Способ выделения гиббереллиновой кислоты из культуральной жидкости

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИН 3(И) С 12 Р 27 00 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ(71) Институт Хэмии Пшемыслоэйи Кутновске Заклады фармацэутычнэ(56) 1. Мельников И,Н., Баскаков Ю.А.Химия гербицидов и регуляторов роста.И Госхимиздат, 1962, с,204.2, Патент ПНР В 49464,кл, 6 в 16/03, 1964,(54)(57) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ГИББЕРЕЛЛИНОВОЙ КИСЛОТЫ ИЗ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ, включающий пропускание куль 801080747 А туральной жидкости через сорбент с последующей десорбцией гиббереллино- вой кислоты водным раствором десор" бента, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью увеличения выхода гиббереллйновой кислоты, в качестве сор. бента используют высокопористую,не- ионную, неполярную или среднеполярную смолу, представляющую собой сополимер дивинилбензола со стиролом или со сложными эфирами акриловой или метакриловой кислот, в качестве десорбента гиббереллиновой кислоты используют водный растворацетона с концентрацией 70-1003 или 20"457, или метанола с концентрацией 35-807, р или этанола с концентрацией 50-963 и дополнительно осуществляют десорб- цию примесей водным раствором ацетона с концентрацией 45-703 или метанола с концентрацией 80-953, или этанола с концентрацией 20-353.1 1080Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к способу получения регуляторов роста растений.Известен способ выделения гиббереллиновой кислоты из культуральнойжидкости, заключающийся в адсорбциигиббереллиновой кислоты на активированном угле с последующей десорбциейметанолом или ацетоном 1.Недостатком этого способа являетсяневысокий выход конечного продукта(407), обусловленный тем, что гиббе риллиновая кислота не полностью де, сорбируется с угля,Известен также способ выделения15гиббереллиновой кислоты иэ культуральной жидкости, включающий пропускание культуральной жидкости черезсорбент, в качестве которого используют анионит в гидроксильной форме,20с последующей десорбцией гиббереллиновой кислоты при помощи водных раст. воров десорбента, в качестве которого используют галогениды, сульфатыили нитраты щелочных или щелочноземельных металлов 23,Недостатком этого способа являетсяневысокий выход конечного продукта(60-657) вследствие нестабильностигиббереллиновой кислоты в щелочной(а также кислотой) среде.Цель изобретения - увеличениевыхода гиббереллиновой кислоты.Указанная цель достигается тем,что в качестве сорбента используютвысокопористую, неионную, неполярную З 5или среднеполярную смолу, представляющую собой сополимер дивинилбензола со стиролом или со сложными эфирами акриловой или метакриловой кислот,в качестве десорбента гиббереллиновой 40кислоты используют водный раствор ацетона с концентрацией 70-1003 или25-45 , или метанола с концентрацией 35-807, или этанола с концентрацией 50-96% и дополнительно осуществ.45ляют десорбцию примесей водным раствором ацетона с концентрацией 45-707или метанола.с концентрацией 80-957или этанола с концентрацией 20-35%.На фиг.1 представлена десорбция 50гиббереллиновой кислоты и примесейводным раствором метанола, при этомна оси ординат указана десорбция, выраженная в процентах, а на оси абсцисс - концентрация метанола в объем ных процентах (штриховая линияозначает десорбцию гиббереллиновойкислоты, а непрерывная линия - де 747 2сорбцию примесей; на фиг.2 - десорбция гиббереллиновой кислоты и примесей при помощи ацетона (на оси абс-цисс указана концентрация ацетона вобъемных процентах, остальные величины сохраняют те же обозначения,что и на фиг.1) .Извлечение гиббереллийовой кислоты согласно предлагаемому способупозволяет получать конечный продуктс выходом вьппе 707П р и м е р 1. Через ионообменнуюколонну известной конструкции (илидве последовательно работающие колонны), заполненную смолой АмберлайтХАД, пропускают сверху вниз культуральную жидкость после биосинтезагиббереллиновой кислоты содержащую350 ед/см гиббереллиновой кислоты) соскоростью 4 объема на объем шихтысорбента в час (4 ч ") до моментапоявления в элюате следов этого продукта. Затем пропускают через колонну в этом же направлении водный раствор, содержащий 95% ацетона, со скоростью 2 ч . После небольшого изменения окраски элюата меняют фракцию иначинают собирать главную гиббереллиновую фракцию. Собрав главную фракциюв количестве, равном двум объемамшихты, начинают дозировать водный раствор, содержащий 507. ацетона. Собравочередную фракцию объемом 0,5 объемашихты,меняют фракцию и продолжаютпропускать 507-ный ацетон до получения почти бесцветного элюата. Иэ главной гиббереллиновой фракции под.уменьшенным давлением отгоняют ацетон,добавляя по ходу перегонки небольшоеколичество воды, из водного остаткапосле отгонки ацетона выделяют известным способом кристаллическую гиббереллиновую кислоту. Выход - 80% в рассчете на сырой продукт,П р и м е р 2. Извлекают гиббереллиновую кислоту из культуральнойжидкости после биосинтеза как в примере 1, с тем отличием, что для десорб.ции гиббереллинов применяют водньпраствор, содержащий 35 ацетона, а длярегенерации сорбента - водный раствор,содержащий 65% ацетона.П р и м е р 3. Извлекают гиббереллиновую кислоту из культуральной жидкости после биосинтеза как в примерах 1 и 2, с тем отличием, что длядесорбции гиббереллинов применяют водный раствор, содержащий 70% метанола,а после отбора главной гиббереллнноП р и м е р 9, Извлекают гиббереллнновую кислоту из культуральной жидкости после биосинтеза как в примерах 4 и 5, с тем отличием, что для десорбции гиббереллинов применяют водный раствор этанола, содержащий 50 спирта, а дл,. регенерации сорбента - водный раствор, содержащий 202 этанола. Получают результаты примеров 4 и 5, с тем отличием, что для полной десорГции гиббереллиновой кислоты следует испольэовать в 1,5 раза больше элюирующего раствора.40В итоге получают гиббереллиновую кислоту с выходом 722 от количества, содержащегося в культуральной жидкости.Г 3 10807вой фракции регенерацию сорбента проводят водным раствором, содержащим907 метанола.П р и м е р 4. Извлекают гиббереллиновую кислоту из культуральной жид"5кости после биосинтеза как в примере 1, с тем отличием, что для десорбции гиббереллинов применяют водныйраствор, содержащий 857 этанола, адля регенерации сорбента - водный 10раствор, содержащий 257 этанола.После конечного выделения гиббереллиновой кислоты известным способомполучают выход продукта 753 от количества, содержащегося в культуральной 15жидкости,П р и м е р 5. Извлекают гиббе. реллиновую кислоту из культурапьнойжидкости после биосинтеза как в .. примере 1, с тем отличием, что длязаполнения колонн используют высокопористую,среднеполярную сорбционную смолу неионного характера типаАмберлайт ХАД.П р и м е р 6. Извлекают гиббереллиновую кислоту из культуральной жидкости, содержащей 350 ед/смгиббереллиновой кислоты. Культуральную жидкость пропускают через колонну, заполненную смолой Диайон ХП со скоростью 3 ч ", а примеси элюируют 353 этанолом. Получают продуктс выходом 857. в перечете на гиббереллиновую кислоту, содержащуюсяв растворе после биосинтеза. Сыройпродукт содержит 95.,57 гибберелли"новой кислоты,П р и м е р 7. Извлекают гиббереллиновую кислоту из культуральной жидкости после биосинтеза как впримере 1, с тем отличием, что культуральная жидкость содержит 180 ед/см 47 4гиббереллиновой кислоты, а в качестве сорбента используют неионную,неполярную смолу Диайон ХП. Раствор после биосинтеза пропускают соскоростью 8 ч ".Получают выход 813 впересчете на сухой продукт, в которомсодержание гиббереллиновой кислотыравно 89,3 Х,П р и м е р 8, Извлекают гиббереллиновую кислоту иэ культуральной жид"кости после биосинтеза как в примере 4, с тем отличием, что для десорбции гиббереллинов применяютводный раствор этанола, содержащий962 спирта, а для регенерации сорбента - водный раствор, содержащий353 этанола. Получают результаты,аналогичные результатам примера 4,с тем отличием, что главные фракцииэлюата содержат гиббереллиновуюкислоту в большей концентрации. Послеокончательного выделения получаютгиббереллиновую кислоту с выходом707 от количества, содержащегосяв культуральной жидкости.Ю 80747. 30 80 Уд 100 оставитель Д.Сатароваехред 0 Неце Корректор А,Ильин едактор С,Тимохин Заказ 1386/ Тираж 522 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5 Филиал ППП "Патент" Проектная, 4 г. Ужгород,