Способ выявления вирулентности эшерихий

(21) 4693788/13 (22) 22.05.89 (46) 15,05,91, Бюл (71) Республикан ский центр Минз (72) Л.В.Григорье (53) 576,8,093,1 (О (56) Авторское св М 1393849, кл. С.%18ский научный гигиеничедрава УССРва и Л.А,Малахова88.8)идетельство СССР12 0 1/04, 1986.Я ВИРУЛЕНТ медицинскои явления вируизобретения - . Выделенные хий засевают об ской вируетение относится к медицогии и касается выявлениэшерихий.зобретения - повышение икроб оМний нтности Цельива- ыратриГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИНОСТИ ЭШЕРИХИЙ(57) Изобретение относитсямикробиологии и касается влентности эшерихий. Цельповышение точности способштаммы патогенных эшери сти способа,Способ осуществляется следующим образом.Выделенные штаммы патогенных эшерихий различных серогрупп засевают секторами по 6-8 штаммов нэ одну чашку с мясопептонным агаром (МПА), Для получения более четкого результата МПА осветляют путем фильтрации в горячем виде через ватно-марлевый фильтр, последующего отстаивания и декантирования.Посевы в чашках инкубируют в термостате при 37+ 0,2 С в течение 16 - 20 ч, т,е. до получения четкого роста по штриху. На выросшие культуры осторожно, не касаясь штриха посева и поверхности питательной среды, вносят пипеткой 4-5 см раствора3азурэозина по Романовскому, разведенного секторами по 6-8 штаммов на одну чашку с мясопептонным агаром, инкубируют в термостате при 37 + 0,2"С в течение 16-20 ч. На выросшие культуры вносят пипеткой 4-5 см раствора эзурэозина по Рома 3новскому, дополнительно разведенного 1:10 дистиллированной водой. Через 1-2 мин краску сливают и учитывают наличие темно-синего или черного скрашивания роста вирулентных штаммов. Способ дает совпадающие результаты со способами Н 1 у, СГА, ККП (соответственно гемолиз в среде с 5 эритроцитов, О-маннозорезистентная гемаглютинация, кератоконъюнктивальная проба). 1 табл,1;10 дистиллированной водой. Через 1-2мин краску сливают и при наличии темн -синего ( или черного) окрашивания калокультуру относят к вирулентной,Колонии и штриховой рост невирулентных штаммов патогенных эшерихий остаются бесцветными или окрашенными лишь покраям в светло-зеленоватый или голубоватый оттенок.Для учета степени выраженности вирулентности используют следующую систему:4+ - черное окрэшивание (резко выраженная реакция);3+ - темно-синее окрашивание (выраженная реакция);,2+ - синее окрашивание (положительная реакция);1+ - зеленовато-голубоватое окрашние всего штриха или колонии (слабо вженная реакция;"=" - слабое окрашивание по краю шхэ или колонии (сомнительная реакция);. Веселовская Техред М,Маргентал Корректор О, Кравцова едак Заказ 1499 Тираж 370 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101" - " отсутствие окрашивания роста (отрицательная реакция),Вирулентными штаммами считаютлишь те, которые дают реакцию не менеечем на 2 плюса, 5Данным способом изучена вирулентность 167 штаммов патогенных эшерихий,выделенных из различных источников, Положительйый результат выявлен в26,9+3,2 культур, 10 В таблице приведены сравнительныеданные по выявлению вирулентности эшерихий предлагаемым способом и тремя другими: Ну, СРА и ККП, 15Как видно из приведенных данных,предлагаемый способ дал совпадающие рефльтаты со статистически несущественными различиями (т = 0,8-1,8),20Совпадающие результаты предлагаемого метода с тремя другими достигают46,7 О, а при сравнении с шестью другимиспособами (культур клеток и др) - до 77 г 78 ф 4.25 У 60 штаммов совпадение положительных результатов наблюдают по 3 - 4 способам, а в 18 - по 5-6. Уостальных 22 было совпадение по 2 способам или вообще не выявлено такового.Преимущества предлагаемого способа заключаются в его экспрессности (3-5 мин), простоте, экономичности, четкости результатов, высокой чувствительности, воспроизводимости на простой питательной среде (МПА), доступной для любой бактериологической лаборатории.Формула изобретения Способ. определения вирулентности эшерихий, включающий выращивание чистой культуры на плотной питательной среде, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, на выросшую культуру наносят стандартный раствор азурзозина по Романовскому в разведении 1:10 дистиллированной водой на 1-2 мин, затем краску удаляют и при наличии черного или темно-синего окрашивания колоний культуру относят к вирулентной,