Способ определения количества пепсина

О П И С А Н И Е 2 ИОЗОИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Сома Соеетокнк Соцналыстнческнх РеспубликЗависимое от авт. свидетельстваЗаявлено 17,Х.1966 ( 1113326/28-13)с присоединением заявкиКл, 301 т, 2/04 МПК А 611 с Комнтет по делам изобретений н открыт прн Сосете Министра СССР(088.8) Опублик но 0811,1968, Бюллетеньа опубликования описания 5.1 Ч.196 АьторизобретениЗаявитель П, Пятницкий ЧЕСТВА ПЕ ОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИ мл глицерина,тки дистилливленного растсвиного пепи х анении в препаратов пищего отличается дозисоответственно сото в свою очередь створов 0,2 и 0,5%Известен способ определения количества пепсина в препаратах, его содержащих, согласно которому готовят раствор эталона и раствор испытуемого препарата и этими растворами (порознь) воздействуют на пробу молока, предварительно стабилизированную ацетатным буфером (водным раствором смеси ледяной уксусной кислоты и едкого натра), замеряя при этом продолжительность свертывания молока и определяя расчетным путем количества фермента (в условных единицах).Для определения количества пепсина в весовых единицах и упрощения способа раствор испытуемого препарата и раствор эталона перед воздействием на пробу молока стабилизируют ацетатным буфером, при этом в раствор эталона одновременно со стабилизатором вводят глицерин. В качестве раствора эталона следует использовать раствор аморфного пепсина.Способ состоит в следующем.Готовят ацетатный буфер из 92 г ледяной уксусной кислоты и 45 г едкого натра, для чего их растворяют в дистиллированной воде, доводя общий объем до 1000 мл. Хранят при. готовленный раствор в закрытом виде. Затем из 20 лг чистого аморфного пепсина, который помещают в 200 ял колбу, приготовляют раствор, Для этого приливают 50 мл ацетатного буфера и 50 мл дистиллированной воды. Рас творяют пенсии, приливают 80размешивают и доводят до мерованной водой. В 1 мл приготовора содержится 0,1 мг чистогосина. Раствор эталона стоек пр ртемноте и на холоде.Готовят молочно-ацетатную смесь, т. е.пробу свежего коровьего молока, которую смешивают пополам с ацетатным буфером (рН не должен быть ниже 5) и ставят на холод. После отстоя сливок смесь сливают сифоном. Срок хранения этой смеси на холоде около двух недель. Затем приготавливают раствор испытуемого препарата.В зависимости от вида препарата пепсина(сывороточного, пищевого или медицинского) меняется методика приготовления раствора.Так, препарат сывороточного пепсина отвешивают в количестве 1 г, растворяют в колбе литрового объема, приливая в нее 100 мл ацетатного буфера, после чего дистиллированной водой объем содержимого доводят до метки.Концентрация приготовленного раствора составляет 0,1%.Приготовление раствораного пепсина и медицинскоровкой этих препаратов,ставляющей 2 г и 5 г, чобеспечивает получение ра0 ной концентрации.Заказ 5792 Тираж 580 Подписное ЦИИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва, Центр, пр. Серова, д. 4Типографии, пр. Сапунова, 2 От растворов эталона и испытуемого поепарата отливают в пробирки по 0,1 мл, причем температура растворов должна быть равна 25 С. В другие пробирки наливают по 5 мл молочно-ацетатной смеси, Затем раствор эталона и раствор испытуемого препарата порознь приливают в пробирки с молочной смесью. Замечают время начала испытания и время появления на стенках пробирок едва заметных хлопьев казеина, Продолжительность свертывания молока в параллельных определениях может отличаться на 2 - 3 сек. Затем расчетным путем определяют содержание пепсина в испытуемом препарате.Для этого полученные данные подставляют в формулу где Х - количество пепсина в 1 мл испытуемого раствора, в мг;У - количество пепсина в растворе эталона в мг;а - продолжительность створаживаниямолока под действием эталона в сек;6 - продолжительность створаживаниямолока под действием испытуемогораствора в сек.П р и м е р 1. Анализировали препарат сывороточного пепсина. При этом получили а - 70 сек, О - 88 сек.Если У = 0,1%, то Так как готовили 0,1/о-ный испытуемый раствор, то содержание пепсина в сухом препарате составляет 7,95%.П р и м е р 2. Анализировали препарат медицинского пепсина. Полученные данные составили а - 70 сек, Ь - 140 сек; так как У = 0,1 о/о, тоЛ=- =0,05 мг/мл.0,1 70 10140Содержание пепсина в сухом препарате (былприготовлен 0,5 о/о-ный раствор) равно 1%. 15Предмет изобретения1, Способ определения количества пепсинав препаратах его содержащих путем раздельного воздействия раствора эталона и раствора испытуемого препарата на пробу молока, 20 стабилизированного ацетатным буфером (водным раствором смеси ледяной уксусной кислоты и едкого натра), с последующим замером продолжительности свертывания молока и расчетом количества пепсина, отличающийся тем, что, с целью определения количества пепсина в весовых единицах (миллиграммах) и упрощения способа, раствор испытуемого препарата и раствор эталона перед воздействием на пробу молока стабилизируют ацетат ным буфером, при этом в раствор эталона одновременно со стабилизатором вводят глице.рин.2, Способ по п. 1, отличающийся тем, что, вкачестве раствора эталона используют раст вор аморфного пепсина.