Способ получения s(+) анантиомера 2-арилалкановой кислоты

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 5) Я Т ПАТЕНТУ Аг-СН-СООН возм неча кал. органи ях тем микро пенэи мик эрилал в зависимости от вида м перемешивания сусклеточных экстрактов мида рацемической 2 ит к получению смеси ты 8 и амида 2-арила эрил ГОСУДАРСТВЕНЮЕ ПАТЕНТНОВЕДОМСТВО СССР(57) Использование: биотехнология, областьсинтеза биологически активных соединеИзобретение относится к биотехнологии и касается способа получения И+/ активных 2-арилалкановых кислот общей формулы: м анантиоселективного гидролиза соотвующих рацемических амидов.общей формуле (1) Аг означает фенил, ожно замещенный атом галона, а й озет атил, пропил или изопропил-радиЦель изобретения - повышение оптической чистоты целевого продукта и выхода анантиомера,Сущность изобретения заключается в том, что рацемический 2-(4-хлорфенил)-3- метилбутирамид/гидролизуют ВгеУ)Ьас 1 егйгп Р 312/СВЗ 713.73/, продуцирующей нестереоспецифическую амида. зу.Я 2( 181628 АЗ Р 7/40 41/00// С 12 Р 7/40, 2 й 143 Яь,ссг И ний. Сущность изобретения: рацемический 2-(4-хлорфенил)-3-метилбутирамид подвергают стереоспецифическому гидролизу амидаэой, продуцируемой ВгечЬастегЬв Р 312 (СВЗ 713.73) в 2-(4-хлорфенил)-3-метилбутановую кислоту. Способ предусматривает получение смеси указанных веществ. После разделения водных и органических фаз путем декэнтации и подкисления водной фазы, 2-(4-хлорфенил);3-метилбутановую кислоту экстрэгируют хлороформом. Анантиомерный избыток изомера Я Щ составля- . ет 97,5. После отделения кислоты с Р(+)а - метилбензиламином анантиомерный избыток превышает 90. Селекцию микроорганизмов, позволяющихх осуществлять анэнтиоселективный гидролиэ, осуществляют в зависимости от ихспособности к селективному гидролизу ра- а цемического 2-(4-хлорфенил/-3-метилбу-р тирамид в а -мвтилбутановую кислоту всоответствующей среде до преобразования20 продукта с последующим измерениеманантиомерного избытка и отбирают микро-М организмы с аиантиомерным выходом. пре-Оф вышающим 65. 4Согласно настоящему изобретению, способ обычно осуществляется в водной или однородной или неоднородной водно-,вопределенныхуслови-. (Д ческой среде пературы и рН организма пут и клеток или роорганизма и акановой кисл особ привод каиовой кислИ 16 287 Составитель И, ПриваловаТехред М,Моргентал Корректор М. Самборская Редактор С, Кулакова Заказ 1649Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 канавой кислоты Й, причем последний может рацемизироваться по известной технологии в амид рацемическай 2-арилалкановой кислоты, который может снова гидролизоваться в 2-арилалкановую кислоту 3 в вышеприведенных условиях.Например, рацемизацию осуществляют путем нагрева с гидратам окиси аммония при температуре от 80 до 160 С.П р и м е р 1. Штамм ВгеИЬас 1 егЬгп В 312/СВ 3 717.73/ культивируют в колбе с перемешиванием при 28 С в течение 14 ч в среде со следующим составом, г:Глюкоза 10(КН 4) 2304 . 5КН 2 Р 04 . 1,01ИагНР 04 12 Н 20 1,64К 2 Н РО 40,82СаСг2 Н 20 0,012 ЕпОг 0,0012 Ее 304 7 Н 20 0,0012 Мп 304 е Н 20 0,0012 МЯ 304 7 Н 20 0,5Хлоргидрат тиамина 0,002 Вода в количестве,достаточном да смз 1000 Эту предварительную культуру используют для затравки культуральнай среды, имеющей тот же самый состав, но содержащий, кроме тога, й-метилацетамид с концентрацией 20 мм, Культивирование осуществляют в колбе с перемешиванием в течение 24 часов при 28 С. Полученную биомассу отделяют путем центрифугирования, затем ее промывают два раза раствором хлорида натрия при 9 г/л.Осадок центрифугирования, содержащий 320 мг клеток Вгеч 1 ЬастегЬе Й 31 2 в расчете на сухое вещество, переводят в суспензию с 5 сМбуферного раствора (50 мМ) при рН = 7,0. Добавляют 71,2 мг рацемическога 2-(4-хлорфенил)З-метилбутирамидар моль/. После 117 часов перемешивания при 25 С реакционную смесь разбавляют путем добавления 45 смэ смеси ацетонитрил-хлористоводародная кислота й (90 - 10 объемн), Бактерии удаляютцентрифугированием, Состав смеси определяют посредством высокоразрешающейжидкой хроматографии (В РЖХ).5 Всплывшая часть содержит 258р моль 2-(4-хлорфенил)-З-метилбутирамида,73 р моль 2-(4-хлорфенил)-3-метилбутановой кислоты.Добавляют хлорид натрия для улучшения разделения водных и органических фаз.К отделенной путем декантации органической фазе добавляют смесь эфир - едкийнатр 0,1 й (3 - 1 объем). После разделенияводных и органических фаз путем де 15 кантации и подкисления .водной фазыэкстрагируют хлороформом 2-(4-хлорфенил)-3-метилбутановую кислоту,Измерение вращательной способностипоказывает, что анантиомерный избыток20 .изамера 3(+) составляет 97,5 .После отделения кислоты с й(+) а-метилбензиламином, анализ посредством хроматографии В РЖХ показы вает, чтоанантиамернцй избыток превышает 90 .ФОрмула и зоб рете н ияСпособ получения.3(+) анантиомера 2 арилалкановой кислоты формулыйЗо А-СНН (1)где Аг- фенил, возможно замещенный атом.галогена;Й - атил, пропил или изопропил,путем анантиоселективного гидролиза фун 35 кционального производного 2-арилалкановой кислоты в присутствииФЕрментпродуцирующего микроорганизма,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с цельюповышения оптической чистоты целевого40 продукта и выхода анантиомера, в качествефункционального производного 2-арилалкановой кислоты берут рацемический 2-(4 хлорфенил)-З-метилбутирамид, а в качествеферментпродуцирующего микроорганизма45 используют ВгеИЬастегца РЗ 12 (СВ 3713.73).