Способ определения эндотоксикоза

(51)5О 01 М ЗЗ ИСАНИЕ ЗОБ Т ИЯ К АВТО У СВ ЕЛЬ ТВ(57) Изобретен касается спасо коза у больных изобретения яв определения. крови фракцио фореза в полиак чии в составе фракции полип ределяют эндот значительно по ки заболеваний кий институтМечниковатребова, С,С ва В.И. Клинис, 138 - 140,Я ЭНДОТОК ОСУДАРСТВЕННЫй КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ РИ ГКНТ СССР(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНСИКОЗА Изобретение относится к медицине и касается способа определения эндотоксикоза у больных различного профиля.Цель изобретения - повышение точноСпособ осуществляется следующим образом,Готовят 10 ф-ный полиакриламидный гель (ПААГ). К 20 мл 30-ного водного раствора акриламида приливают 15 мл 1,5 М трис-НО буферного раствора с рН 8,8, Добавляют 24,7 мл дистиллированной воды.0,3 мл 1-ного персульфата аммония и 20 мкл тетраметилдиамина (ТЕМЕД). Смесью заливают промежуток между двумя стеклами стеклянных пластин для вертикального элетрофореза и дают заполимеризоваться. Приготовленной смеси достаточно для получения двух полиакриламидных пластин.Готовят концентрирующий гель. К 2,66 мл 30;(-ного акриламида прибавляют 5 мл 0,5 М трис-НС буферного раствора с рН 6,8, 12.2 мл дистиллированной воды, 100 мкл 1 ф-ного персульфата аммония и 10 мкл ТЕМЕД. В оставшееся между стеклами пространство с 10-ным ПААГ заливают5 Ц 1662678 ие относится к медицине и бов определения эндотоксираэличного профиля, Целью ляется повышение точности Для этого белки сыворотки нируют с помощью электрориламидном геле, При налибелков сыворотки крови ептидов с мол. мас, 9 кД опоксикоз, Способ позволяет высить точность диагностиприготовленную смесь и дают еи заполимеризоваться. Предварительно в это пространство вставляют "гребенку". После того, как гель заполимеризуется. "гребенку" вынимают, В геле остаются лунки для образцов.Готовят образцы для анализа, К 1 мл сыворотки больного добавляют 0,5 мл 10 фной ТХУ, выпавший осадок отделяют центрифугированием, а супернатант используют для анализа, Перед анализом к 100 мкл супернатанта добавляют 12 мкл глицерина.Проведение электрофореза, Две пластины помещают в камеру для вертикального электрофореза. Верхний и нижний сосуды камеры заполняют трис-глициновым буферным раствором (0,025 М) с рН 8,3-8,5, содержащим 0,1;6 додецилсульфата натрия. Подготовленные образцы вносят под буфером в лунки концентрирующего геля в количестве 100 мкл. Стандартные растворы белков вносят аналогичным образом. Обычно в качестве стандартов используют готовые смеси, содержащие белки с мол. м, 9 кД. Злектрофррез проводят в приборе для вертикального электрофореза, Условия элект1662678 Формула изобретения Составитель Э. ЦыгановТехред М,Моргентал Корректор М. Кучерявая Редактор М. Келемеш Заказ 2220 Тираж 414 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 рофореза: длительность 3 - 4 ч, напряжение 180 В, сила тока 50-55 мА.Фиксация, окраска, отмывка геля и анализ результатов, После окончания электрофореза гель освобождают из стеклянных 5 пластин и помещают для фиксации в 15 ф- ную ТХУ на 2 ч. После фиксации пластины окрашивают в 1-ном растворе кумаси й, приготовленном на смеси вода: уксусная кислота (1:1) в течение 18 ч при комнатной 10 температуре или 2 - 3 ч при 37 чС, После окраски пластины отмывают в растворе, содержащем уксусную кислоту, метанол и воду в соотношении 2;7:10, добиваясь бледно-голубого фона. Последняя порция от мывки должна содержать 10 глицерина. Отмытые пластины высушивают между двумя слоями целофана под прессом. При визуальной оценке результатов определяют наличие на пластинах окрашенных полос 20 полипептидов с мол, м. 9 кД. Просушенные пластины можно денситометрировать. В этом случает по величине пиков, принадлежащих белковым фракциям е мол. м, 9 кД, определяют активность процесса, 25П р им ер 1. Больной К,70 лет. Поступил с жалобами на боль в области сердца, Диагноз при поступлении: ишемическая болезнь сердца. При обследовании с помощью предлагаемого способа обнаружена 30 фракция полипептидов с мол. м 9 кД, что свидетельствует о наличии эндотоксикоза, При отсутствии жалоб и удовлетворительном состоянии после проведения лечения больной переведен в общестоматическое от деление. Однако через 3 сут у больного развился острый трансмуральный инфаркт миокарда.П р и м е р 2. Больной П, 52.года, Поступил с жалобами на боль в эпигастрии, 40 похудания. Диагноз при поступлении: рак желудка, До и после операции в сывороткекрови четко определяли наличие фракций полипептидов с мол. м. 9 кД, что свидетельствует о наличии эндотоксикоза, нарастала сердечно-легочная недостаточность, Патологоанатомический диагноз: правосторонняя бронхопневмония, несостоятельность операционных швов, гнойный медиастенит.П р и м е р 3. Больной 3,20 лет. Поступил с жалобами на схваткообразные боли в животе, слабость, тошноту. Диагноз при поступлении: острая кишечная непроходимость, При обследовании по предлагаемому способу обнаружена фракция полипептидов с мол. м, 9 кД, что свидетельствует о наличии эндотоксикоза. Больной оперирован, Диагноз: прободная язва двенадцатиперсной кишки, разлитой гнойный перитонит. При выздоровлении содержание полипептидов с мол. м. 9 кД в сыворотке крови снижалось до их полного изчезновения.Таким образом, наличие в сыворотке крови фракции полипептидов с мол. м, 9 кД с высокой степенью точности свидетельствует об эндотоксикоэе и имеет не только диагностическое, но и прогностическое значение,Способ определения эндотоксикоза путем клинико-лабораторного обследования,отл ич а ю щи йся тем, что, с целью повышения точности, дополнительно определяют фракционный состав полипептидов сыворотки крови с помощью электрофореза в полиакриламидном геле и при наличии фракции с мол, м. 9 кД определяют эндотоксикоз.