Всесоюзная imm-i: (-bhc. -a-iiiili,

351378 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Соеетсиит Со 3,ивлиотиеесиих РеооуОо 1 еЗависимый от патентаМ, Кл, С 12 д 13,06 Заявлено 28,Ч 111.1970 ( 1462271/28-13) Приоритет Когтитвт оо деивд иеобретениЯ и открытий при Совете Оиииотров СССРУДК 663.132:576,8.097 (088.8) Опубликовано 13.1 Х.1972. Бюллетень27 Дата опубликования описания 26.1 Х.1972 Авторыизобретения Иностранцынст Тиманн и Хермес(Италия) аган се Заявите ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1.-ТРИ ПТОфАНА бираих мик актери Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способамполучения 1.-триптофана,Известен способ получения 1.-триптофацапутем глубинного культивирования продуцирующих его микроорганизмов на водной питательной среде, содеркащей в качестве источника углевода глюкозу, соли фосфора, магния,азота в присутствии предшественника триптофана, например индола, антраниловой кислоты и аэрации среды.Предлагаемый способ позволяет увеличитьвыход 1.-триптофана.Для этого в качестве продуцирующроорганизмов используют штамм б йВас 11 цз зцЬ 1111 в 5-10.Штамм получают следующим образом.10 м,г синтетической среды40, содержащей200 у/мл 5-метил-триптофана (5-МТ) заливают в чашки Петри (диаметром 9 мм). Затемприбавляют 2,5 мм бактериальной суспензииВас 111 цз зцЫ 1 Ь и 0,5 мл раствора, содержащего 1000 у/лгл 5-МТ. После инкубации при28 С появляются резистентные по отпошецшок 5-МТ колонии, некоторые из которы.: образуют побочные культуры не резистентных бактерийй.Колонии, образующие побочные культурыпредставляют собой мутанты, способные к поглощению 1 -триптофана культуральной сре- м дой. Из этих рсзистентных м.тацтов вы ют культуру 5-10, которую используют в процессе получения т -триптофана.Синтетическая среда имеет следующий состав тКН;РО, 0,1 МФО, 7 Н О 0,05 (:гН,),О, 0,35 Аспарагич 0,15 Глюкоза 1Водопроводная вода 100 льгКультивирование проводят на водной питательной среде, содержащей в качестве источ цика углевода глюкозу, соли фосфора, магния,азота в присутствии предшественника триптофана, например, индола, ацтраниловой кислоты в течение 24 - 9 б час при аэрации среды прц рН 5 - 8 и температуре 20 - 40 С.20 Выход 1.-трцптофана составляет 1,500 -11,000 умл и более в зависимости от состава среды и выбранных условий времени и температуры.Морфологические и культуральные призна ки штамма.Морфология. Палочкообразные клетки, 07 -0,8: 2,0 - 3,0 мк, неразветвлены. Споры имеют форму цилиндра, центральную илц парацецтральную форму. Подвижны посредством жгу- ЗО тиков, имеющих несколько латерально распорН доводят до 7,0 прибавлением МаОН,после стерилизации рН падает до 6,7, Микроорганизм оставляют расти в течение 24 часпри 28 С, потом его вливают в 4,г питательной среды такого ке состава как описано выше и хранят в стеклянном ферментере. Бродильный сосуд выдерживают при 28 С, перемешивают при 800 об/лгин и проветриваюг.Значение рН контролируют периодическимприбавлением стерильного СаСОи поддерживают его равным 6,0 - 6,5.В часовых интервалах в первый раз после24 час, прибавляют 25 у/п.г аптранилоиой кислоты. После 72 час брожения аккумулнровапо1675 у/лгл Е.-триптофана, который выделяютстандартными методами при помощи древесного угля и элюирования,П р и м е р 2. Повторяют способ как описано в примере 1 при применении такой ке пиСоставитРедактор Л. Народная Техред Предмет изобретенияСпособ получения 1-триптофана путем глубшшого культивирования продуцирующих его микроорганизмов на водной питательной средс, содержащей в качестве источника углевода глюкозу, соли фосфора, магния, азота в присутствии предшественника триптофана, например нпдола, антраннловой кислоты и аэрации среды, от,гтагогггггггся тем, что, с целью увеличения выхода .-триптофана, в качестве продуцирующих микроорганизмов используют штамм бактерий Васг 1 цз зпЬ 111 Ь 5-10.ель В. Дунье3. Тараненко Корректор О. Тюрина Заказ 3036/15 Изд Хо 1292 Тираж 406 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Типография, г р Сапунова, 2 локонных резннц. Грамм - полокительно.Лэробпо.Культуральные признаки. Агар-колонии.Рост умеренный, грубый, непрозрачный ростпо поверхности, кремовый цвет.Глвкозный агар, Рост в изобилии и тякелее, чем на агаре.Глюкозно-аспарагиновый агар. Рост в изобилии.Тирозиновый агар, Продукт умеренный срассеянным коричневым пигментом.Бульон, Помутнение с ломкими пелликулами,МаС 1 бульон. Хороший рост до концентрации 12%Картофель, Хороший рост, морщинистый,рост по поверхности, желтый до коричневогоцвета.Физиологические признаки, Стабильная келатина, разжикение слоевидпое.Молоко лакмуса, Пептонизировано, щелочно.Крахмал, Гндролизова;"- Цитраты. Использованы.Нитраты. Из нитратов получены нитриты.Углеводы. Рост на глюкозе, арабинозс, сукрозе и мепнитоле. Образуется кислота, по газа не образуется.Этилметилкарбинол. Получается.Температурные условия. Оптимальный ростмежду 28 и 37 С.Источник. Мутант выделяется обработкоп5-гнетил-И.-триптофаном.П р и м е р 1. ЯО культуру прополаскиваютиз скошенного агара и прививают питательной среде (100 лл) следующего состава, г:1 люкоза 8КНОРР 04 0,1МОЯО 4 7 НгО 0,05(КНг)г 304 0,35Водопроводная вода до 100 яг.г тательной среды, Бродильную среду, которая привита видом 5-10, обрабатывают при таких жс условиях как в примере 1. После суточного брожения и в часовых интервалах прибавляют 25 у/л,г антраниловой кислоты и 30 у/лл амногиевого сульфата. В конце брожен аккумулировано 2686 у/лл 1.-триптофана.П р и м е р 3. ЯО культуру прополаскиваютиз скошенного агара и прививают питательной среде (100 гил) указанного в примере 1 состава. После 24 час при 28 С среду наливают в сосуд, содержащий 4 л такой же среды.Культуру перемешивают при 800 об/лин и проветривают. После 24 час 5% объема пред- культуры заливают в сосуд, содержащий среду следующего состава, агГлюкоза 7(ХН 4) гЯОг 0,7 КНгРО 0,2Мд 504 7 Н 20 0,5 Водопроводная вода до 100 лг,гЗначение рН после стерилизации 6,7.Условия получения культуры идентичны свышеописанными за исключением того, что значение рН выдерживают при 5,8 - б прибавлением СаСОз. После 16 час роста индол предшественника прибавляют каждый час согласно следующим данным:30 16 - 19 час по 100 у/лл20 - 24 час по 150 у/лгл25 - 31 час по 125 у/мл32 - 42 час по 100 у/лгл43 - 45 час по 150 у/л.г35 48 - 62 час по 100 у/лл68 - 69 час по 100 у/лгл80 - 86 час по 60 у/ллКонцентрация в у/лгл 1.-триптофана в средепредставляет:40 через б час 57через 24 час 1826через 26 час 4460через 48 час 6452через 70 час 744445 через 72 час 9296через 84 час 9064через 96 час 10380