Способ определения специфического иммунитета при ревматоидном артрите

(51)5 6 01 Й 33/4 ГОСУДАРСТ 8 Е ННЬПО ИЗОБРЕТЕНИПРИ ГКНТ СССР КОМИТЕТИ ОТКРЫТИЯМ ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 1(71) Киргизский государственный медицинский институт(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКОГО ИММУНИТЕТА ПРИ РЕВМАТОИДНОМ АРТРИТЕ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и ревмэтологии. и может быть использовано для определения специфического иммунитета при ревматоидном артрите. Цель изобретения - повышение точности способа Это достигается Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и ревматологии,Целью изобретения является повышение точности способа за счет определения уровня специфических глобулинов, связанных с клетками, путем обработки клеток антисывороток к иммуноглобулинам человека, меченной флуоресценизотиоцианатом (ФИТЦ).Способ осуществляют следующим образом,Лимфоциты выделяют из крови центрифугированием над смесью фиколгипак 1,078 г/см, однократно отмывают, ресус 3лендируют в 0,5 мл физиологического раствора йаС. По 0,1 мл суспензии вносят в две центрифужные пробирки, в одну добавляют тем, что выделенные из крови больного лимфоциты инкубируют с препаратом анти- гена хряща (приалон) и без него, определяют уровни глобулинов, связанных с клетками, путем обработки антисывороткой к иммуноглобулинам человека. меченной ФИТЦ, Регистрируют уровни флуоресценции в опыте и контроле и рассчитывают показатель уровня глобулина по формуле Кг = (Гол/Гк - 1) 100, где Кг - показатель уровня глобулинов; Гл и Г - уровни флуоресценции в опыте и контроле соответственно, При значении Кг, большем или равном 6. определяют наличие специфического иммунитета при ревматоидном артрите. Изобретение позволяет на 400 повысить точность определения специфического иммунитета при ревматоидном артрите. 1 табл. 0,02 мл разведенного в 20 раз препарата румалон (антиген хряща), в другую - 0,02 мл физиологического раствора ИаС. Пробы инкубируют 18 ч при 37 С во влажной камере.После инкубации во все пробы вносят по 0,02 мл люминесцентной сыворотки против глобулинов человека в удвоенном рабочем титре, пробы встряхивают, инкубируют 1 ч при комнатной температуре, затем центрифугируют 5 мин при 800 9, надосадочную жидкость отбрасывают и осадок ресуспендируют в 1 капле физиологического раствора ИаС. Каплю суспензии из опыта и контроля переносят на предметное стекло, подсушивают и определяют показатели специфической флуоресценции лимфоидных клеток.Далее рассчитывают коэффициент поформулеКг = ( - 1) х 100 усл.ед,ГопП р и м е р 1. Больная Р 1935 года рождения, поступила в клинику с выраженным суставно-воспалительным синдромом мелких и крупных суставов рук, отмечены 10 потеря в весе, субфебрильная лихорадка, ускорение СОЭ до 35 мм/ч, лейкоцитоз 9000 мкл, палочкоядерный сдвиг; Обнаружен ревматоидный фактор в титре 1:160. Показатель специфического иммунитета оказался 15 отрицательным (1 усл,ед.). Клинический диагноз: ревматоидный артрит серопозитивный, быстро прогрессирующее течение, активностьстепени. Однако в дальнейшем у больной появились эритематозные 20 высыпания на лице, в сыворотке обнаружен антинуклеарный фактор в титре 1:800, Диагноз ревматоидного артрита был снят и выставлен диагноз: системная красная волчанка, острое течение, 25П р и м е р 2, Больная Т 1945 года рождения, поступила в клинику с умеренно воспалительными изменениями колвнных и голеностопных суставов обеих ног. Общие анализы крови и мочи в пределах нормы. 30 Показатель специфическго иммунитета положителен (9 усл.ед.), Клинический диагноз: деформирующий остеоартроз с умеренным синовитом, В дальнейшем у больной развился воспалительный синдром в мелких су ставах кистей и стоп, отмечено нарастание СОЭ до 40 мм/ч, лейкоцитоз 8,5 10/мл, Рентгенологически обнаружены эрозивные изменения в мелких суставах кистей. Диагноз остеоартроз был снят и выставлен диаг 40 ноз ревматоидный артрит, активность 11 степени серонегативный.П р и м е р 3, Больная М., Зб лет, находилась на стационарном лечении с 12/Х по 2/Х 1989 г. с диагнозом; ревмато идный артрит, полиартрит медленно прогрессирующее течение, 11 стадия,степень активности, серонегативный. Жалобы при поступлении на боли; припухлость голеностопных, лучезапястных суставов, мелких 50 суставов кистей, утреннюю скованность более 2 ч, ограничение движения в правомлоктевом суставе. Из анамнеза; в течение 1,5 лет принимает с хорошим эффектом Д- пенициламин. Обьективно: дефигурация преимущественно пролиферативного характера лучездпястных и голеностопных суставов. Контратура правого локтевого сустава. Со стороны внутренних органов беэ патологии. Лабораторно: Нв - 12,1 г/л; эр.; - 3,9 х 10 2," ЦП - 0,9; Л - 5,2 х 10 /л; СОЭ -22 мг/г; СРБ+, фибриноген -4,1 ммоль/л, Рентгенограмма суставов: околосуставной остеопороз, сужение суставной щели, эрозии хряща.Определение специфического иммунитета (СИ): ЛА: Рф отр, РТМЛ с АХ: 50,7 РГПЛ с АХ: Кг=+ 6 усл.ед.Из этого видно, что больной с достоверным ревматоидным артритом серонегативным вариантом, получающим в течение 1,5 лет с хорошим эффектом "базисный" препаратт Д-пенициламин, при определении специфического иммунитета РГПЛ-методом определяется минимальйое значение Кг, равное 6 усл.ед., что коррелирует с мини-мальной клинико-лабораторной активностью болезни (1 степень активности).Определяли наличие СИ в реакции торможения миграции лимфоцитов (РТМЛ), в реакции глобулинпродукции лимфоцитов (РГПЛ) с АХ, по выявлению ревматоидного фактора (РФ) в латекс-агглютинации (ЛА).Результаты представлены в таблице.Иэ данных таблицы следует, что СИ обнаруживается РГПЛ-способом в 87,50/ случаев, что на 40,40 превышает частоту положительных результатов РТМЛ-способом и на 37,5/0 - ЛА-способом.Ф о р мул а и зоб рете н и яСпособ определения специфического иммунитета при ревматоидном артрите путем инкубации лимфоцитов крови с антигеном хряща и без него и с последующей оценкой реакции, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что. с целью повышения точности способа, определяют уровни глобулинов, связанных с клетками, путем обработки клеток антисывороткой к иммуноглобулинам человека. меченной флуоресценизотиоцианатом, далее регистрируют уровень флуоресценции и рассчитывают показатель уровня глобулина по ФормулеК = (Гоп - 1)100Ггде Кг - показатель уровня глобулинов;Гоп - уровень флуоресценции в опыте;Г - уровень флуоресценции в контроле, и при значении этого показателя, равном и больше 6, определяют наличие специфического иммунитета при ревматоидном артрите.1719998 Частота обнаружения специфического иммунитета в группах обследованных ЛА,РТМЛ, Я РГПЛ,Составитель П,АртюшинаТехред М.Моргентал Корректор О.Кравцова Редактор А.Лежнина Заказ 769 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 Группы обсле ованных