 об/мин в течение 1 ч с охлажде,нием до 0-4 срполученкый супернатант подверГают дкалнзу прк скх:аздекик дс 4 С в фбсфа.тном бу,рерс-,с,.2 7 в 2 В У";ф ЧЕНИЕ 48 Ч СС СттЕтот" " рт - Г- вррвр24 ч и определяю.( лкт.: -:.;.:Ую акткв-" НОСТЬ фЕРМЕНТСВ а;вт ,-" . -"тт.;лиЕ 8 в 6 ОТНССИТЕЛЬрЬЗХ -ттт "т втк;Евоотт тсввшнр н тввр .лв 70( пВРтя 10активности" рр рввка д Предлагаевы поб обеспечивает,Ополучение счкщеннсгс препарата лктических ферментов к пс сравнению с кз=вестным более прост,. Способ получения лнтических фермен" тоВ.,путем культиВкрования прсдуцентсе на питательной среде, содержащей основные источники питания, с последующим выделением целевого продукта цен-" трифугированиемр о т л и ч а ю щ к й в . С Я ТЕМр ЧТСр С ЦЕЛЬЮ ПСВЫтЕНИЯ аКТИВ" НОСТИ ПРЕПаРатав В КаЧЕСтвЕ ПРОДУЦЕН=рр ф.Итяческяе ферменты кз культуральНой жиДКССТКр ССтав 22 ЕЙСЯ ПССЛЕ УДаЛЕ= нкя кз яее клеток путем центряфугкрсВанкя р Выделяют слеДрющим образом К 50 мл схлаиденнсй дс ., -1 "С культура 2 ьнсй БИДксстк Дсбавля."ст 28 ррч 80-чтсгс РВСТВСРа СУЛЬфата .в,ввСНК Я ЦЕНТРКфУ 2 Н Руют прк 6000 сб/мкн в ечение 10 мкн с охлаждением осадок злюируют 5 1 фл фссфатнсГс буферного раствора РИ 7 ры, 1 ЕКтряфугяррЮк П.,т 6 00 02; б/Ь ИН В ТЕ взнче 5 мчн ю стр "т -тп .; . ";р;то О- т С И ра"еу спреттг 2 ят тя теснрю ктТВ 2 сс г". фесмеитсв В Га 27"зов аннсм супернатан2.тическую антк" ис"ть :ерментовВЬДЕвюРНЫК ИЭ Ч 2 тввток И ЧЗ КУЛЬТУРВЛЬНой жяДКССТК, СПСЕДЕ 21" Ют СЛЕДУЮЩ 7 иы ЕЕНСГС 2 З КУ 2 р " .рр:;-Льрой 2КДКОС")Кв Й ;Пг;"Вр-Пд "П;,"-,Е.-ВЗЯТЫК В ЭтС.,у 2ЧаЕ В.авЕСТВ т т.":Ст-СтганкЗМа СПТК-" ческую плстяс:,ть ксхсрсй доводят до 1 25 ПОИ 450 .:М.: 2 12 т 2 рт ф:Сжат,:;СГС буфеГд с ЗИ 7 ". Дсб-тгчр 0" 2З а В С-т"рР,рр Я т Э КУЛЬТИВИРУЮТ ИКнера 2 ьной среде при рсв ещевт -.6006000 лк я теиературе 30-35" С,уечкый осле ЦентрфугкровОоаДСК КЛЕТОК ДЕ".ККТЕГттИРУЮТ, ЭРСт,дГКРУЮТ ЦЕЛЕВОЙ Продукт буфЕРНЬГрв раЗ":-В"ром с Детерге 44 Ритон Х 12осаждают сульфатом аийонияоИсточники инфсрмациир принятые -сВнимание прк экспертизе:1. Патент СССР р 7 348010 ркл22 17 232 10 в 19722. Лвтсрское свидетельство СССРР 358360, кл. 12 О 13/10, 1973: