Способ получения антибиотика
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Текст
Ву; .:,Ййте тчаи ст 260544О ПИ.И ЕИЗОБРЕТЕНИЯ Сооз Советских Социалистических РеспубликК ПАТЕНТУ авпспмый от патента 12 д 9/14(33) США Государственный комитет Совета 1 Иинистров СССРДата опубликования описания 25,09.7) Авторы изобретенг Иностранцы оберт Л. Хамил, Майкл Эдвард Хэйни (мла Вильям Макс Старк71) Заявитель Иностранная фирма Эли Лилли энд Компани(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА белое - 66,6 иблив%): исло- хлой бс- тем- аство- метаве из Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности.Способ получения антибиотика, продуцируемого культурой Ас 1 пор 1 апез зр. МКК 1 3884, в патентной литературе не известен,Целью изобретения является получение нового антибиотика, активного в отношении ряда микроорганизмов, в частности, кариогенных, а также ускоряющего рост животных. Для этого культуру Ас 1 пор 1 апез зр. МКК 1 3884 предлагается выращивать в аэробных условиях на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, с последующим выделением целевого продукта в виде основания или соли из фильтрата культуральной жидкост известными приемами.Выращивать культуру рекомендуется при температуре 20 - 40 С в течение 2 - 10 дней. Новый антибиотик представляет собой25твердое аморфное вещество, (сс 1 о(с=1%, 50%-ный водный метанол). Прзительный элементарный состав его (углерод 53,06; водород 6,18; азот 5,79; крод 31,40 и хлор 3,39. Антибиотик в видеристоводородной соли представляет соболое кристаллическое твердое вещество спературой плавления от 207 до 212 С; ррим в теплой воде и в 50% -ном водномноле; имеет четыре титруемых группы, д них имеют значения рк от /,0 до 9,7; рк двухдругих более 11, что было определено путемпотенциометрического титрования в 66%-номводном диметилформамиде; приблизительный5 элементарный состав его (в %): углерод 55,36;водород 6,02; азот 5,73; кислород 28,99; общийхлор 4,52 и неорганический хлор 1,28; молекулярный вес примерно 1480, определяемыйметодом осмометрип под давлением пара; в10 растворе минерального масла имеет следующие, явно различимые полосы спектра поглощения инфракрасных лучей: 3,0; 5,8; 6,02; 6,3;6,62; 6,84; 7,02; 7,26; 7,32; 7,7; 8,1; 8,27; 8,52;8,97; 9,35; 9,7; 9,8 и 10,1 мк; в водном раство 15 ре кислоты и в нейтральном растворе в УФ-ойобласти спектра имеет максимум, поглощенияЕтС 53 при длине волны 283 ммк; в водномрастворе основания в УФ-ой области спектрато,имеет максимум поглощения Етси 60 притадлине волны 362 ммк и Ес, 53 при длиневолны 362 ммк,Антибиотик может быть выделен известными способами извлечения и очистки. Он спо 25 собен как обычно образовывать соли с неорганическими кислотами, такими как соляная,серная, фосфорная и другие аналогичные кислоты, а также с различными органическимикислотамп, включающими уксусную, пропионоЗО вую, малоновую, янтарную, винную, малеино3вую, пикриновую, бепзойпую, паратоуолсульфокислоту, никотиновую и другие.Антибиотик в виде свободного основания представляет собой белое аморфное твердое вещество, имеющее следующий элементарный состав (в /О): углерод 53,06; водород 6,18; азот 5,79; кислород 31,40 и хлор 3,39.1 сг 1 о = - 66,6 (с=1%, 50%-ный водный метанол).Хлористоводородная соль антибиотика, представляет собой белое кристаллическое твердое вещество с температурой плавления от 207 до 212 С, растворимое в теплой воде и очень быстро растворимое в 50% -ном водном метаноле. Хлористоводородная соль этого антибиотика стойка в растворе в пределах величины рН от 1 до 10 при температурах вплоть до 27 С, Потенциометрическое титрование хлористоводородпой соли антибиотика в воде выявляет присутствие одной группы с величиной рк 6,2 и присутствие пяти или более групп с величинами рк в пределах от 8 до 10,5. Потенциометрическое титрование хлористоводородной соли антибиотика в растворе диметилформамид - вода (в соотношении 2; 1) показывает присутствие двух групп с величинами рк от 7,0 до 9,7 соответственно и присутствие двух или более групп с величинами рк более 11.Определение молекулярного веса осмометрическим методом под давлением пара показывает, что минимальный молекулярный вес хлористоводородной соли антибиотика составляет примерно 1480.Средние показатели нескольких испытаний на элемептарный анализ выявляют следующий элементарный состав хлористоводородной соли антибиотика (в /о): углерод 55,36; водород 6,02; азот 5,73; кислород 28,9; общий хлор 4,52 и неорганический хлор 1,28,На чертеже показана кривая поглощения в ИК-ой области спектра хлористоводородной соли антибиотика в минеральном масле. Наблюдаются следующие, явно различимые максимумы поглощения: 3,0; 5,8; 6,02; 6,3; 6,62; 6,84;7,02; 7,26; 7,32; 7,7; 8,1; 8,27; 2,52; 8,97; 9,35;9,7; 9,8; 10,1 мк.Спектр поглощения в УФ-ой области спектра хлористоводородной соли антибиотика в кислотном и в нейтральном водном растворе имеет максимум поглощения (при длине волны 283 ммк Ег" 70. Хлорисговодородная соль антибиотика в основном растворе имеет максимумы поглощения при длинах волн 300 ига362 мкм соответственно Ег," 60 и 53,Антибиотик имеет следующие величины Кг в хроматографических системах (проявление на бумаге) при использовании в качестве детектирующего организма Вас 111 цз зцЫ 1 с 1 з: 0,05 в бутаноле, насыщенном водой; 0,26 в бутаноле, насыщенном водой, с 2% п-толуолсульфокислоты; 0,84 в растворе из 19 ч, метанола, 6 ч. ацетона и 75 ч. воды; 0,40 в растворе из 3 ч. метанола н 1 ч. 0,1 н. НС 1; 0,62 в во 442605 10 Минимальная икгибирующая концентрация(мкг/мл) Испытываемый организм15 разведение в питательном бульоне разведение в агаре25,01,5 б25,03,1225,0 51 арЬу 1 ососсцз ацгсцзВас 111 из зцЬ 111 зМисоЬас 1 ег 1 цгп51 гер 1 ососсиз Хасса 11 зЧ 1 Ьг 1 о со 11 (1.онуча 10)Мусоразгпа дайзер 11 сцтРаз 1 сцге 11 а гпц 11 осйаРаз 1 еиге 1 а Ьегпо 1 ц 11 са 20 25 50 50 50 30 35 40 45 50 55 50 55 де, насыщенной метилизобутилкетоном с 1 О/о п-толуолсульфокислоты,Антибиотик оказывает ингибирующее действие на некоторые микроорганизмы, замедляя их рост, Предельные значения ингибирующего действия, предотвращающего рост указанных ниже организмов, показаны в табл. 1. Таблиц а 1 Антибактериальная активность хлористоводороднок соли антибиотикаПоказатель токсичности хлористоводородной соли антибиотика, определяемый на мышах и выраженный как величина 1.Рзо, равна 350 мг/кг при внутрибрюшном введении в организм кивотного.Хлористоводородная соль антибиотика, вводимая в живой организм мышей путем подкожной инъекции, оказывает противоинфекционное действие, причем 1.Рзо при показанных нике инфекциях имеют следующие значенияЯар 11 уососсцз ацгецз 3055 83 мг/кг Ыгер 1 ососсцз руодепез ( 1 мг/кг Р 1 р 1 ососсыз рпецгпоп 1 ае ( 5,5 мг/кг Другим очень важным свойством антибиотика является его способность замедлять рост микроорганизмов, влияющих на околозубные (периодонтальные) заболевания. При разведении в питательном бульоне концентрация хлористоводородной соли антибиотика, равная 1,0 мкг/мл, вызывает замедление роста кариогенных организмов Ог 1 оп 1 огпусез изсозцз.Раствор хлористоводородной соли антибиотика оказывает антибактериальное действие на кариогенные организмы, как показано в следующей системе испытания,Трубки с питательным бульоном, содержащим 5/О сахарозы, подвергали инокулированию с кариогенными микроорганизмами, Каждая трубка снабжена узким стеклянным стержнем, помещенным в нее, и простирающимся под поверхностью питательного бульона, После инкубирования при температуре 37 С в течение ночи на поверхности этих стержней образовывался слой негативной колонии вируса. Затем эти стеряни переносили442605 Дрожжевой - солодовый агар (1 ЯР2) Агар Скаред 50 Агар из овсяноймаки 15 Р Мо 3 55 Неорганические соли - крахмал (1 ЯР4) Глицерин - аспарагин 15 Р5 60 Глицерин - глцццн 65 5в раствор, содержащий хлористоводородную соль антибиотика в различных концентрациях, и эти стержни оставляли в контакте с указанным раствором в течение различных периодов времени 5, 10 и 15 мин. По прошествии ограниченного периода времени стержни промывали стерильной деионизированной водой, и затем их инкубировали при температуре 37 С в течение 18 - 24 час в неинокулированной среде.Рост организмов определяли, наблюдая изменения цвета бромтиола синего от синего ло желтого, вызванного образованием кислоты организмами.Раствор хлористоводородцой соли антибиотика при концентрации 1 % эффективен в отношении кариогенного организма Ягерососспз зр. в случае, когда этот раствор контактировал с клетками организма в течение пяти минут. Рост другого вида кариогенного организма Ягер 1 ососсцз был прекращен при воздействии 1%-ного раствора данного антибиотика, находящегося в контакте с клетками организма в течение пяти минут. Три вида карцогенцых организмов 5 гер 1 ососсизз были ицгибированы хлористоводородной солью антибиотика при концентрации 5 мкг/мл и разведении в питательном бульоне. Другая разновидность кариогенцого организма (нитевидного типа) была ингибирована хлористоводородной солью антибиотика при концентрации его 1 мкг/мл и разведении в питательном растворе.Антибиотик способен ускорять рост животных. При добавлении хлористоволородной соли антибиотика в рацион для цыплят в количестве 45,4 г на тонну средний привес цыплят спустя десять дней составлял 154,2 г по сравнению с привесом контрольной группы кроликов, составлявшим 147 г. Эффективность превращения пищевых продуктов в организме цыплят при введении хлористоводородной соли антибиотика составляла 1,43, Эффективность превращения пищи у контрольной группы кроликов - 1,53.Из описанных характеристик антибиотика ясно, что его можно, применять для подавления роста патогенных организмов. Так например, раствор, содержащий указанный антибиотик соответствующей концентрации, может использоваться,чля дезинфекции зубоврачебных и хирургических инструментов. стеклянных изделий и т. д. Этот антибиотик может использоваться также в растворе для дезинфекции поверхностей, например стен, полов, поверхности столов ц других участков, где требуется поддержание стерильных условий, чапример в госпиталях, пои приготовлении пищи и так далее.Ввиду активности этого антибиотика против кариогенных организмов и организмов, вызывающих околозубные заболевания, оц мотет быть введен в опре,челенных концентрациях в ппепараты. используемые для гигиены рта,5 10 15 20 25 Зо 35 40 6например в зубную пасту, зубной порошок, г промывные жидкости, эликсиры ц так далее.Для ускорения роста животных его можно добавлять в питательный рацион илц растворять в питьевой воде,В любом из перечисленных применений антибиотик может быть введен в организм либо в виде фармацевтической кислой соли, либо в виде свободного основания, причем выбор способа ввода его в организм опрелеляется физическими характеристиками антибиотика или какими-либо лругпмп факторами, а не биологической активностью, котопая является одинаковой как лля своболного основания, так и для кислой соли этого антибиотика.Микроорганизм, используемый лля пригов товления антибиотика, прелставляет собои разновцлность Ас 11 пор 1 апез цз семейства актиноплантановых Ас 11 пор 1 апасеае, Этц актцноплантановые являются типичным сс мейством микроорганизмов типа Актпномипелатов.Микроскопическое изучение морФологии.Вегетативный мпцеллпй нахолптся на 1.1 аи 1 агпЬег (древесная смо,ча) в впле пыльцы в воде. Палисадная гифа составляет в срелцем 1,3 Х 13 мк лишь с редким возможным отклонением. Спорангп образуются на пыльце ц в среде 1 п 1 егпа 11 опа 1 51 гер 1 опчусез Рго 1 ес3 (ЯЬ 1 г 11 п апд боЮ(еЬ). Спорангц ппелставчяют собой шарообразные частицы срелним лцаметром 7,5 мк и с неолноролпой поверхностью. Споры при рассмотрении цх в электронном микроскопе имеют шарообразную форму 1,7 К (1,2 мк. Они полвижны, имеют много жгутиков.Характеристика срел культивирования антибиотика в результате наблюленця пос,че роста в течение 21 лня при температуре 30 С. Обозначение 15 Р относится к культивирующей среде 1 п 1 егпа 11 опа 1 Ягер 1 огпусез Рго 1 ес 1 Мейа (5 Ьег 11 по апд 6 о 1111 еЬ). Обильный рост. Средасветло-коричневая (13 Г 8).Отсутствие растворимогопигмента,Обильный рост. Оранжевая срела (10 Г 7). Отсутствие растворимогопигмента.Очень сильный рост,срела оранжево-желтая(12 ВЗ). Светло - коричневый растворимый пигмент.Умеренный рост. Коричневая среда (71.11) .Растворимый пигмент,темный красновато-коричневый. Среда Веппе 11 Томатная паста -овсяная мука Тирозиновыйагар Агар дрожжевогоэкстракта Глюкоза - аопарагин Малат кальция Питательный агар Агар Эмерсона Физиология,Снятое молоко Получение меланина позитивное на железопептоновом агаре (1 ЯР6) спустя 24 часа.Требования в отношении температуры; 45 глицерин - аспарагиновый агар, От умеренного роста до обильного в интервале температур от 26 до 37 С. Отсутствие роста при 43 С.В табл. 2 суммированы результаты испытаний с использованием углеводородов (источ ников углерода), которые осуществлялись на штамме Ас 11 пор 1 апез зр. МКК 1. 3884, образующем антибиотик.В этой таблице использованы следующие символы: 55( - ) = использование под вопросом- = отсутствие использования 60Как было отмечено, можно осуществлять выращивание микроорганизмов Лс 11 порапез зр. КК 1 Ц. 3884 в среде культивирования, в результате чего образуется анбиоик. В качестве среды может использоваться любая из,65 35спустя 21 день не происходит ни коагуляции, ни осветления,Восстановление нитрата: позитивное.Питательный желатин: полное разжижение 40 спустя 21 день, Таблица 2 Источник углерода Источник углерода РеакРеакция ция Рамноза д-Ксилозз д-Мании тмножества известных сред культивирования; однако из экономических соображений, с точки зрения максимального выхода антибиотика и легкости его извлечения предпочтительны лишь некоторые среды культивирования. Так, например, декстроза является одним из наиболее предпочтительных источников углевода, и соевая мука - одним из предпочтительных источников азота.Питательные неорганические соли, которые вводятся в среду культивирования, могут включать обычные выпускаемые промышленностью соли, из которых могут получаться ионы натрия, калия, аммония, фосфата, хлорида, сульфата, ацетата, карбоната и так далее, Кроме того, в среду культивирования могут быть введены вещества, способствующие ускорению роста, такие как барда, и дрожжевые экстракты, что приводит к успешным результатам. В среду культивирования необходимо также добавлять основные микроэлементы, способствующие росту Ас 11 порапз зр. ЧРР 1. 3884. Такис микроэлементы ооычно вцодятся в виде сл).чайных примесей или в виде других составляющих компонентов среды,Исходная величина рН культивирования может изменяться в широких пределах. Однако до осуществления инокуляции с микроорганизмом, желательно доводить величину рН среды культивирования до значения, равного от 6,5 до 7 3, в зависимости от типа используемой среды. Конечная величина рН определяется, по крайней мере частично, по начальной величине рН среды культивирования, по буферу, ,присутствующему в этой среде, и по длительности времени, в течение которого происходит рост организма,Для получения значительных количеств антибиотика ферментация осуществляется преимущественно при погружении в аэробные условия в крупногабаритных емкостях, Незначительные количества антибиотика получаются при ферментации во встряхиваемых колбах, Ввиду периода задержки при получении антибиот ка, связанного с инокуляцией в больших емкостях организмов в форме спор, келательно использовать вегетативный инокулум. Его приготовляют путем инокулирования небольшого объема среды культивирования с фраг9ментами мицелия или с организмами в форме спор, в результате чего получают свежую, активно развивающуюся культуру данного организма. Вегетативный инокулум затем переносят в большую емкость для культивирова;шя, Среда культивирования для роста вегетативного инокулума может быть той же самой средой, что используется для более объемной ферментации, хотя могут попользоваться для этой цели и другие среды культивирования. Организм, образующий антибиотик, может быть выращен при температурах от 20 до 40 С. Оптимальное условие - примерно 30 С,Как и в случаях обычных процессов культивирования, при погрукении в аэробные условия через среду культивирования продувается стерильный воздух. Для эффективного роста организма и для получения антибиотика объем воздуха, используемого в емкости культивирования для получения антибиотика, составляет преимущественно более 0,1 объема воздуха в минуту по отношению к объему среды культивирования.Достижение активности антибиотика в ходе процесса фермептации можно проследить путем испытания образцов, питательного бульона, подвергнутого фермептации, на их антибиотическую активность, по отношению к известным организмам, чувствительным к действию антибиотиков. Одним из таких организмов, предназначенных для испытания на действие антибиотика, соответствующего данному изобретению, является организм Вас 11 цз вцЬ 1111 з. Биологическое испытание может осуществляться обычным образом при использовании бумажного диска в чашке с агаровой средой.Обычно максимальное получение антибиотика наблюдается в период в пределах от двух до шести дней при ферментации в больших емкостях или во встряхиваемых колбах, Как правило, максимальная активность антибиотика достигается в период от 48 до 96 час,Антибиотик может быть извлечен из среды культивирования и отделен от других веществ, которые могут в нем присутствовать, способами экстракции и адсорбции. Согласно изобретению, процессы адсорбции для извлечения антибиотика являются наибослс предпочтительными, поскольку эти процессы ие треб) ют использование относительно оольших объемов растворителя, что требуется в случае использования процессов экстракции. В качестве адсорбепта для отделения данного антибиотика от фильтруемого питательного бульона вполне подходящим является уголь, хотя вполне возможно использовать и другие известные в технике адсорбенты. Антибиотик, фиксированный на адсорбирующем агенте, извлекается с помощью обычных процессов элюировапия. Для дальнейшей очистки антиопотика используются процессы адсорбцип и элюирования с применением таких адсорбирующи.; материалов, как полиамидные смолы, окиссл алюминия, фильтрующие гели и другие веще 442605 45 20 20 3 41,1 л 10ства. Для о гистки антибиотика могут использоваться также ионообменные смолы,Пример 1.Фермептация антибиотика во встряхиваемой5 колбе,Приготавливают культуру Ас 11 пор 1 апез зр.МКК 1. 3884 и выдерживают ее на косом агаре,имеющем следующий состав: предварительноиспеченая овсяная мука б 0,0 г; дрожжи 2,5 г;10 К.НРО 4 1,0 г; исходное минеральное сырьеСкаре 1 5,0 мл; агар 25,0 г; деионизпроваппаявода 1 л,Минеральное исходное сырье Скаре 1; имеетследующий состав:15 КС 1 100 гМо 504 7 Н:О 100 гРе 04 7 Н,О 2 г(растворен в 2 мл концентрированной соля 20 ной кислоты)Деионпзированнаявода 1 лВеличину рН среды культивирования регулируют до значения 7,3, используя для этой25 цели раствор гпдрата окиси натрия. После стерилизации в автоклаве при температуре 120 Св течение 30 мпн при давлении - 800 г/см" величина рН среды составляет б,7,Косой агар инокулируют, используя Ас 11 пор 30 1 апез зр. ККК 1. 3884, и инкубируют прп температуре 30 С в течение от семи до десятидней. Выращенный мицелий покрывают стерильной дистиллированной водой, и поверхность косого агара соскабливают, разрыхляя35 микроорганизмы. Ввиду того что данную культуру не подвергают споруляции, желательномацерировать мицелиальную пленку сплющенной остро заточенной пнокулирующей иглой для того, чтобы увеличить число потенци 40 альных центров роста, Половина культуры косого агара. приготовленного таким образом,используют для пнокулирования 50 мл вегетативной среды, имеющей следующий состав:Глюкоза 10 гКрахмал 20 гСоевая мука 20 гДрожжи 2 гСаСО, 2 гВодопроводная вода 1,1 л50 Инокулируемую вегетативную среду инкубируют в течение 72 час при температуре 30 Сна вращающемся грохоте со скоростью вращения 250 об/мин.Десять миллилитров ферментационной сре 55 ды используют для инокулпровапия 100 млвторой стадии вегетативного роста среды следующего состава (в г):Глюкоза 10Картофельный60 крахмалСоевая мукаАнтолизированныепивные дрожжиСаСО65 Водопроводная вода11Инокулированную среду инкубируют в течение 48 час при температуре 20 С на вращающемся грохоте (при скорости вращения250 об/мин). Эту вегетативную среду второйстадии используют для инокулировация 30 млполучаемой стерильной среды, иметощсй следующий состав, содержащийся в 250-миллилитровой колбе Эрленмейера (в %):Декстроза 1,0Крахмал 2,0Маннит 1,0Соевая мука 1,5Антолизированныепивные дрожжи 0,1СаСОз 0,2Водопроводнаявода До 1 лИноктлированную среду, содерткащуюся вколбе Эрленмейера, ферментируют при температуре 30 С в течение от 72 до 120 час на вращающемся грохоте, имеющем скорость вращения 250 об/мин. Конечная величина рН составляет от 7,0 до 7,5,Емкость ферментации,Описанный процесс применяют при получении вегетативной среды второй стадии.200 мл этой вегетативной среды используютдля инокулирования 25 л получаемой стерильной среды сле,чующего состава (в %):Декстроза 1,0Крахмал 2,0Маннит 1,0Соевая мука 1,5Антолизированныепивные дрожжи 0,1СаСО, 0,2Антипена 0,02Вода 25 лВеличину рН этой среды регулируют, доводя ее до значения 7,3 - 7,4 после стерилизатиив автоклаве при 120 С, давлении - 800 г/смв течение 30 мин.Получаемую инокулипованную среду, содержащуюся в 45-литровой емкости ферментации,ферментируют при 30 С в течение пяти дней,В ходе ферментации осуществляют аэрирование стерильным воздухом, проходящим со скоростью половины объема воздуха на одинобъем среды культивирования в минуту. В ходе ферментации осуществляют перемешиваниеобычной мешалкой со скоростью вращения мешалки 500 об/мин.Извлечение антибиотика,Все питательные бульоны ферментации, полученные в двадцатипятилитровых емкостях,выращенные в соответствии с описанным выше способом, соединяют и к ним добавляют5 н. раствор гидрата окиси натрия с цельюдоведения величины рН до 10,5. Весь объемпитательного раствора затем фильтруют, используя для этой цели фильтр, и мицеллярнуюфильтропрессную лепешку, суспензируют в воде и пепемешивяют в течение одного часа.Мциечий фильтруют и мицелярную фильтропрссстт;ю лспсн ку удаляют, Фильтраты объе 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 б 0 55 12диняют, в результате чего достигают общий выход объемом 66,5 л. Величину рН объединенных фильтратов регулируют, доводя ее до значения 8,0 путем использования 3 н. раствора соляной кислоты. Объединенные фильтраты пропускатот через колонну, наполненную гранулированцым углем в во.чс. Эту колонну промывают 15 л воды и удаляют выходящие из нее потоки. Затем эту колонну промывают 20 л водного раствора соляной кислоты, имеющего величину рН 2,5 и выходящий из нее поток также удаляют. Наполненную углем колонну элюлруют 4 л раствора ацетон - водя (1: 1), величину рН которого доводят до 2,0 путем добавления 3 н. раствора соляной кислоты, Величину рН элюата доводят до значения 7,5 - 8,0 путем добавления 5 н. раствора гидрата окиси натрия. Этот элюат, содержащий антибиотик, выпаривают до объема 1700 мл. Выпаренный элтоат адсорбирчтот в колонне размером 7 Х 60 см, содержащей промытую водой полиамидцую смолу. Эт колонну, наполненную полиамидной смолой, алюируют восемью литрами воды, и элюат собирают в виде множества фракций. Эти фракции, содержащие антибиотик, объединяют и элюируют до получения неболыного объема. К выпаренному концентрату добавляют четырехкратный объем метанола, а затем добавляют равный объем эфира с целью осаждения антибиотика. Этот антибиотик фильтруют и высушивают. Выход его достигает 1,1 г,Дополнительцос количество этого антибиотика извлекают путем элюирования содержащей полиамид колонны раствором метанол - вода (1; 1). Элюаты, содержащие антибиотик, объединяют и выпаривают до получения небольшого ооъемя. К выпаренному концентрату добавляют четырехкратный объем метанола, и этот антибиотик осаждается путем добавления равного объема эфира. Полученный осадок извлекают путем фильтрации, Выход продукта составляет 3 г.П р и м е р 2. Очистка антибиотика путем использования окисла алюминия.Для извлечения антибиотика осуществляют ту же процедуру, что описана в примере 1 чтпи элюировании колонны. наполненной углем. Величину рН ялтоата доводят до 7,5 - 8,0 путем добавления 5 и. раствора гидрата окиси натрия, а затем его выпаривают до объема 200 мл.100 мл этого концентрированного элюата, содержащего антибиотик, подают в колонну размером 2,7;х,8.0 см с промытым в воде окислом ялтомиция. Затем эту колонну промывают двумя литрами метанола. Выходящий поток метанола удаляют. Антибиотик элюируют из колонны во,чным раствором метанола (1:1), активные фракции элюата объединяют и выпаривают досуха. Высушенный осадок растворяют в 100 мл водного раствора метанола (1: 1). Полученный в результате этого раствор добавляют к двум литрам ацетона с той целью, чтобы вызвать осаждение очищенного40 45 антибиотика. Выход продукта составляет 2,2 г. Пример 3.Получение хлористоводородной соли антибиотика.500 мл антибиотика, полученного согласно описанному выше примеру, растворяют в 20 мл 50 оо-ного водного раствора метанола. Величину рН этого раствора доводят до 1,5 путем добавления 1 н. соляной кислоты, Полученный в результате раствор добавляют при перемешивании к 400 мл ацетона, в результате чего происходит осаждение хлористоводородной соли антибиотика. Полученный осадок отфильтровывают и высушивают.Выход хлористоводородной соли антибиотика составляет 420 мг.Пример 4.Получение пикрата антибиотика.К раствору 500 мг антибиотика в 20 мл воды добавляют 20 мл насыщенного водного раствора пикриновой кислоты. Эту смесь выдерживают в течение ночи при 5 С. Образующийся желтый осадок фильтруют, и получают 505 мг желтого пикрата антибиотика.Пример 5.Получение хлористоводородной соли антибиотика из пикрата антибиотика.К раствору 505 мг пикрата антибиотика в 25 мл метанола добавляют 1 н, раствор соляной кислоты до тех пор пока величина рН не достигает значения 1,5. Полученный кислотный раствор добавляют при одновременном перемешивании к 500 мл диэтилового эфира, в результате чего получают осадок хлористоводородной соли антибиотика. Полученный таким образом осадок фильтруют и высушивают. Получают 442 мг хлористоводородной соли антибиотика.Пример 6.Получение свободного основания антибиотика из хлористоводородной соли антибиотика.Раствор 500 мг хлористоводородной соли антибиотика в 20 мл воды пропускают над ионообменной смолой (ОН), содержащейся в стеклянной колонне 1 Х 10 см. Выходящий нз колонны поток собирают, и колонну элюируют водой, Водный элюат и исходные выходящие из колонны потоки объединяют и выпаривают в вакууме досуха. Полученный осадок раство 5 10 15 20 25 30 35 ряют в 20 мл 50/О-ного водного метанола и до. бавляют к 400 мл ацетона при одновременном перемешивании, в результате происходит осаждение свободного основания антибиотика. Осадок фильтруют и высушивают. Получают 255 мг антибиотика.Пример 7.1 олучение сульфата антибиотика.Раствор 500 мг хлористоводородной соли антибиотика в 20 мл воды пропускают через колонну размером 1 р,10 см, содержащую ионообменную смолу в гидроксилцикле. Эту колону промывают водой, и активные фракции объединяют и выпаривают досуха.Высушенный осадок растворяют в 20 мл 50%-ного водного раствора метанола. Величину рН раствора регулируют, доводя ее до 1,5 путем добавления 1 н. раствора серной кислоты, и подкисленный раствор добавляют к 400 мл ацетона, Образуется осадок сульфата антибиотика, который извлекают путем фильтрации. Выход этого продукта составляет 331 мг.Пример 8.Получение метилоранжевой соли антибиотика.К раствору 500 мг антибиотика в 20 мл воды добавляют 20 мл насыщенного раствора метилоранжа в воде. Полученный раствор выдерживают в течение ночи до тех пор, пока не произойдет выпадение полного осадка метил- оранжевой соли. Метилоранжевую соль антибиотика отфильтровывают и высушивают. Выход продукта составляет 521 г. Предмет изобретения 1. Способ получения антибиотика, о т л и ч аю щ и й с я тем, что культуру Ас 1 шор 1 апез зр, МКК 1. 3884 выращивают в аэробных условиях на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, с последующим выделением целевого продукта в виде основания или соли пз фильтрата культуральной жидкости известными приемами.2, Способ по п. 1, отличающийся тем, что выращивание осуществляют прп температуре 20 - 40 С в течение 2 - 10 дней,
СмотретьЗаявка
1842080, 26.10.1972
ЭЛИ ЛИЛЛИ ЭНД КОМПАНИ
ХАМИЛ РОБЕРТ Л, ХЭЙНИ МАЙКЛ ЭДВАРД, СТАРК ВИЛЬЯМ МАКС
МПК / Метки
МПК: C12D 9/14
Метки: антибиотика
Опубликовано: 05.09.1974
Код ссылки
<a href="https://patents.su/8-442605-sposob-polucheniya-antibiotika.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ получения антибиотика</a>
Предыдущий патент: Смазочная композиция
Следующий патент: Машина для формования полотна
Случайный патент: Устройство для заряда аккумуляторной батареи