Способ определения количества реакционных центров фотосистемы 2 растений

.Ж 0 01 Ч 33/00 01 БРЕТЕНИЯ СВИДЕТЕЛЬСТВ АВТОРСК онных центров фотосистемы двух растении. Целью изобретения является повышение точности и ускорение способа. Для достижения поставленной цепи спектрофотометрическое измерение протоиндуцированных изменений поглощения проводят в среде, содержащей 25 - 100 мкМ силикомолибдата натрия и 0,5 - 1 мМ этилендиаминтетраацетата натрия. В качестве исследуемого образца используют клетки или хлоропласты или субхлоропластные частицы, а количество реакционных центров протосистемы двух растений определяют по количеству первичного донора электрона протосистемы%27оведения и ф осинтез 8, р. 4712 ОЛИЧ ЕСТ- ФОТОСИохимии, би, а именно к тва реакциПбво цы, Для спектрофотометрических измерений фотоиндуцированных изменений поглощения образца Л А при 678 нм в кювету ( = 1 см) вносят 50 мкМ силикомолибдата натрия и доводят до 2 мл суспензией клеток.Измерения ЬА Пбво проводят на двух- лучевой фосфороскопической установке. Мощность зондирующего света - 50 эрг см с, мощность действующего света 2,8 10 эрг см с . Точность измерения составляет 10 4 ед, оптической плотности.П р и м е р 2. Хлоропласты выделяют из 10-14-дневных проростков гороха на холоду (при 0 + 4 С). Для этого 50 г листьев .разрушают в гомогенизаторе в течение 2-3 с в среде, содержащей 0,35 М МаС, 0,02 М .трис-НС буфер(рН 7,8) и 2 мг/мл аскорбата натрия. Фильтрат, полученный после отжимания массы через полотно и восемь слоев Изобретение относится к биофизике,биохимии и физиологии растений, а именно к способам определения количества реакционных центров растений, и может бытьиспользовано в исследованиях структурнофункциональной организации пигмент-белковолипидного. комплекса фотосистемыдвух растений.Цель изобретения - повышение точности и ускорение способа,П р и м е р 1. Суспензию клеток водоросли СЫапубоеопаз гепЬагб инкбируют втечение 10-15 мин при комнатной температуре в среде А, содержащей 0,1 тритонаХ; 0,8-1 М трис-НС (рН 8,0-9,3); 35-40мМ Ма С; 0,5-1,0 мМ этилендиаминтетраацетата натрия,В аликвоте определяют концентрациюхлорофилла в 80-ном ацетоне для вычисления величины фотосинтетической единиГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ И(71) Институт почвАН СССР(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯВА РЕАКЦИОННЫХ ЦЕНТРОСТЕМЫ ДВУХ РАСТЕНИЙ(57) Изобретение относится к бофизике и физиологии растениспособам определения количе 1664176 А1664176 30 Составите,ль Н.РодоваТехред М.Моргентал Корректор И.Муска Редактор А.Козориз Заказ 2333 Тираж 411 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР ф 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 марли, центрифугируют в течение 1 мин при 1000 об/мин, осадок отбрасывают, супернатант вновь центрифугируют при 5000 об/мин в течение 5 мин. Супернатант (обломки хлоропластов) отбрасывают, а осадок целых хлоропластов ресуспендируют в среде А. Концентрацию хлорофилла определяют в 80-ном ацетоне.Определение количества реакционных центров фотосистемы двух растений в хлоропластах проводят по примеру 1.П р и м е р 3. Проводят выделение фрагментов хлоропластов, обогащенных фото- системой двух растенийДля этого хлоропласты тщательно суспендируют в среде, содержащей 0,07 М фосфатный буфер (рН 7,0), 0,5 М сахарозу и 0,035 М йаО. Затем вносят в реакционную смесь 1 О-ный раствор дигитонина для разрушения хлоропластной мембраны. Полученную суспензию обрабатывают на ультразвуковом диспергаторе (22 кГц, 400 Вт, 1 мин), чтобы получить фрагменты хлоропластов с одинаковой степенью нарушенности мембран, и после добавления йаС (до 2) инкубируют на ледяной бане при энергичном перемешивании в течение 40 мин, Гомогенат центрифугируют 15 мин при 4000 хо, осадок отбрасывают, а к супернатанту быстро добавляет тритон Хдо конечной концентрации 0,1 - 0,15 О/ и вновь центрифу гируют при 20000 хд в течение 45 мин. Фрагменты хлоропластов собирают и ресуспендируют в среде А. Измерения проводятся по примеру 1.Формула изобретения 10 Способ определения количества реакционных центров фотосистемы двух растений, включающий определение концентрации хлорофилла в исследуемом образце и последующее спектрофотометри ческое измерение фотоиндуцированных изменений поглощения образца, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа, в качестве исследуемого образца используют клетки 20 или хлоропласты или субхлоропластные частицы, спектрофотометрическое измерение проводят в среде, содержащей 25 - 100 мкМ силикомолибдата натрия и 0,5 - 1 мМ этилендиаминтетраацетата натрия, а количество 25 реакционных центров фотосистемы 2 определяют по количеству первичного донора электрона фотосистемы 2-П 6 во.