Способ иммуноферментного определения миоглобина

союз соВетскихСОЦИАЛИСТИЧЕСКРЕСПУБЛИК 91755 А 1 ц 5 6 01 й 33/535 ГОСУДАРСТВЕННЫЙПО ИЗОБРЕТЕНИЯМПРИ ГКНТ СССР МИТЕТОТКРЫТИЯМ ИЗОБР И Т АВТОРСКОМУ С ЕЛЬСТВ ый универси сердечно-со .Бакулева и Д.Б,С М., Соловьевхимии, 1986, МЕНТНОГО А Изобретение отн ностике, в частности способам определен бах крови,Целью изобретен ние времени анализаСпособ осуществ ия является сокраще яют следующим об зо(54) СПОСОБ ИММУНОФЕРОПРЕДЕЛЕНИЯ МИОГЛОБИН осится к иммунодиагк иммуноферментным я миоглобина в проДля реализации способа используют меченый пероксидазой миоглобин. Для его получения к 4 мг предварительно активированной перйодатом натрия пероксидазы в карбонатном буфере рН 9,5 добавляют 8 мг миоглобина и инкубируют при постоянном перемешивании в течение 2 ч при комнатной температуре. Для стабилизации связи пероксидаза-миоглобин используют раствор боргидрида натрия с концентрацией 4 мг/мл, Инкубацию реакционной смеси в присутствии этого раствора проводят в течение 2 ч при 4 С, Очистку препарата осуществляют методом гель-хроматографии.(57) Изобретение относится к иммунодиагностике, в частности к иммуноферментным способам определения миоглобина. Цель изобретения - сокращение времени определения, Предварительно сенсибилизируют твердую подложку специфическими антителами в концентрации 2,5 - 5,0 мкг/мл, затем инкубируют одновременно с исследуемой пробой и меченым пероксидазой хрена миоглобином с последующей инкубацией в течение 10 мин. После чего добавляют субстрат и по величине оптической плотности определяют концентрацию в пробе миоглобина, По сравнению с прототипом уменьшается время определения миоглобина в 9 раз. П р и м е р 1. Для анализа используют предварительно обрабатанный антителами к миоглобину в концентрации 2,5 мкг/мл и 1-ной лошадиной сывороткой полистироловый планшет, хранящийся при температуреС, В лунки планшета вносят по 25 мкл растворов миоглобина-стандарта (от 1,25 до 160 мг/мл), а затем - в те же лунки по 25 мкл меченого пероксидазой миоглобина в разведении 1;300. Одновременно в свободные лунки вносят анализируемую пробу сыво- ротки крови и меченный пероксидазой миоглобин в том же состоянии, Инкубацию смесей в планшете проводят в течение 10 мин при 37 С. После отмывки водой лунки обрабатывают раствором казеина с концентрацией 0,5 мг/мл в 0,01 М фосфатном буфере рН 7,2. Затем определяют активность пероксидазы по общепринятой методике в присутствии хромогена 0 - фенилендиамина при 492 нм, По результатам оптической плотности растворов-стандартов строят калибровочную кривую и по ней рассчитывают концентрацию миоглобина в испытуемой сыворотке крови. Ее значение составляет 47,0 + 1,35 нг/мл. Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет уменьшить время определения миоглобина в 9 раз посравнению с временем определения по про 5 тоти пу,В прототипе на определение миоглобина в пробе затрачивается 90 мин, а в предлагаемом способе только 10 мин,Формула изобретения10 Способ иммуноферментного определения миоглобина, включающий сенсибилизацию твердой подложки антителами, .инкубацию ее с пробой, содержащей миоглобин, и меченым пероксидазой хрена ре 15 агентом с последующим добавлениемсубстрата и по величине оптической плотности определяют концентрацию миоглобинав соответствии с калибровочной кривой, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью сокраще 20 ния времени определения, в качестве реагента используют миоглобин, мечейыйпероксидазой хрена, причем подложку сенсибилизируют антителами в концентрации2,5 - 5,0 мкг/мл и инкубируют одновремен 25 но с меченым миоглобином и исследуемойпробой в течение 10 мин,П р и м е р 2, Для анализа используют предварительно обработанный антителами к миоглобину в концентрации 3,75 мкг/мл и 1 О-ной лошадиной сывороткой полистириповый планшет, хранящийся при температуре - 15 С. В дальнейшем определение миоглобина производят согласно примеру 1. Значение концентрации миоглобина в той же самой испытуемой пробе сыворотки крбви составляет 46,3 +1,44 мг/мл. П р и м е р 3. Для анализа используют предварительно обработанный антителами к миоглобину в концентрации 5,0 мкг/мл и 1 О-ной лошадиной сывороткой полистироловый планшет, хранящийся при температуреС, Затем определение миоглобина производят согласно примеру 1. Значение концентрации миоглобина в той же самой испытуемой пробе сыворотки крови составляет 47,2 +1,12 нг/мл,Составитель В,ЛитовченкоТехред М.Моргентал Корректор И,Муска Редактор Ю.Середа Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 Заказ 3924 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, К, Раушская наб 4/5