Способ получения ферментных препаратов каталазы и глюкозооксидазы

Союз Соеетския Социалистических Республик(л, 6 а, 22,04 рнсоединенисм заявкиМП 1( Приоритет Комитет по деламбретеииЯ и сткрытии Сосете МииистроеСССР УДК 663.11:576.8.0933.Х 1.1967. Бюллетеньпуолпковано Дата опубликования описания 15.1.1968 Авторыизобретения М, Ф. Гулый, Р. Г, Дегтярь, Ю. В. Чумаченко, Л. С. Лотоцка Н. М. Пидопличко, Е. А. Никольская и В. И. Билай ститут биохимии АН Украинской СС Заявител СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ фЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТО КАТАЛАЗЫ И ГЛЮКОЗООКСИДАЗЫментов, закзиочается в след ерментных препаратов ксидазы из культуральго гриба Реп 1 с 11 штп я- вляющегося продуценСпособ получения ф каталазы и глюкозоо той жидкости плеснев а 1 е РЫор 1. е 1 В 11 а, я Известен спосоо получения ферментных препаратов каталазы н глюкозооксидазы из культуральной жидкости плесневого гриба Рептст 11 штп в 1 а 1 е РЫор 1. е 1 В 11 а 1, являющегося продуцентом этих ферментов,Согласно этому способу, из культуральной жидкости адсорбируют каталазу, отделяют адсорбент с каталазой, например, фильтрацией, выделяют каталазу, например, элюцией и осаждением спиртом.Затем из культуральной жидкости (фильтрата), оставшейся после отделения адсорбента с каталазой, адсорбируют глюкозооксида. зу, после чего выделяют ее элюцией, осажда. ют спиртом, растворяют осадок глюкозоокси. дазы в воде и затем осаждают ацетоном.Предлагаемый способ проще и дешевле за счет того, что адсорбцию каталазы и глюкозооксидазы проводят на каолпне, который задают в культуральную жидкость в два приема при естественных значениях ее рН 3,4 - 3,6.В первый прием для адсорбцип каталазы следует задавать 0,5 о/, каолина, а во второй прием для адсорбцпи глюкозооксндазы - 2,/о каолина к обьему культуральной якпдкостп. том этих фер ую.щем,К культуральной жидкости естественногорН (3,4 - 3,6) прибавляют каолин в количестве 0,5% к объему жидкости и проводят адсороцию каталазы в стационарных условияхв течение 15 хин. При содержании в 1,ттлкультуральной жидкости 300 единиц каталазыадсорбируется 95 - 100% ее. Каолин с адсор 10 бированной на пем каталазой отделяют центрифугировапием в течение 15 паин. При этомглюкозоокспдаза остается в центрифуге.Каталазу, адсорбированную на каолине,элюируют 0,1 лтоль фосфатного буфера с рН15 7,2, добавляя 4 объема элюента по отношениюк весу взятого каолпна, после чего рН раствора становится равным 6,8 - 6,9. Элюциюпроводят при интенсивном перемешивании напротяжении 1 час. Элюат отделяют полутор 20 ным объемом нзопропилового спирта или ацетона, а затем высушивают.В центрпфугат, полученный после отделения адсорбента с каталазой, добавляют каолнп в количестве 2/о к ооъему жидкости н25 адсорбпруют глюкозооксидазу в стационарных условиях прп геремсшпвании в течен е15 лин.Каолин с адсорбированной глюкозооксидазой отделяют центрпфугпрованпем. Адсорбп 30 руется 95 - 100% глюкозоокспдазы прп соЗаказ 4 97/; Тираж 535 ПодписноеЦ гП Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Центр, пр. Серова, д, 4 Типография, пр, Сапунова, 2 держании ее в кул 1 туральной жидкости до 50 ед/м,г и при рН культуральной жидкости 3,4 - 3,6. Глюксзооксидазу элюируют 0,2 мо,гь фосфатного буфера с рН 6,8, прибавляя элюент в количестве 4 объемов по отношению к весу адсорбента. После прибавления элюента рН составляет 6,1 - 6,2. Элюцию глюкозооксидазы проводят при энергичном перемешнвании в течение 1 час. Элюат отделяют 15-минутным центрифугированием. Он содержит 75 - 90 з/в адсорбированной глюкозооксидазы.Вторую элюцию проводят 0,1 моль фосфатного буфера с рН 6,2, прибавляя два объема элюента по отношению к весу каолина. Длительность второй элюции при перемешивании 30 мин, Адсорбируот и элюируют глюкозооксидазу и каталазу при комнатной температуре,Весь полученный элюат объединяют и осаждают при 0 С двойным объемом этилового спирта (температура спирта - 10 - 12 С). Осадок отделяют центрифугированием в течение 20 мин, затем растворяют его в воде, 1 - 2 раза переосаждают ацетоном при 0 С, снова растворяют в воде и водный раствор высушивают методом лиофильной сушки.Полуенные препараты по своей активности, специфичности и другим качествам пе уступают препаратам, полученным нз культуральной жидкости прн использовании в качестве адсорбснта окиси алюминия,Предмет изобретения5 1. Способ получения ферментных препаратов каталазы и глюкозооксидазы из культу- ральной жидкости плесневого гриба Решс 1 Ш- цш и 1 ае Рс 1 ор 1. е( В 1 аг, являющегося продуцентсм этих ферментов, путем адсороции 10 каталазы из культуральной жидкости, отделения адсорбента с каталазой, например, центрифугированием, выделения каталазы, например, элюцией и осаждением спиртом, адсорбции глюкозооксидазы из культуральной жид кости (центрифугата), оставшейся после отделения адсорбента с каталазой, и последующего выделения глюкозооксидазы элюцией, осаждением спиртом, растворением осадка в воде и осаждением ацетоном, отличающийся 20 тем, что, с целью упрощения и удешевленияпроцесса, адсороцию каталазы и глюкозооксидазы проводят на каолине, который задают в культуральную жидкость в два приема при естественных значениях ее рН (3,4 - 3,6).25 2. Способ по п. 1, отлггчающийся тем, чтов первый прием для адсорбции каталазы задают 0,5% каолина, а во второй прием для адсорбции глюкозооксидазы - 2% каолнна г объему культуральной жидкости