Способ определения активности церулоплазмина в сыворотке крови

(ГОСПАТЕНТ СССР)ОПИСАНИЕ ИЗО ЕТЕН ТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬ С У 44дарственный ун юл.ий г вид.601 ОПР ПЛАЗ вание: биология и медицина, бретения; в ацетатный буфер Изобретение относится к биохимии, в частности к лабораторной практике и клиническим лабораторным исследованиям,Известен способ определения активности церулоплазмина, недостатком которого является необходимость каждый раз при определении активности церулоплаэмина готовить свежий ацетатный буфер,Целью изобретения является упрощение способа эа счет использования консерванта бромистого 2-трифенилфосфониометилнафталина (БТФН), который растворяют в ацетатном буфере, а исследуемую пробу вносят непосредственно в полученный раствор,Способ осуществляется следующим образом.В две опытные и одну контрольную пробирки вносят по 2 мл ацетатного буфера, содержащего 0,5-1,25 г/л БТФН и 0,1 мл исследуемой биологической жидкости. Пробы взбалтывают, закрывают резиновыми пробками и помещают на хранение в холодильник при 5-10 С, В последующие 30 дней(21) 4869817/ (22) 25.09,90 (46) 30.11.92. (71) Черновиц ситет (72) И,В.Меге шинский (56) Авторское М 1273800, кл (54) СПОСОБ СТИ ЦЕРУЛО КРОВИ (57) ИспользоСущность изо а, Г.М.Ярмольчук и Б.М,Гор ельство СССРИ 33/48, 1984,ДЕЛЕНИЯ АКТИВНО ИНА В СЫВОРОТК з 6 01 М 33/48, С 12 0 1/26 в качестве консерванта вносят бромистыи 2-трифенилфосфониометилнафталин из расчета 0,5 - 1,25 г/л буфера. Исследуемую сыворотку смешивают с подготовленным заранее буфером. К анализируемой пробе последовательно добавляют сульфат натрия и п-фенилендиамин, термостатируют ее. Затем вносят в нее н-бутанол и выдерживают на холоде. Измеряют спектр поглощения в бутаноловой фракции, по которому оценивают результаты. Используемый консервант одновременно сохраняет срок годности буфера и активность церулоплазмина, 1 табл. аналогично подготовленные пробы накапливают в холодильнике. На 30-ый день или в любойудобный для работника день, но не позже 30-го дня, определяют активность церулоплазмина во всех пробах, на что затрачивается значительно меньше рабочего времени,П р и м е р, В две опытные и одну контрольную пробирки вносят по 2 мл ацетатного буфера, содержащего 0,75 г/л БТФН, и по 0,1 мл исследуемой биологической жидкости. Пробы взбалтывают, закрывают резиновыми пробками и помещают на хранение в холодильник при 5-10 С, В последующие 30-и дней аналогично подготовленные пробы накапливают в холодильнике, На 30-й или в любой удобный для работника день, но не позже 30-го дня, определяют акгивность церулоплаэмина во всех накопившихся пробах, для чего в контрольные пробирки добавляют 1 мл раствора сульфита натрия и взбалтывают их содержимое. Во все пробирки вносят по 1 мл и-феФнилендиамина, встряхивают и помещают их1778695 в водяной ультратермостат с температурой 37 С на 60 минвзбалтывая их через каждые 3-5 мин. При этом царулоплазмин взаимодействует с и-фенилендиамином и превращает его в продукт синего цвета. Через 1 ч во все пробирки приливают,по 7 мо н-бутилового спирта, в результате чего останавливается ферментативная реакция в опытных пробирках, Пробирки закрывают пробками, интенсивно встряхивают 30-40 с., помещают в ледяную баню на 10 минут, после чего центрифугируют со скоростью 1,500 об/мин в течение 10 мин, отсасывают верхнюю бутаноловую фазу, переносят ее в кювету с толщиной рабочего слоя 10 мм и колориметрируют на ЭЭК при длине световой волны 582 нм (фильтр газ 7). Для выражения активности церулоплазмина в условных единицах среднюю арифметическую величину экстинкции. полученную при колориметрии двух параллельных опытных проб против контроля, умножают на 100 и делят на количество миллиграммов .белка, содержащегося в 0,1 мл биологической жидкости, Содержание белка определяют по одной из известных методик.В таблице приведены экстинкции, полученные по предлагаемому способу в разные сроки хранения проб, состоящих из 2 мл ацетатного буфера, содержащего 0,25 - 1,5 г/л БТфН и 0,1 мл сыворотки крови.Экстинкции активности церулоплазм Проведенные эксперименты в процессеиспытаний предлагаемого способа подтверждают его экономический эффект, выражающийся в значительном снижении 5 себестоимости одного анализа на активность церулоплазмина. Использование предлагаемого способа существенно экономит рабочее время сотрудника, а также затраты электроэнергии, химреактивов и 10 облегчает выполнение научной и практической работы. формула изобретения Способ определения активности церу лоплазмина в сыворотке крови, включающий смешивание исследуемой пробы,. консерванта и ацетатного буфера, добавление к смеси раствора сульфата натрия, внесение п-фенилендиа мина, 20 термостатирование ее с последующим добавлением н-бутанола, выдерживанием на холоде, отделением бутаноловой фазы, измерением ее спектра поглощения и оценкой результатов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, 25 с целью упрощения способа, в качестве консерванта используют бромистый 2-трифе- нилфосфониометилндфталин, который предварительно растворяют в ацетатном буфере из расчета 0,5-1,25 г/л буфера, а 30 исследуемую пробу вносят непосредственно в полученный раствор консерванта. ина, полученные по заявляемому способу Концентрация БТФН в ацетатном буфере, г/л С ок х анения в нях В день за 6.0,62 0,04 о,бг О.О 4 о.бг 0,04 0:бг О.оа о,бг 0,05 0,62 О,ОЭ 0,55 О,ОЗ ОБ 0,64 0,04 0,5 0,62 О,ОЭ О,Б О.Б 2 о.оэ О,50.63 О,ОЗ 0,50,610,04 ОБ 0.24 0,02 О.О 1 0.56 0,04 о,т 0,62 0,04 О,б О,бг О,ОЭ О,б 0,62 о,оэ 0,5 0,42 О.оа О,ат 0,15 О,О 1 О,ат 0.49 о,оз о,от О,О 4 0,5 0,63 О,оэ 0,5 О,б 2 0,04 05 0,43 О,О 2 о.от 0,12 О,О 1 О 01 о,зэ 004 О.О 1 О,БЗ о,оз 0,5 0,63 0,04 0,5 0,63 0,04 0,5 0,41 оли О,О 1 009 О,О 1 О.О 1 0,22 о.оз О.О 1 О,бз О.О 4 0,5 0,63 О,ОЗ О,б О,БЗ о,оэ Об 0.38 О.О 1 О.О 1 О.О 7 О,О 1 О.О 1 017 001 О,О 1 О,бэ 0,1 0,42 0,040,05 0,42 0,04 0,02 0.39 0,05 О,О 1 П р и м е ч а н и е, М - средняя величина, полученная пут ем статистическои обработки+щ - средняя ошибка средней величины;р - показатель достоверности,Составитель И, МегераТехред М,Моргентал Корректор Е, Папп Редактор Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 Заказ 4191 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раущская наб 4/5