Способ определения бактерицидной резистентности лейкоцитов при лейкозе

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 1774222 09 01 й 1/28 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ный институт А,А,федькоСССРА 61 В 10/ Я БАКТЕРИ ЛЕЙКОЦИк медицине, а екционной им, 4 ь ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЪСТВУ(71) Киевский государственусовершенствования врачей(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНЦИДНОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТТОВ ПРИ ЛЕЙКОЗЕ(57) Изобретение относитсяименно к гематологии и инф Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционной иммунологии, Цель - повышение точности определения бактерицидной резистентности лейкоцитов при лейкозе,Способ осуществляют следующим образом, Определяют содержание катионных белков в мазках крови по методике М,Г.Шубича, Высушенные свежеприготовленные мазки фиксируют 60 с 5/-ным раствором , сульфосалициловой кислоты, промывают . дистиллированной водой, высушивают, окрашивают 2 мин 0,10-ным раствором бромфенолового синего в 0,05 М боратном буфере (рН 8,2), промывают в трех сменах этого же буфера по 2 мин в каждой смене.Мазки тщательно промывают водой, высушивают и микроскопируют. Активность катионных белков выражают в условных единицах (у,е,) на основании вычисления среднего гистохимического коэффициента (СГК) по формуле Астальди, Верга:СЗА+ 2 Б +1 В + ОГ100 мунологии. Целью является повышение точности способа, Цель достигается тела, что в лейкоцитах периферической крови определяют интегральную цитохимическую активность, для чего рассчитывают содержание катионных белков и активность оксидаз. И при интегральной цито- химической активности 4,5 ед. и ниже определяют слабую бактерицидную активность. Способ значительно повышает точность определения бактерицидной активности, что позволяет вовремя определить угрозу возникновения осложнения при лейкозе. где цифры 3,2,1,0 - степень интенсивности окраски (А - гранулы занимают всю цитоплазму клетки, Б - гранулы занимают 3/4 части цитоплазмы, В - единичные гранулы в цитоплазме, 0 - отсутствие гранул),Способность нейтрофилов .восстанавливать нитросиний тетразолий (НСТ) определяют по методике М,Г.Шубича и В.Г.Медниковой. В силиконированные пробирки добавляют по 0,1 мл венозной гепаринизированной крови больных и по 0,1 мл 2%-ного раствора НСТ в 0,2 М фосфатном буфере, Пробирки помещают на 30 мин в термостат при 37 С. После 15-минутного охлаждения при комнатной температуре из верхней части делают мазки, высушивают их и фиксируют в абсолютном метаноле, Мазки окрашивают по Романовскому и микроскопируют с масляной иммерсией, определяя число формазанположительных клеток на 100 нейтрофилов. Для оценки интенсивности НСТ-реакции рассчитывают средний гистохимический коэффициент.Для расчета бактерицидной активностиььейтрофила (БАН) применили формулу:Л Н ( СГК + СГК ) 100,где Л - . количество лейкоцитов (10 ) л;Н - количество неьлтрофилов в лейкоцитарной формуле, %;СГК - средний гистохимический коэффициент активности катионных белков;СГК. - средний гистохимический коэффициент интенсивности НСТ-реакции,П р и м е р 1. Больной С-ко, 1954 г,рождения, поступил в гематологическое отделение па поводу хронического миелолей.коза без кгьинических и лабораторныхпризнаков инфекции,Г 1 ри обследовании обнаружены следующие лабораторные и цитохимические показатели: количество лейкоцитов 37,0 10" (л)норма 7,4+0,01 10 (л), сегментоядерныхсьнейтрофипав в формуле 11% (норма64,9+0,2%), Интенсивность (СГК) НСТ реакции 0,06 (у здоровых лиц 0,218+0,01 усл,ед,),дпя катианных белков 0,84 (норма - 1,825.ф.0,029 усп,ед,), Таким образом, у больногоотмечены значительный лейкоцитоз, нейтрапения и сникение ингенсивнасти цитохимических реакций, Прьч подсчетеинтегральной бактерицидной активностиполучены значения 3,66 у,е т.е. ниже гра-ницы нормальных значений (6,98 + 0,18,колебания 4,55 - 10,1 у,е,), Следовательно,у больного выявлена значительное (в среднем на 47,5%) снижение бактерициднастинейтрофипов па сравнению с данными здоровых лиц, следствием чего явилось присоединение у больного бактериальнойпневмонии,40П р и м е р 2, Больная К-к, 1935 г, рожд.,поступила в гематолоплческое отделение поповоду истинной полицьчтемиьч, Палучеььььследуьащие лабораторные и цитохимические значения: содержание лейкоцитов 10,0 хЯх 10/л, нейтрофилов 86%, интенсивностьНСТ-реакции 0,42/, катианных белков 1,3усл,ед.Таклм образом, у больной выявленылейкацитоз, нейтрофилез, повышение интенсивности НСТ-реакции, тогда как интенсивность реакции на катианные белкиоказалась ниже, чем у здоровых лиц, Используя метод-прототип, можно было сделать заключение о снижении 5бактерициднасти нейтрафилов, однакопри подсчете интегральной бактерицидно сти по предложенному нами способу получены значения бактерицидности (14,79 уел,ед.), значительно превышающие нормальные,П р и м е р 3. Больная Б-ва, 1958 г.рожд поступила в гематологическое отделение по поводу лекарственного агранулоцитоза,Получены следуьощие лабораторные и цитохимические данные: содеркание лейкоцитов 13,5 10 /л, содеркание нейтрофи 9лав - 36%, интенсивность НСТ-реакции 0,61 усл,ед., интенсивность реакции на катионные белки 1,72, Таким образом, на фоне лейкоцитоза и нейтропении обнаружено снижение интенсивности НСТ-реакции при нормальных значениях СГК для катионных белков. На основании полученных данных можно было сделать следующие выводы о состоянии бактерицидности нейтрофилов: по данным НСТ-реакции - о значительном снижении ее, по данным реакции на катионные белки - сохранной бактерицидности. При пересчете интегральной бактерицидной активности получены нормальные.значения (5,92 усл.ед,).Способ позволяет более точно определить наличие снижения бактерицидной активности лейкоцитов. что позволяет предотвратить осложнение заболевания,Формула изобретения Способ определения бактерицидной резистентности лейкоцитов при лейкозе, путем их исследования, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности способа, в лейкоцитах апределяьот интегральную цитохимическую активность, для чего рассчитывают содержание катионных белков и активность оксидаз по формуле А=00 где ЦА - интегративность,Л - общее ьная цито ическая акейкоцитов,держание О /л; Н - содержание нейтрофил КБ - средний гистохимичесциент содержания катионных б АО - средний гистохимичециент активности оксидаз;100 - количество просмот ов,%;кий казффиелков;кий коэффинных кл тоь,и при интености 4,5 едтериальную льн аи цитохимической активе определяют слабую бактентность.