Штамм вируса болезни гамборо для получения биологических препаратов и их оценки

(57) Использование; иммунология, вирусология, ветеринария, Сущность изобретения: штамм "27/94" вируса болезни Гамборо ГКВ 2105 культивируется и титруется на коммерческих цыплятах 35 - 40-дневного возраста и куриных эмбрионах. Штамм вызывает характерную клиническую и патолого-анатомическую картину заболевания через 48 - 72 ч с титром вируса 10- 10ЭИД Бо/мл, а активность сыворотки крови достигает в реакции нейтрализации 1:1024 и в реакции диффузионной преципитации 1:64. Вирус свободен от контаминации, специфичен и активен. сасо цгза 1 ОР ПР иммунной сыворотки, должны быть достаточно вирулентными, свободными от контаминации и обладать высокой биологической и антигенной активностью. Технология производства антигена при болезни Гамборо предусматривает инактивацию вируса, поэтому штаммы должны быть чувствительными к воздействию общепризнанных инактивирующих препаратов и контролироваться на полноту инактивации,Выпуск диагностикумов при болезни Гамборо до настоящего времени не налаен е диагностикумь СПФ-эмбриона Существующна СПФ-цыплятатуре клеток.В зарубежнштаммов вирусазуемых для изготроток при данно(4), штамм "1/РУУказанные шСПФ-цыплятах гот ивк ль иаве 3 й практике изве болезни Гамборо овления антигено инфекции - штам ен ряд испольи сыво"ЯВ - 1" ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР(56) Авторское свидетельство СССРМ 1668392, кл, С 12 М 7/00, 1989.1 асЫба, 1 гсап, Рас 1 ое Несестоп тцсгсезс аког Ве зегос 1 а 9 позз о 1 поестопзс 11 зеазе, арЧу. Яс 1977, ч. 39, р 1-5.(54) ШТАММ ВИРУСА БОЛЕЗНИ ГАМДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХПАРАТОВ И ИХ ОЦЕНКИ Изобретение относится к ветеринарнои вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при производстве антигена и иммунной сыворотки для постановки реакции диффузионной преципитации (РДП) и встречного иммуноэлектрофореза (В И Э Ф) с целью лабораторной диагностики болезни Гам боро.Болезнь Гамборо протекает остро, с характерной клиникой заболевания и субклинически. Широкое распространение имеет субклиническая форма, При острой форме болезни на первый план выступают клинические и паталого-анатомические признаки, свойственные вторичным инфекциям, что создает затруднения при постановке диагноза, Поэтому проведение лабораторных исследований имеет решающее значение при постановке диагноза и требует наличия специфических высокоактивных стандартных антигенов и сыворотки,Штаммы вируса болезни Гамборо, предназначенные для производства антигена и ммы культивируются на ободных от патогенныхфакторов) или в культуре клеток различного происхождения, Однако получение и содержание СПФ-цыплят требует больших материальных и трудозатрат, размножение вируса в культуре, клеток вызывает снижение его антигенной активности, Полученные образцы антигена и сыворотки с использованием указанных штаммов обладают низкой активностью и не поддаются стандартизации,Широко используют высокоактивные вирулентные штаммы вируса болезни Гамбооо. Известен штамм"спеаИе", используемый.для произ 5 10 водства антигенов и сывороток для лабораторной диагностики болезни Гамборо - прототип изобретения.Однако для культивирования этого штамма требуются СПФ-цыплята, Максимальной величины биологическая активность его достигает через 96 часов после заражения цыплят, показатели биологической активности при этом низкие(10- 10ЭИД во/мл),Целью настоящего изобретения является получение нового штамма вируса болезни Гамборо, отвечающего всем требованиям производства диагностикумов, т,е, представляющего свободный от контаминации вирусный материал, обладающего высокой вирулентностью, биологической и антигенной активностью (титр вируса 10-10ЭИДы/мл), способного адаптироваться и титроваться на цыплятах и куриных эмбрионах,Цель изобретения достигается получением вирулентного штамма "27/94" вируса болезни Гамборо - сем, ВгпачбаеВирус имеет кубическую симметрию, без оболочки, с диаметром 60 - 80 нм и относится к РНК-содержащим вирусам семейства Вгпачбае. Вирус устойчив к воздействию температуры 56 С в течение 30 мин, эфира и хлораформа, Инактивируется при воздействии 0,1%-ного раствора формальдегида в течение 24 ч, В лиофилизированном состоянии штамм вируса сохраняет свои биологические и антигенные свойства при хранении в условиях холодильника в течение не менее двух лет, Заражение куриных эмбрионов вызывает гибель и поражение их в виде подкожных кровоизлияний и задержки роста и развития на 5 - 6 сутки после введения вируса,Для культивирования и титрации штамма "27/94" вируса болезни Гамборо использовали коммерческих цыплят 35-40-дневного возраста и куриные эмбрионь 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Для заражения использовали 0,2 мл вируссодержащего материала.При заражении цыплят вирусный материл вводили интраназально. Через 72-96 ч отбирали фабрициевую сумку и готовили гомогенат на физиологическом растворе в соотношении 1:1.При заражении эмбрионов вируссодержащий материал вводили в хориоалантоисную оболочку, Зараженные эмбрионы инкубировали при температуре 37,5 - 38 С. Затем отбирали аллантоисную жидкость и хориоаллантоисную оболочку и аналогично готовили гомогенат.Активность вируса определяли по титру и наличию патолого-анатомических изменений у зараженных цыплят и эмбрионов,Устойчивость штамма к воздействию температуры, эфира и хлороформа определяли путем титрации вируса до и после воздействия на него укаэанных факторов,Инактивацию вируса при получении антигена проводили с помощью раствора формальдегида в конечной концентрации 0,1 в течение 24 ч, Полноту инактивации проверяли заражением эмбрионов.Для получения иммунной сыворотки к вирусу болезни Гамборо,заражали цыплят вирулентным штаммов "27/94" в возрасте 35 - 40 сут и через 15 ст повторно вводили вирус в обьеме 0,5 см в грудную мышцу, Сыворотку от цыплят получали через 14 сут после повторного введения и исследовали на активность и специфичность в реакции диффузной преципитации и реакции нейтрализации,Вирулентный штамм "27/94" вируса болезни Гамборо адаптирован, поддерживается и титруется на коммерческих цыплятах и куриных эмбрионах, Штамм вызывает характерную клиническую и паталогоанатомическую картину заболевания через 48-72 часа после заражения цыплят и образования вируснейтрализующих антител на 14 сутки, Титр вируса в фабрициевой сумке цыплят на 96 час после заражения достигает 10- 10ЭИДо/мл, а активность сыворо 5,5 г,Оток крови цыплят, зараженных этим штаммом, через 14 суток достигает в реакции нейтрализации 1:1024 и в реакции диффузной преципитации 1;64, Вирус свободен от контаминации, специфичен и активен.Формула изобретения Штамм вируса болезни Гамборо ГКВ М 2105 для получения диагностических препаратов и их оценки,